謝美華+李霖+李雪玲+楊海艷+王振吉+范樹國(guó)

摘要：對(duì)紅豆杉葉斑病進(jìn)行病原鑒定，并研究其生物學(xué)特性和殺菌劑對(duì)其抑制作用。結(jié)果表明，該病原菌為交鏈孢屬真菌；該病原菌最適宜生長(zhǎng)的碳源為可溶性淀粉，氮源為硝酸鈉。菌絲適宜生長(zhǎng)的溫度范圍較窄，最適菌絲生長(zhǎng)的溫度是28℃；菌絲適宜生長(zhǎng)的pH值范圍較廣，在pH值2.5～10.9之間均能生長(zhǎng)；光周期對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響不大。供試的殺菌劑中以百菌清的抑菌效果最好。

關(guān)鍵詞：云南紅豆杉；葉斑??；病原鑒定；生物學(xué)特性；交鏈孢屬

中圖分類號(hào)：S763.15文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0146-04

云南紅豆杉（TaxusyunnanensisChengetLu）別稱紫杉、赤柏松，屬紅豆杉科喬木，產(chǎn)于云南西北部及西部、四川西南部與西藏東部，是生產(chǎn)紫杉醇的主要樹種[1-3]。云南紅豆杉是集用材、藥用、綠化于一體的珍貴樹種，特別是其紫杉醇含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他紅豆杉樹種[4]。紫杉醇具有抗癌活性，云南紅豆杉的野生資源比較少，人工培育紅豆杉是目前獲取紫杉醇最可行、有效的途徑[1，5]。為了更好地保護(hù)野生云南紅豆杉野生資源，大力培育后續(xù)產(chǎn)業(yè)，以滿足市場(chǎng)對(duì)云南紅豆杉資源的需求，近年來(lái)在云南麗江、大理、楚雄和丘北等地建立了云南紅豆杉人工種植林。由于云南紅豆杉的廣泛栽培，病害發(fā)生嚴(yán)重，尤其是云南紅豆杉葉片葉斑病現(xiàn)象日趨普遍，影響了樹勢(shì)生長(zhǎng)及藥用、觀賞價(jià)值。分離與鑒定病原菌是開展云南紅豆杉抗病防治研究的基礎(chǔ)。本試驗(yàn)從自然感病的云南紅豆杉上分離純化得到1株對(duì)云南紅豆杉具有寄生作用的真菌，利用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)觀察與現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的方法，對(duì)云南紅豆杉葉斑病病原菌進(jìn)行了鑒定，并依據(jù)其形態(tài)特點(diǎn)與培養(yǎng)性狀進(jìn)行了初步研究，為云南紅豆杉葉斑病的防治奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)也為進(jìn)一步了解該病害的發(fā)病規(guī)律提供了一定的理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1病原菌的分離

云南紅豆杉葉斑病葉片采自云南省楚雄市西山，用組織分離法分離病原菌，經(jīng)科赫氏法鑒定其為云南紅豆杉葉斑病的病原，菌株編號(hào)為hongdoushan02。

1.2病原菌的鑒定

1.2.1形態(tài)學(xué)鑒定利用顯微鏡觀察純化分離到的病原菌，并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)鑒定。

1.2.2病原菌rDNA-ITS序列擴(kuò)增和分析用CTAB法提取病原菌全基因組DNA，進(jìn)行ITS-PCR擴(kuò)增。引物序列為ITS4：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′；ITS5：5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′。PCR反應(yīng)體系總體積25μL，反應(yīng)各成分終濃度為：Taq酶0.02U/μL、引物0.4μmol/L、DNA模板20ng/μL、dNTPs0.4μmol/L、2×PCR反應(yīng)緩沖液。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，52℃退火45s，72℃復(fù)性45s，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。擴(kuò)增產(chǎn)物送北京百泰克生物技術(shù)有限公司測(cè)序，所得序列在NCBI上比對(duì)，下載與其相似性較高的序列及其近似屬的序列，用BioEdit、ClustalX和MEGA4.1軟件采用NJ法進(jìn)行系統(tǒng)分析，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

1.3生物學(xué)特性研究[6-7]

1.3.1不同碳源和氮源對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

以察氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別以葡萄糖、甘油、D-果糖、D-半乳糖、乳糖、可溶性淀粉等量取代其碳源；分別以硫酸銨、硝酸銨、甘氨酸、L-苯丙氨酸、牛肉膏、蛋白胨取代氮源。每種培養(yǎng)基中分別接種直徑為5mm的菌塊，25℃恒溫黑暗培養(yǎng)，5d后用“十”字交叉法測(cè)量菌落直徑。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.3.2不同溫度對(duì)菌落和分生孢子萌發(fā)的影響

取直徑為5mm的菌塊接種于察氏培養(yǎng)基中央，分別在5、10、15、20、25、28、30、32、35、40、45℃黑暗下恒溫培養(yǎng)，5d后測(cè)量菌落直徑。用無(wú)菌水制備菌懸液，滴于載玻片上，培養(yǎng)條件同菌落培養(yǎng)，24h后鏡檢孢子萌發(fā)率，每次檢100個(gè)孢子。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.3.3不同pH值對(duì)菌落和分生孢子萌發(fā)的影響

將高壓滅菌后的察氏培養(yǎng)基pH值分別調(diào)為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、10.9倒平板，取直徑5mm的菌塊接種于察氏培養(yǎng)基中央，黑暗條件下25℃培養(yǎng)5d后測(cè)量菌落直徑。用0.2mol/L磷酸氫二鈉和0.2mol/L檸檬酸緩沖液將分生孢子懸浮液pH值調(diào)配為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、10.9，置于25℃恒溫箱黑暗培養(yǎng)，24h后鏡檢萌發(fā)率，每次檢100個(gè)孢子。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.3.4不同光照處理

取直徑為5mm的菌塊接種于察氏培養(yǎng)基中央，分別置于24h光照、12h/12h光暗交替、24h黑暗環(huán)境中，25℃培養(yǎng)5d后測(cè)量菌落直徑。用無(wú)菌水制備菌懸液，滴于載玻片上，培養(yǎng)條件同菌落培養(yǎng)，24h后鏡檢孢子萌發(fā)率，每次鏡檢100個(gè)孢子。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.4不同殺菌劑對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響

將代森錳鋅、百菌清、敵克松、霜·錳鋅和撲海因用無(wú)菌水按其常用倍數(shù)稀釋，每10mL培養(yǎng)基中加入1mL藥液制成含藥液的平板，對(duì)照組加入等量無(wú)菌水。取5mm菌塊置于察氏培養(yǎng)基平板中央，25℃黑暗培養(yǎng)5d后測(cè)量菌落直徑。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。

2結(jié)果與分析

2.1云南紅豆杉病原菌的鑒定

2.1.1形態(tài)學(xué)鑒定

該病主要發(fā)生在葉部，發(fā)病初期葉片中部出現(xiàn)多個(gè)黃褐色病斑，病斑邊緣黑色，隨著病情的發(fā)展，可延伸至整個(gè)葉片，使葉片枯萎死亡。在PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)6d菌落直徑達(dá)4cm，菌落青灰色相間，圓形、規(guī)則，邊緣整齊，菌絲絮狀，培養(yǎng)一段時(shí)間后可看到培養(yǎng)皿蓋上有水珠；背面輪紋狀，中心圓褐色，外圍一環(huán)黃色；菌落生長(zhǎng)緩慢（圖1）。菌絲有隔，淡褐色，產(chǎn)孢細(xì)胞孔生式產(chǎn)孢，合軸式延伸或有時(shí)不再延伸；分生孢子多串生（向頂系列），有的單生，卵形或倒棍棒形，具喙，淡橄欖褐至橄欖褐色或褐色，光滑，具橫隔膜及縱向隔膜，大?。?.4～6.2）μm×（2.9～7.1）μm（平均2.65μm×6.65μm）。分生孢子頂端或喙部，?？咨疆a(chǎn)生新的分生孢子，如此聯(lián)系產(chǎn)生，形成分枝或不分枝的孢子鏈（圖2、圖3）。

2.1.2病原菌rDNA-ITS序列分析

將hongdoushan02菌株的5.8SrDNA-ITS序列在NCBI里進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)果顯示hongdoushan02與交鏈孢屬（Alternariasp.）、白菜黑斑病菌（A.brassicae）、煙草赤星病菌（A.alternata）和UnculturedAlternariaclone同源性最高，下載它們的序列，以Corynesporacassiicola為外群，用BioEdit、ClustalX和MEGA4.1軟件采用NJ法進(jìn)行系統(tǒng)分析，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖4）。結(jié)果顯示，與其遺傳距離較近的有4個(gè)種，屬內(nèi)節(jié)點(diǎn)支持率為1.00，結(jié)合其形態(tài)特征的觀察研究，供試菌株hongdoushan02為絲孢綱（Hyphomycetes）絲孢目（Hyphomycetales）暗色孢科（Dematiaceae）交鏈孢屬[8-16]，病原菌的種待定。

2.2不同氮源和碳源對(duì)hongdoushan02菌落生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明，該菌對(duì)供試的7種氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度有明顯差異。最適該菌生長(zhǎng)的氮源是硝酸鈉，與牛肉膏、蛋白胨和甘氨酸差異不顯著，與其他氮源差異顯著（P<0.05）。最適該菌生長(zhǎng)的碳源是可溶性淀粉，與蔗糖和D-半乳糖差異顯著（P<0.05），與其他碳源差異不顯著。

2.3不同光照對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

通過(guò)24h光照、12h光/暗交替、黑暗培養(yǎng)，結(jié)果（圖5）表明，有無(wú)光照對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響差異不顯著。

2.4不同溫度對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖6）表明，該病原菌所能適應(yīng)的溫度范圍較窄，只能在15～30℃范圍內(nèi)生長(zhǎng)，最適的生長(zhǎng)溫度是28℃，與25℃處理差異顯著（P<0.05），與其他處理差異極顯著（P<0.01）。該病原菌在5、10、32℃及以上溫度不能生長(zhǎng)。

2.5不同pH值對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖7）表明，菌絲生長(zhǎng)適應(yīng)的pH值范圍較廣，在pH值2.5～10.9之間均能生長(zhǎng)，不同的pH值條件下菌絲的生長(zhǎng)差異不顯著。

2.6不同殺菌劑對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖8）表明，與對(duì)照相比，5種廣譜殺菌劑對(duì)該菌的生長(zhǎng)均有抑制作用。百菌清對(duì)該菌的抑制效果最好，隨后依次是撲海因、霜·錳鋅、代森錳鋅，效果最差的是敵克松。百菌清的抑菌效果和撲海因差異不顯著，與霜·錳鋅差異顯著，與敵克松和代森錳鋅差異極顯著。

3結(jié)論與討論

3.1病原菌的分離鑒定

云南紅豆杉更新能力差，對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境有較高要求，天然分布區(qū)域狹窄，生長(zhǎng)緩慢，對(duì)生存空間競(jìng)爭(zhēng)能力差。為了滿足市場(chǎng)對(duì)云南紅豆杉資源的需求，近年來(lái)云南省多個(gè)地區(qū)已進(jìn)行大量的人工栽培。本研究通過(guò)對(duì)云南紅豆杉葉斑病病原菌進(jìn)行分離純化，利用形態(tài)學(xué)特征觀察并結(jié)合分子生物學(xué)手段進(jìn)行分析鑒定[11-12]，結(jié)果表明，兩者的鑒定結(jié)果相互吻合一致，初步推測(cè)病原菌為交鏈孢屬真菌。

3.2病原菌生物學(xué)特性研究

本研究結(jié)果表明，該菌對(duì)供試的7種氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度有明顯差異，最適該菌生長(zhǎng)的的氮源是硝酸鈉，最適該菌生長(zhǎng)的碳源是可溶性淀粉。該病原菌適宜生長(zhǎng)的溫度范圍較窄，最適菌絲生長(zhǎng)的溫度是28℃，在5、10、32℃及以上溫度條件下停止生長(zhǎng)；菌絲適宜生長(zhǎng)的pH值范圍均較廣，在pH值2.5～10.9之間均能生長(zhǎng)；有無(wú)光照對(duì)菌落生長(zhǎng)影響不顯著。

3.3廣譜殺菌劑對(duì)該菌生長(zhǎng)的影響

在本研究中5種廣譜殺菌劑對(duì)該菌落的生長(zhǎng)均有抑制作用。百菌清對(duì)該菌的抑制效果最好，隨后依次是撲海因、霜·錳鋅、代森錳鋅，效果最差的是敵克松。該菌的生物學(xué)特性研究都是在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，相對(duì)于人工大面積種植時(shí)復(fù)雜的生長(zhǎng)環(huán)境，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境相對(duì)單一。因此，要確定該病害的生物學(xué)特性，哪一種殺菌劑對(duì)該菌的抑制作用最好，還有待進(jìn)一步的大田試驗(yàn)研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]李良群，楊艷光，曾英，等.云南紅豆杉內(nèi)生真菌Talaromycessp.T1BF的化學(xué)成分研究[J].廣西植物，2011，31（5）：699-701.

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2.1.2病原菌rDNA-ITS序列分析

將hongdoushan02菌株的5.8SrDNA-ITS序列在NCBI里進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)果顯示hongdoushan02與交鏈孢屬（Alternariasp.）、白菜黑斑病菌（A.brassicae）、煙草赤星病菌（A.alternata）和UnculturedAlternariaclone同源性最高，下載它們的序列，以Corynesporacassiicola為外群，用BioEdit、ClustalX和MEGA4.1軟件采用NJ法進(jìn)行系統(tǒng)分析，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖4）。結(jié)果顯示，與其遺傳距離較近的有4個(gè)種，屬內(nèi)節(jié)點(diǎn)支持率為1.00，結(jié)合其形態(tài)特征的觀察研究，供試菌株hongdoushan02為絲孢綱（Hyphomycetes）絲孢目（Hyphomycetales）暗色孢科（Dematiaceae）交鏈孢屬[8-16]，病原菌的種待定。

2.2不同氮源和碳源對(duì)hongdoushan02菌落生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明，該菌對(duì)供試的7種氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度有明顯差異。最適該菌生長(zhǎng)的氮源是硝酸鈉，與牛肉膏、蛋白胨和甘氨酸差異不顯著，與其他氮源差異顯著（P<0.05）。最適該菌生長(zhǎng)的碳源是可溶性淀粉，與蔗糖和D-半乳糖差異顯著（P<0.05），與其他碳源差異不顯著。

2.3不同光照對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

通過(guò)24h光照、12h光/暗交替、黑暗培養(yǎng)，結(jié)果（圖5）表明，有無(wú)光照對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響差異不顯著。

2.4不同溫度對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖6）表明，該病原菌所能適應(yīng)的溫度范圍較窄，只能在15～30℃范圍內(nèi)生長(zhǎng)，最適的生長(zhǎng)溫度是28℃，與25℃處理差異顯著（P<0.05），與其他處理差異極顯著（P<0.01）。該病原菌在5、10、32℃及以上溫度不能生長(zhǎng)。

2.5不同pH值對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖7）表明，菌絲生長(zhǎng)適應(yīng)的pH值范圍較廣，在pH值2.5～10.9之間均能生長(zhǎng)，不同的pH值條件下菌絲的生長(zhǎng)差異不顯著。

2.6不同殺菌劑對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖8）表明，與對(duì)照相比，5種廣譜殺菌劑對(duì)該菌的生長(zhǎng)均有抑制作用。百菌清對(duì)該菌的抑制效果最好，隨后依次是撲海因、霜·錳鋅、代森錳鋅，效果最差的是敵克松。百菌清的抑菌效果和撲海因差異不顯著，與霜·錳鋅差異顯著，與敵克松和代森錳鋅差異極顯著。

3結(jié)論與討論

3.1病原菌的分離鑒定

云南紅豆杉更新能力差，對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境有較高要求，天然分布區(qū)域狹窄，生長(zhǎng)緩慢，對(duì)生存空間競(jìng)爭(zhēng)能力差。為了滿足市場(chǎng)對(duì)云南紅豆杉資源的需求，近年來(lái)云南省多個(gè)地區(qū)已進(jìn)行大量的人工栽培。本研究通過(guò)對(duì)云南紅豆杉葉斑病病原菌進(jìn)行分離純化，利用形態(tài)學(xué)特征觀察并結(jié)合分子生物學(xué)手段進(jìn)行分析鑒定[11-12]，結(jié)果表明，兩者的鑒定結(jié)果相互吻合一致，初步推測(cè)病原菌為交鏈孢屬真菌。

3.2病原菌生物學(xué)特性研究

本研究結(jié)果表明，該菌對(duì)供試的7種氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度有明顯差異，最適該菌生長(zhǎng)的的氮源是硝酸鈉，最適該菌生長(zhǎng)的碳源是可溶性淀粉。該病原菌適宜生長(zhǎng)的溫度范圍較窄，最適菌絲生長(zhǎng)的溫度是28℃，在5、10、32℃及以上溫度條件下停止生長(zhǎng)；菌絲適宜生長(zhǎng)的pH值范圍均較廣，在pH值2.5～10.9之間均能生長(zhǎng)；有無(wú)光照對(duì)菌落生長(zhǎng)影響不顯著。

3.3廣譜殺菌劑對(duì)該菌生長(zhǎng)的影響

在本研究中5種廣譜殺菌劑對(duì)該菌落的生長(zhǎng)均有抑制作用。百菌清對(duì)該菌的抑制效果最好，隨后依次是撲海因、霜·錳鋅、代森錳鋅，效果最差的是敵克松。該菌的生物學(xué)特性研究都是在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，相對(duì)于人工大面積種植時(shí)復(fù)雜的生長(zhǎng)環(huán)境，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境相對(duì)單一。因此，要確定該病害的生物學(xué)特性，哪一種殺菌劑對(duì)該菌的抑制作用最好，還有待進(jìn)一步的大田試驗(yàn)研究。

參考文獻(xiàn)：

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[4]王磊，張勁峰，歐曉昆，等.麗江試驗(yàn)區(qū)須彌紅豆杉幼苗生長(zhǎng)特征及紫杉醇含量變化研究[J].西部林業(yè)科學(xué)，2013，42（4）：58-62.

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2.1.2病原菌rDNA-ITS序列分析

將hongdoushan02菌株的5.8SrDNA-ITS序列在NCBI里進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)果顯示hongdoushan02與交鏈孢屬（Alternariasp.）、白菜黑斑病菌（A.brassicae）、煙草赤星病菌（A.alternata）和UnculturedAlternariaclone同源性最高，下載它們的序列，以Corynesporacassiicola為外群，用BioEdit、ClustalX和MEGA4.1軟件采用NJ法進(jìn)行系統(tǒng)分析，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖4）。結(jié)果顯示，與其遺傳距離較近的有4個(gè)種，屬內(nèi)節(jié)點(diǎn)支持率為1.00，結(jié)合其形態(tài)特征的觀察研究，供試菌株hongdoushan02為絲孢綱（Hyphomycetes）絲孢目（Hyphomycetales）暗色孢科（Dematiaceae）交鏈孢屬[8-16]，病原菌的種待定。

2.2不同氮源和碳源對(duì)hongdoushan02菌落生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明，該菌對(duì)供試的7種氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度有明顯差異。最適該菌生長(zhǎng)的氮源是硝酸鈉，與牛肉膏、蛋白胨和甘氨酸差異不顯著，與其他氮源差異顯著（P<0.05）。最適該菌生長(zhǎng)的碳源是可溶性淀粉，與蔗糖和D-半乳糖差異顯著（P<0.05），與其他碳源差異不顯著。

2.3不同光照對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

通過(guò)24h光照、12h光/暗交替、黑暗培養(yǎng)，結(jié)果（圖5）表明，有無(wú)光照對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響差異不顯著。

2.4不同溫度對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖6）表明，該病原菌所能適應(yīng)的溫度范圍較窄，只能在15～30℃范圍內(nèi)生長(zhǎng)，最適的生長(zhǎng)溫度是28℃，與25℃處理差異顯著（P<0.05），與其他處理差異極顯著（P<0.01）。該病原菌在5、10、32℃及以上溫度不能生長(zhǎng)。

2.5不同pH值對(duì)hongdoushan02菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖7）表明，菌絲生長(zhǎng)適應(yīng)的pH值范圍較廣，在pH值2.5～10.9之間均能生長(zhǎng)，不同的pH值條件下菌絲的生長(zhǎng)差異不顯著。

2.6不同殺菌劑對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖8）表明，與對(duì)照相比，5種廣譜殺菌劑對(duì)該菌的生長(zhǎng)均有抑制作用。百菌清對(duì)該菌的抑制效果最好，隨后依次是撲海因、霜·錳鋅、代森錳鋅，效果最差的是敵克松。百菌清的抑菌效果和撲海因差異不顯著，與霜·錳鋅差異顯著，與敵克松和代森錳鋅差異極顯著。

3結(jié)論與討論

3.1病原菌的分離鑒定

云南紅豆杉更新能力差，對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境有較高要求，天然分布區(qū)域狹窄，生長(zhǎng)緩慢，對(duì)生存空間競(jìng)爭(zhēng)能力差。為了滿足市場(chǎng)對(duì)云南紅豆杉資源的需求，近年來(lái)云南省多個(gè)地區(qū)已進(jìn)行大量的人工栽培。本研究通過(guò)對(duì)云南紅豆杉葉斑病病原菌進(jìn)行分離純化，利用形態(tài)學(xué)特征觀察并結(jié)合分子生物學(xué)手段進(jìn)行分析鑒定[11-12]，結(jié)果表明，兩者的鑒定結(jié)果相互吻合一致，初步推測(cè)病原菌為交鏈孢屬真菌。

3.2病原菌生物學(xué)特性研究

本研究結(jié)果表明，該菌對(duì)供試的7種氮源和碳源均能利用，菌落在不同氮源和碳源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度有明顯差異，最適該菌生長(zhǎng)的的氮源是硝酸鈉，最適該菌生長(zhǎng)的碳源是可溶性淀粉。該病原菌適宜生長(zhǎng)的溫度范圍較窄，最適菌絲生長(zhǎng)的溫度是28℃，在5、10、32℃及以上溫度條件下停止生長(zhǎng)；菌絲適宜生長(zhǎng)的pH值范圍均較廣，在pH值2.5～10.9之間均能生長(zhǎng)；有無(wú)光照對(duì)菌落生長(zhǎng)影響不顯著。

3.3廣譜殺菌劑對(duì)該菌生長(zhǎng)的影響

在本研究中5種廣譜殺菌劑對(duì)該菌落的生長(zhǎng)均有抑制作用。百菌清對(duì)該菌的抑制效果最好，隨后依次是撲海因、霜·錳鋅、代森錳鋅，效果最差的是敵克松。該菌的生物學(xué)特性研究都是在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，相對(duì)于人工大面積種植時(shí)復(fù)雜的生長(zhǎng)環(huán)境，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境相對(duì)單一。因此，要確定該病害的生物學(xué)特性，哪一種殺菌劑對(duì)該菌的抑制作用最好，還有待進(jìn)一步的大田試驗(yàn)研究。

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