朱成晶，朱鴨梅，李穩(wěn)，劉佩佩，李新麗

(江蘇省理化測試中心，南京 210042)

LC-MS／MS法檢測黑色糧谷類食品中的蘇丹黑B和蘇丹紅B

朱成晶，朱鴨梅，李穩(wěn)，劉佩佩，李新麗

(江蘇省理化測試中心，南京 210042)

采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS／MS)法測定黑色糧谷類食品中蘇丹黑B和蘇丹紅B含量。用正己烷、飽和乙腈提取目標物，以乙腈飽和的正己烷去除油脂，以固相萃取柱富集凈化處理，外標法定量。蘇丹黑B和蘇丹紅B的質(zhì)量濃度在5～100 ng／mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性，線性相關(guān)系數(shù)r2＞0.999，檢出限為5 μg／kg。加標回收率為90.0%～96.0%，測定結(jié)果的相對標準偏差小于1.0% (n=6)。該方法分析時間短，準確性好，適用于黑色糧谷類食品中蘇丹黑B和蘇丹紅B含量的檢測分析。

蘇丹黑B；蘇丹紅B；LC-MS／MS；固相萃??；富集凈化

隨著科技的發(fā)展，越來越多的染料被應用到各個領(lǐng)域，偶氮類染料就是其中的一種。根據(jù)偶氮基數(shù)目的多少偶氮染料可分為單偶氮染料、雙偶氮染料及多偶氮染料，多出現(xiàn)于直接染料、酸性染料、活性染料、金屬絡合染料、分散染料、陽離子染料及縮聚染料等合成染料之中，用于多種天然和合成纖維的染色和印花，以及皮毛、塑料、橡膠、陶瓷制品、油脂等的著色。

偶氮類染料具有致癌性［1］，對人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用［2］，不可食用。但因為工業(yè)染料的價格比食用色素便宜，很多不法商販為了節(jié)省成本在有色食品中使用偶氮類染料進行染色，使得市場上很多食品的質(zhì)量得不到保證，如蘇丹黑B和蘇丹紅B常被不法商販用于食品染色。目前除了食品中蘇丹紅有國家標準檢測方法外［3-4］，其余的偶氮類染料在食品領(lǐng)域中還沒有相應的檢測方法。偶氮類染料在紡織品等工業(yè)產(chǎn)品中的檢測方法有薄層色譜法、液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、氣相色譜法等［5］，薄層色譜法只能定性不能準確定量；氣質(zhì)聯(lián)用法對于一些食品中基質(zhì)比較復雜樣品的抗干擾能力比較差，有時不能準確定性和定量；液相色譜不能完全杜絕假陽性的產(chǎn)生。筆者采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法［6-7］檢測黑色糧谷類食品中的蘇丹黑B和蘇丹紅B，方法定性、定量準確，有利于加強食品行業(yè)的監(jiān)督，保證黑色糧谷類食品的質(zhì)量。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent1260型，配有在線脫氣裝置、四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器，美國安捷侖科技公司；

高效液相色譜三重四級桿質(zhì)譜儀［8］：配有Agilent1260 Bin pump 、6430Triple Quad 1.2.3 LC／MS 配ESI源、二元梯度泵、在線脫氣裝置、自動進樣器、柱溫箱，美國安捷侖科技公司；

電子分析天平：BAS224S-CW型，萬分之一，賽多利斯科學儀器有限公司；

Florisil固相萃取柱：規(guī)格1 g／(6 mL)，使用前用5 mL正己烷活化［9］；

甲醇、乙腈：農(nóng)殘級；

甲酸：色譜純；

乙腈、正己烷、乙酸乙酯：分析純；

蘇丹黑B標準品：94.5%，美國Dr.Ehrenstorfer公司；

蘇丹紅B標準品：90%，美國Dr.Ehrenstorfer公司；

蘇丹黑B、蘇丹紅B標準儲備液：0.5 mg／mL，準確稱取蘇丹黑B和蘇丹紅B標準品0.005 00 g(精確到0.000 01)，于10 mL容量瓶中用乙腈溶解并定容至標線，4℃可保存6個月；

甲酸溶液：0.1%，吸取1 mL甲酸，用水稀釋至1 000 mL；

正己烷-乙酸乙酯洗脫液：正己烷與乙酸乙酯的體積比為8∶2；

乙腈水溶液：乙腈和水的體積比為1∶1。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 液相色譜參數(shù)

色譜柱：C18柱(50 mm×2.1 mm，1.8 μm)；流動相：乙腈-0.1%甲酸水溶液(體積比為90∶10)［2］；梯度洗脫，洗脫程序見表1；柱溫：35℃；進樣體積：20 μL。

表1 梯度洗脫程序

1.2.2 質(zhì)譜條件

干燥氣溫度：300℃；干燥氣流速：9 L／min；反吹起壓力：0.24 MPa；離子源電壓：4 000 V；質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 質(zhì)譜參數(shù)條件

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理方法

稱取2.00 g樣品(精確至0.001 g)置于50 mL塑料離心管中，加入10 mL正己烷飽和乙腈漩渦混勻后超聲提取20 min，以4 000 r／min離心3 min；上清液轉(zhuǎn)移到50 mL磨口的玻璃離心管中，殘渣用10 mL正己烷飽和乙腈重復提取一次，離心合并兩次的提取液，用乙腈飽和正己烷5 mL去除油脂，以3 000 r／min離心3 min，棄去上層正己烷層，乙腈層于40℃濃縮至干。用5 mL正己烷溶解后過Florisil固相萃取柱，用10 mL正己烷乙酸乙酯混合溶液洗脫，氮氣吹干，用1 mL乙腈水溶液溶解殘渣，過0.22 μm的濾膜，待測。

1.3.2 系列標準溶液配制

準確量取蘇丹紅B和蘇丹黑B標準儲備液適量，用乙腈配制成200 ng／mL的標準使用液。量取適量標準使用液，用乙腈水溶液配制成5，10，20，40，80，100 ng／mL系列標準工作溶液，分別進樣20 μL，進行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 波長選擇

配制蘇丹黑B和蘇丹紅B標準溶液，用紫外分光光度計進行全波長掃描，結(jié)果顯示蘇丹黑B和蘇丹紅B的吸收波長為600 nm時，可以得到最佳的靈敏度，因此確定檢測波長為600 nm。

2.2 色譜柱選擇

對幾種不同規(guī)格(250 mm×4.6 mm，5μm；150 mm×4.6 mm，5μm；100 mm×4.6 mm，3.5 μm，編號分別為1#，2#，3#，Agilent公司)的C18柱進行對照試驗，結(jié)果表明：1#柱在保證分離度的情況下，出峰時間較遲，峰形較寬；2#柱出鋒時間早但分離度不好；3#柱出峰時間適中，分離度良好，并且可以得到滿意的峰形。因此選擇Agilent 100 mm×4.6 mm，3.5 μm C18色譜柱，柱溫為40℃。

2.3 流動相的選擇

分別對甲醇、乙腈、甲酸銨、乙酸銨、甲酸等流動相進行試驗，試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在使用甲醇作為流動相時有機相出峰遲，峰形寬，壓力高；使用乙腈甲酸銨-甲酸水溶液和乙腈乙酸銨-甲酸水溶液為流動相時，峰形寬，不對稱且有拖尾；以乙腈-0.1%甲酸水溶液(體積比為90∶10)作為流動相時，可以得到滿意的峰形，具有合適的分離度和出峰時間。圖1為蘇丹黑B和蘇丹紅B標準溶液的液相色譜分離圖，圖2為質(zhì)譜總離子流圖和選擇離子監(jiān)測圖。蘇丹黑B子離子質(zhì)核比為77，182.2，194，蘇丹紅B的子離子質(zhì)核比為91.1，106，156。

圖1 蘇丹紅B、蘇丹黑B標準溶液色譜圖

圖2 蘇丹黑B、蘇丹紅B 標準溶液質(zhì)譜圖

2.4 樣品提取與凈化條件選擇

樣品處理時如果使用乙腈提取，正己烷去油回收率會因為乙腈和正己烷的互溶而降低，因此選擇用正己烷飽和的乙腈提取，并且去油時也采用乙腈飽和的正己烷。采用正己烷-乙酸乙酯混合溶液洗脫時，若乙酸乙酯含量過高，凈化效果較差。經(jīng)過試驗比較，采用正己烷-乙酸乙酯(體積比為8∶2)提取樣品，用量為10 mL時凈化效果最好。

2.5 線性方程與檢出限

在1.2儀器工作條件下，對10，20，40，80，100 ng／mL蘇丹黑B、蘇丹紅B系列標準工作溶液進行測定，以色譜峰面積(Y)為縱坐標，以質(zhì)量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸。蘇丹黑B的工作曲線方程為Y=76.693 560X+1.216 638，線性相關(guān)系數(shù)r2=0.999 4；蘇丹紅B的工作曲線方程為Y=422.571 100X+2 379.259 771，線性相關(guān)系數(shù)r2=0.999 6。

按公式LOD=CV／m計算檢出限，其中C為標準樣品儀器檢出信噪比為3時的質(zhì)量濃度(μg／mL)；V為樣品定容體積(mL)；m為樣品質(zhì)量(kg)。經(jīng)計算方法檢出限為5 μg／kg。

2.6 精密度試驗

對同一批添加標準樣品的黑豆、黑米、黑芝麻樣品做6次平行測定，結(jié)果見表3。由表3可見，測定結(jié)果的相對標準偏差小于1%，說明方法的精密度良好。

表3 精密度試驗結(jié)果 %

2.7 回收試驗

對同一批黑豆、黑米、黑芝麻樣品按實驗方法進行處理和測定，然后添加標準樣品溶液(添加水平為0.02，0.05，0.10 mg／kg)進行加標回收試驗，結(jié)果見表4。由表4可知，加標回收收率為90.0%～96.0%，說明該方法的準確度較高，滿足檢測要求。

表4 回收率試驗結(jié)果(n=6)

3 結(jié)語

通過試驗，篩選流動相和色譜柱，建立了黑色糧谷中蘇丹黑B和蘇丹紅B的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法。該法樣品前處理操作簡單，使用的有毒有害試劑較少，方法靈敏度高，穩(wěn)定性好，定性定量準確可靠。

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［10］ 王坤，趙浩軍，張燕，等.高效液相色譜法測定辣椒油中的蘇丹紅染料［J］.云南化工，2015(1): 38-41.

一種測定有機羧酸絕對含量的方法

公開號：CN104634886A公開日：2015.05.20

申請人：中國石油天然氣股份有限公司

摘要：本發(fā)明涉及一種測定有機羧酸絕對含量的方法。該方法以安捷倫液相色譜柱為分析柱，磷酸溶液作為樣品測試時的流動相，流速為1.2 mL／min，柱溫為40℃，紫外檢測器檢測波長為210 nm，進樣體積為5 μL，運行時間為25 min，外標法定量對有機羧酸絕對含量進行液相色譜分析，線性相關(guān)系數(shù)大于0.996 4，相對偏差小于5.0%。本發(fā)明對多種有機羧酸絕對含量同時進行了定量分析，其測定方法簡單、重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準確、靈敏度高，對提高有機羧酸產(chǎn)品質(zhì)量和降低生產(chǎn)成本起到了積極的推動作用。

高壓微量氣體取樣分析儀

公開號：CN104634621A公開日：2015.05.20

申請人：中國石油大學(北京)

摘要：本發(fā)明為一種高壓微量氣體取樣分析儀，該高壓微量氣體取樣分析儀包括有豎直設置的第一中間容器和第二中間容器，第一中間容器頂端通過第一管路與高壓氣體實驗裝置連接。第一中間容器與第二中間容器頂端之間連接有第二管路，該第二管路中設有微管，在微管與第二中間容器之間設有第一閥門；第二中間容器頂端并聯(lián)設有抽真空管路和被檢氣體吸入管路，抽真空管路中通過第二閥門連接有一真空泵，被檢氣體吸入管路中通過第三閥門連接有一氣相色譜儀。本發(fā)明利用氣體在微管中流動阻力控制壓差的方式進行氣體采集，可在高壓實驗條件下提取微量氣體混合物并進行在線分析，并且保證高壓氣體試驗裝置中壓力的穩(wěn)定和實驗的連續(xù)性。

一種檢測羅丹明B的電化學方法

公開號：CN104698047A公開日：2015.06.10

申請人：常州大學

摘要：本發(fā)明涉及電化學分析測試技術(shù)領(lǐng)域。一種檢測羅丹明B的電化學方法，以二氧化硅柱撐α-磷酸鋯修飾玻碳電極為工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉑片電極作為輔助電極，組成三電極體系進行檢測。本發(fā)明的有益效果是，利用二氧化硅柱撐α-磷酸鋯均勻有序的層狀結(jié)構(gòu)，其具有大的比表面積，優(yōu)異的吸附性能，結(jié)構(gòu)中的磷酸根陰離子與陽離子型色素羅丹明B可產(chǎn)生靜電吸附，而對于陰離子型違禁食品添加劑則產(chǎn)生靜電排斥的作用，可以在色素混合液中選擇性檢測羅丹明B，與其它檢測方法相比，簡單快速、易操作，用于實際樣品蜜餞及辣椒面中羅丹明B的測定，本測試方法具有較高的靈敏度、較好的選擇性。

一種食用油中鄰苯二甲酸酯類塑化劑的檢測方法

公開號：CN104698109A公開日：2015.06.10

申請人：中國科學院長春應用化學研究所

摘要：本申請屬于化學分析領(lǐng)域，尤其涉及一種食用油中鄰苯二甲酸酯類塑化劑的檢測方法。本申請?zhí)峁┑臋z測方法包括以下步驟：(1)食用油待測樣品、甲醇和堿進行反應，得到甲酯化待測樣品；(2)檢測所述甲酯化待測樣品，得到食用油中所含鄰苯二甲酸酯類塑化劑的種類和／或含量；檢測所述甲酯化待測樣品的方式包括氣相色譜檢測。本發(fā)明使用甲醇和堿對待測樣品進行甲酯化處理，使待測油樣中的甘油脂類物質(zhì)轉(zhuǎn)為脂肪酸甲酯，從而有效避免氣相色譜檢測過程中甘油脂在色譜柱中的殘留，延長了色譜柱的使用壽命。實驗結(jié)果表明，采用本發(fā)明提供的方法對食用油中鄰苯二甲酸酯類塑化劑進行檢測時，色譜柱的涂層不會受到損傷，色譜柱在200次實驗后仍可正常工作。

流域總氮快速分析方法

公開號：CN104596969A公開日：2015.05.06

申請人：四川清和科技有限公司

摘要：為了提高總氮分析速度，本發(fā)明提供了一種流域總氮快速分析方法，包括如下步驟：從待檢測流域采集樣本；將樣本分成兩份，分別加入不同濃度的氫氧化鉀溶液；均勻攪拌兩份樣本；對樣本進行過濾；對過硫酸鉀進行多次重結(jié)晶，然后向兩份樣本分別等量地加入該過硫酸鉀；將兩份樣本放入COD消解儀進行加熱；經(jīng)過一定時間后，取出兩份樣本水浴冷卻至室溫，然后對兩份樣本分別加入鹽酸；均勻攪拌兩份樣本；利用紫外分光光度計測定吸光度，并以兩份樣本的吸光度的平均值作為樣本的參考吸光度；繪制標準曲線并與所述參考吸光度進行比對，獲得待檢測流域的水體的總氮含量。本發(fā)明提高了總氮的分析速度和精度。

Determination of Sudan Black B and Sudan B in Black Grains by LC-MS／MS

Zhu Chengjing， Zhu Yamei， Li Wen， Liu Peipei， Li Xinli
(Physics & Chemistry Test Center of Jiangsu Province， Nanjing 210042， China)

A method for the determination of Sudan Black B and Sudan B in black grains by high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry(HPLC-MS／MS) was developed. Sudan black B and Sudan B was extracted from black grains by hexane and saturated acetonitrile and then the grease was removed by acetonitrile saturated with hexane. At last，the sample was purified and enriched by solid-phase extraction column. The concentration of Sudan black B and Sudan B was linear with peak area in the range of 5-100 ng／mL, the correlation coefficient(r2) was more than 0.999. The detection limit was 5 μg／kg. The recovery of standard addition was 90.0%-96.0%，and the relative standard deviation of determination results was less than 1.0% (n=6). The method is simple，accurate, which can be applied in the determination of Sudan Black B and Sudan B in black grains.

Sudan black B; Sudan B; LC-MS／MS; solid phase extraction; enrichment and purification

O657.7

：A

：1008-6145(2015)04-0058-04

10.3969／j.issn.1008-6145.2015.04.017

聯(lián)系人：朱成晶；E-mail: zhu103@163.com

2015-04-12