◎ 苗 翠

（遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

蘇丹紅是一種人工合成的偶氮類(lèi)、油溶性化工染色劑，在食品中使用具有增色的作用。蘇丹紅有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ共4種，經(jīng)毒理學(xué)研究表明，其具有造成人類(lèi)肝臟細(xì)胞的DNA突變，具有致癌致突變的特性[1-2]，在我國(guó)禁止使用于食品中。由于在目前有不法養(yǎng)殖戶(hù)為謀取利益在蛋禽飼養(yǎng)中違法添加，導(dǎo)致禽蛋中蘇丹紅殘留的情況時(shí)有發(fā)生，自2005年起，類(lèi)似肯德基、亨氏等一些大食品企業(yè)在北京、浙江等多省市均出現(xiàn)過(guò)蘇丹紅事件。北京市場(chǎng)上也曾出現(xiàn)“紅心鴨蛋事件”，據(jù)報(bào)道這些紅心鴨蛋是由于鴨農(nóng)在飼料中加入蘇丹紅Ⅳ造成的[3]。

目前，針對(duì)禽蛋中蘇丹紅殘留量檢測(cè)尚無(wú)明確的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，在監(jiān)管過(guò)程中多依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T 19681-2005《食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法》實(shí)施檢測(cè)[4-5]，但該準(zhǔn)標(biāo)對(duì)于禽蛋檢測(cè)中的陽(yáng)性樣品確證的準(zhǔn)確性不足，存在一定風(fēng)險(xiǎn)，難以滿(mǎn)足禽蛋中蘇丹紅殘留量檢測(cè)，本文研究建立了一種采用SDR專(zhuān)用固相萃取柱，回收率高、快捷、靈敏和穩(wěn)定的適用于禽蛋中蘇丹紅殘留的檢測(cè)方法，為監(jiān)管提供了有力技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1100高效液相色譜儀；紫外測(cè)器；色譜柱：Athena C18-WP液相色譜柱4.6×150 mm，5 μm；Mettler NE260分析天平；Therom Biofuge離心機(jī)；J.Tbaker ASEMD 60固相萃取裝置；Buchi V-700旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；美國(guó)Orgaomation公司N-EVAP112氮?dú)獯蹈蓛x；Stuart SA8渦旋混合器。

正己烷、丙酮、二氯甲烷、乙腈，均為色譜純；蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自Dr.Ehrenstorfer GmbH（蘇丹紅Ⅰ批號(hào)30619、蘇丹紅Ⅱ批號(hào)10615、蘇丹紅Ⅲ批號(hào)20619、蘇丹紅Ⅳ批號(hào)91102）；實(shí)驗(yàn)所用雞蛋均為遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心日常檢測(cè)樣品；實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)水；固相萃取柱為安普公司的sudanred專(zhuān)用柱。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別取蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解配制成蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ 0.1 mg/mL對(duì)照溶液。

1.3 樣品制備

稱(chēng)取煮熟的蛋黃樣品5 g于離心管中，加入10 mL正己烷勻漿5 min，3 000 r/min離心10min，吸取正己烷層，于下層中加入正己烷6 mL勻漿，離心，合并正己烷，加入5 g無(wú)水硫酸鈉脫水，過(guò)濾后待用。固相萃取小柱依次用5 mL二氯甲烷，5 mL正己烷活化，備用液過(guò)柱，5 mL正己烷淋洗，5 mL二氯甲烷洗脫，洗脫液于40 ℃下氮?dú)獯蹈?，用流?dòng)相1.0 mL定容，0.22 μm濾膜過(guò)濾，上機(jī)。

1.4 色譜條件

色譜柱：Athena C18-WP液相色譜柱，4.6×150 mm，5 μm；流動(dòng)相：乙腈∶水（95∶5，V∶V）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測(cè)器：波長(zhǎng)500 nm；柱溫：35 ℃進(jìn)樣量：20 μL。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 檢出限和定量限的確定

按照1.3要求，?。?±0.5）g雞蛋樣品，分別制備成一系列濃度的蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ樣品，按照本方法操作進(jìn)行，結(jié)果顯示5 ng/g的蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ樣品，其檢測(cè)圖譜定量離子的信噪比總能大于3以上，10 ng/g的蘇丹紅樣品，其信噪比在10以上，且其圖譜清晰，分離效果較好，所以將蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ檢出限和定量限分別定為5 ng/g和10 ng/g。

2.2 對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

分別配制蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的 10、50、100、200、500 μg/L 和 1 000 μg/L 的標(biāo)準(zhǔn)品，上機(jī)。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品曲線(xiàn)結(jié)果表

結(jié)果表明，蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品曲線(xiàn)在10～1 000 μg/L范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系很好，相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，符合確證實(shí)驗(yàn)相關(guān)要求。

2.3 添加回收試驗(yàn)

對(duì)分別添加20 ng/g、50 ng/g、100 ng/g蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的雞蛋樣品進(jìn)行6次平行檢測(cè)，平均回收率情況見(jiàn)表2。

2.4 精密度

對(duì)不同添加濃度的樣品進(jìn)行檢測(cè)，其回收率和變異系數(shù)情況見(jiàn)表2。批間和批內(nèi)變異系數(shù)均小于15%，符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范相關(guān)要求。詳見(jiàn)表2。

表2 雞蛋中添加回收和變異系數(shù)統(tǒng)計(jì)表

2.5 準(zhǔn)確度

通過(guò)對(duì)不同基質(zhì)進(jìn)行不同濃度的添加回收試驗(yàn)，測(cè)得其檢測(cè)值和真值的偏差，詳見(jiàn)表3。

表3 準(zhǔn)確度統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 結(jié)論

本文研究應(yīng)用高效液相色譜法檢測(cè)禽蛋中的蘇丹紅，前處理方法簡(jiǎn)單快速，不需要進(jìn)行國(guó)標(biāo)方法中復(fù)雜的活度調(diào)節(jié)和活性測(cè)試，整個(gè)操作過(guò)程不超過(guò)1 h；耗費(fèi)溶劑少，僅為國(guó)標(biāo)方法的1/3；采用SDR專(zhuān)用固相萃取柱，提高了回收率；填補(bǔ)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)蘇丹紅在禽蛋中的殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的空白，為監(jiān)管提供了有力技術(shù)支持。