王 慧，邱美珍，楊 俊，杜麗飛，周望平，傅勝才

（湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南 長沙 410131）

湖南省四家養(yǎng)豬場豬瘟抗體水平檢測及免疫程序的調(diào)整

王 慧，邱美珍，楊 俊，杜麗飛，周望平，傅勝才

（湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南 長沙 410131）

為了提高試驗豬場免疫水平，降低豬瘟發(fā)病率，本試驗通過ELISA檢測技術(shù)對湖南省4家規(guī)模豬場進行豬瘟抗體水平跟蹤監(jiān)測，評估其免疫效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4家豬場豬瘟抗體水平均不合格，A、B、C、D 4場經(jīng)產(chǎn)母豬陽性率分別為70.2%、89.9%、75.4%和68.6%；哺乳仔豬陽性率分別為30.0%、70.0%、37.2%和30.3%；保育豬陽性率分別為47.4%、37.1%、58.0%和8.5%。然后進行補充免疫或?qū)⒉缓侠淼拿庖叱绦蜻M行調(diào)整。30 d后再次檢測其抗體水平，結(jié)果顯示4家豬場豬瘟抗體水平除B場哺乳仔豬外均明顯升高，A、B、C、D 4場經(jīng)產(chǎn)母豬陽性率分別為86.7%、95.9%、88.5%和100.0%，哺乳仔豬陽性率分別為38.4%、59.5%、73.1%和60.0%，保育豬陽性率分別為47.4%、60.8%、68.8%和56.2%。以此驗證免疫程序調(diào)整措施基本合理。

豬瘟；免疫效果評估；免疫程序調(diào)整

豬瘟（Swine Fever;Hog Cholera，CSF）是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒引起的一種急性、熱性、敗血性、接觸性的傳染病，也是導致“豬高熱病綜合癥”的主要疾病之一。臨床上分為典型豬瘟、非典型豬瘟和繁殖障礙型豬瘟。豬瘟自1883年于美國俄亥俄州大面積爆發(fā)以來，已有170多年的歷史[1]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報告的疫病[2]，也是我國的一類動物疫病。目前，我國防控豬瘟疫情的主要手段仍然以100%高密度強制免疫為主，但很多規(guī)模豬場免疫接種普遍存在一定的盲目性和被動性[3]，常常導致免疫失敗。因此，免疫后的抗體水平檢測及分析成了豬瘟防控不可缺少的工作環(huán)節(jié)，根據(jù)抗體檢測，免疫效果評估，制定更加合理有效的免疫程序。將實際生產(chǎn)中存在的“被動免疫”轉(zhuǎn)為“主動免疫”和“適時免疫”。本試驗通過對湖南省4家養(yǎng)豬場豬瘟抗體水平檢測，分析其免疫程序合理之處及免疫失敗原因，及時調(diào)整不合理的免疫程序，為養(yǎng)豬場制定符合本場實際情況的免疫方案提供了參考。

1 材料與方法

1.1 豬場情況 湖南省內(nèi)4家母豬存欄數(shù)500頭左右的規(guī)模豬場，編號為A場、B場、C場和D場。4家豬場環(huán)境條件都較差，生產(chǎn)狀況不穩(wěn)定，其中有2家豬場有高致病性藍耳病的發(fā)生。

1.2 試驗材料 待檢樣品血清、豬瘟兔化弱毒疫苗（ST傳代細胞苗）、豬瘟（CSFV）抗體檢測ELISA試劑盒（購自IDEXX公司）、蒸餾水、75%酒精、棉花、真空采血管、一次性采血針、采樣箱、離心機、酶標儀、槍頭、微量移液器、恒溫箱、冰箱、1.5 mL EP管、量筒等。

1.3 試驗方法

1.3.1 免疫程序的記錄 包括免疫程序、免疫時間、所用疫苗的種類等有關(guān)生產(chǎn)和防疫的內(nèi)容。

1.3.2 血清樣品采集和處理 根據(jù)動物防疫樣品采集技術(shù)規(guī)定（DB43/426-2009），從4家豬場共采集血液樣品1 704份，于4℃下過夜，次日以4 000 r/min離心15 min，收集上清于 1.5 mL EP管中，-20℃保存?zhèn)溆?。采血管?jīng)滅菌處理后丟掉。

1.3.3 檢測方法和判斷標準 運用阻斷ELISA抗體檢測技術(shù)檢測豬瘟抗體，具體操作方法按試劑盒說明書進行。其具體步驟為：樣品稀釋（18～26℃孵育2 h）→洗滌→加酶標抗體（18～26℃孵育30 min）→洗滌→加底物（18～26℃孵育10 min）→加終止液，然后在450 nm處測定吸光度值。

阻斷率計算公式：blocking%=（陰性對照平均OD值-樣本OD值）/陰性對照平均OD值×100%。

豬瘟抗體水平判斷標準：陽性值為阻斷率＞40%；可疑值為30%≤阻斷率≤40%；陰性值為阻斷率＜30%。

本試驗保護率為阻斷率＞60%（IDEXX標準為＞50%）。

離散度即基于樣本估算的標準偏差，反映數(shù)值相對于平均值的離散程度。計算方法為：總體標準偏差σ=Sqr t[(∑(xi-μ)^2)/N]，公式中∑代表總和，μ代表總體x的均值，^2代表二次方，Sqr t代表平方根。

1.4 免疫程序的調(diào)整 根據(jù)第一次抗體檢測結(jié)果綜合分析4家規(guī)模豬場豬瘟免疫效果，并調(diào)整不合理的免疫程序及補充免疫。

1.5 再次采集試驗豬場血清樣品 免疫程序調(diào)整及補充免疫30 d左右再次采集試驗豬場血清樣品進行抗體檢測，以驗證免疫程序調(diào)整的合理性及加強免疫后的效果。

表1 4家豬場免疫程序Table1 Immunization program of four pig farms

表2 4家豬場豬瘟抗體檢測結(jié)果Tab le2 The CSFV antibody test resu lts o f four pig farm s

2 結(jié)果與分析

2.1 各豬場免疫程序 所選4家試驗豬場免疫程序見表1。

2.2 4家豬場免疫效果評估及分析 對4家豬場進行分類普檢豬瘟抗體水平并進行免疫效果綜合評估，抗體檢測結(jié)果見表2。

從表2可以看出，4家豬場豬瘟抗體水平均不合格，從高到低依次為B場、C場、A場、D場。主要表現(xiàn)在陽性率低，離散度大，阻斷率平均值不達標。A場、C場和D場經(jīng)產(chǎn)母豬沒有達到理想效果，結(jié)合豬場生產(chǎn)狀況來看，可能是其他疾病的存在，豬只生長狀況欠佳，導致母豬群豬瘟免疫應(yīng)答能力下降，同時藍耳病的免疫抑制作用，也會抑制免疫抗體的產(chǎn)生[4]。C、D場可能是由于跟胎免疫工作不到位，漏免或者母豬空懷或流產(chǎn)時不列在免疫之內(nèi)，從而導致抗體水平不一致。另外由于仔豬母源抗體水平與母豬抗體水平呈正相關(guān)[5]，仔豬豬瘟母源抗體水平低，感染風險大。另外保育豬的抗體水平低是因為A場的生產(chǎn)狀況原本不穩(wěn)定，C、D場只有斷奶時的一次免疫。B場豬瘟抗體水平較好，但仍未達到豬場內(nèi)部所規(guī)定的標準。

2.3 免疫程序調(diào)整及分析 通過以上數(shù)據(jù)分析及結(jié)合生產(chǎn)實際情況，A、B場的商品豬免疫程序優(yōu)化為超前免疫，28日齡第二次免疫，65日齡三次免疫。種豬群檢測后普免豬瘟疫苗，20 d后再加強免疫；C、D場經(jīng)產(chǎn)母豬豬瘟免疫方式調(diào)整為每年3、9月上旬普免。鑒于目前豬瘟抗體水平低下，為逐步過渡到普免免疫模式，立即將所有經(jīng)產(chǎn)母豬普免一次豬瘟疫苗，2個月后再加強免疫一次。商品豬在65日齡增加1次豬瘟免疫。如果多次免疫抗體仍為陰性者，及時淘汰。同時做好生物安全工作，嚴禁并群等應(yīng)激因素，適當進行藥物保健。詳細調(diào)整情況見表3。

2.4 免疫程序調(diào)整后的豬瘟抗體水平及分析 免疫程序調(diào)整后30 d左右，再次進行豬瘟抗體水平檢測，檢測結(jié)果見表4。

通過檢測結(jié)果顯示，4家豬場經(jīng)過第一次抗體檢測后的免疫程序優(yōu)化及加強免疫等措施，豬場的豬瘟抗體水平除了B場哺乳仔豬以外，在上一次抗體檢測的基礎(chǔ)上都得到了有效改善（見表4），但豬瘟抗體水平仍不夠理想，經(jīng)產(chǎn)母豬抗體水平雖然達到了85%以上，且離散程度較低；但A場和C場離理想標準還有一段距離；A場哺乳仔豬和保育豬的陽性率依舊很低，B、C和D場的哺乳仔豬和保育豬抗體水平比較理想。

3 討論

表3 免疫程序調(diào)整Table3 Imm unization schedule adjustment

表4 免疫程序調(diào)整后的豬瘟抗體水平Table4 Leve ls of CSFV antibody after Imm une adjustm ent

加強普免后，經(jīng)產(chǎn)母豬群某些豬只抗體水平仍未達到理想狀態(tài)，對于多次免疫后抗體水平仍處于低下的母豬群應(yīng)考慮予以淘汰。B場經(jīng)產(chǎn)母豬瘟抗體水平能夠穩(wěn)定維持在理想狀態(tài)。C場和D場豬瘟抗體水平也基本符合場內(nèi)標準，可按照原有免疫程序執(zhí)行。同時豬場應(yīng)加強普免的管理和督促以及仔豬關(guān)鍵點的保健工作，落到實處。因為，免疫抗體評估和免疫程序調(diào)整是一個持續(xù)而長期的工作，要不斷摸索，找到適合自己的免疫方案，避免盲目被動免疫的情況。

對于超前免疫存在很多爭議，由于超前免疫措施的難操作性，在生產(chǎn)實際中不提倡采取超前免疫，但在母豬瘟抗體水平較低的情況下仔豬選擇超前免疫卻是比較合理有效的措施，因此當抗體水平控制到理想狀態(tài)后應(yīng)免去超前免疫。跟胎免疫是否可行也要根據(jù)豬場實際情況而定。目前，豬瘟免疫程序研究基本已成熟，規(guī)模豬場均可根據(jù)自身的生產(chǎn)情況制定合理有效的免疫程序，甚至很多豬場已經(jīng)采取豬瘟凈化措施。

在血清學抗體檢測應(yīng)用的過程中，必須合理選擇抗體檢測時間并結(jié)合生產(chǎn)實際來分析抗體檢測結(jié)果，檢測時間和對象不同，體現(xiàn)的意義和作用也不一樣，例如，可以根據(jù)仔豬母源抗體水平檢測來確定首次免疫時間。另外，免疫后各種疫苗的特性不同導致其在豬體內(nèi)產(chǎn)生抗體的時間也存在某些差異，不宜過早或過遲進行抗體檢測，一般在免疫后28～35 d進行疫苗抗體檢測[6]。同時應(yīng)該根據(jù)陽性率、離散度、豬瘟阻斷率平均值等各項指標結(jié)合豬場生產(chǎn)實際情況來進行分析，不能單憑某一項指標來判定豬群的抗體水平。豬瘟抗體水平檢測作用主要體現(xiàn)在了解豬群免疫狀態(tài)、實時訂制合理的免疫程序。但在豬瘟防控方面，應(yīng)結(jié)合豬瘟病原檢測，及時識別和淘汰帶毒種豬，達到逐步凈化豬瘟的目的，是未來豬瘟凈化的一個趨勢。

[1]HansonRP.Origin of hog cholera[J].J Am Vet Med Assoc,1957,131(5)∶211-218.

[2]OIE.Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Ter rest rial Animals[M].2011.

[3]劉志勇，韓慶安，劉乃強，等.規(guī)模養(yǎng)豬場主要疫病免疫效果評估模型的建立[J].中國獸醫(yī)雜志，2011,47（7）：88-90.

[4]李華，楊漢春，黃芳芳，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染抑制豬瘟疫苗的免疫應(yīng)答[J].中國獸醫(yī)學報，2001, 21（3）：219-221.

[5]杜喜忠，胡旭進，樓芳芳，等.豬瘟和豬高致病性藍耳病母源抗體消長規(guī)律及疫苗免疫的干擾作用[J].浙江農(nóng)業(yè)科學，2010,（5）：1118-1120.

[6]徐靜，邱文英，郭建寶，等.接種豬瘟疫苗后ELISA抗體反應(yīng)規(guī)律[J].今日養(yǎng)豬業(yè)，2013,（2）：14-18.

The classicalsw ine fever immune effectevaluation and ad justment immunization schedules for four scale pig farm s in hunan province

Wang Hui,Qiu Meizhen,Yang Jun,Du Li fei,Zhou Wangping,Fu Shengcai
(Hunan Institute of Animal Sciences&Veterinary Medicine,Hunan Changsha 410131)

In order to improve the immune ef fect and reduce the incidence of classical swine fever(CSF),this research select four scale pig farms to test the antibody level of CSF by ELISA detection technology,and then evaluate the immune ef fect.The resul ts showed that the detecting antibody levels were unquali f ied,In the four pig farms,the mul tiparity sows positive rate was 70.2%,89.9%,75.4%,68.6%respectively;The Lactation piglet positive rate was 30.0%,70.0%, 37.2%,30.3%;The nursery pig positive rate was 47.4%,37.1%,58.0%,8.5%.Then conduct supplementary immunization or adjust unreasonable immunization schedules and test the antibody level af ter 30 days.The resul ts showed that the detecting antibody levels were increased Signi f icant ly except the Lactation piglet of B,in the four pig farms,the mul tiparity sows positive rate was 86.7%,95.9%,88.5%,100.0%respectively;The Lactation piglet positive rate was 38.4%,59.5%, 73.1%,60.0%;The nursery pig positive rate was 47.4%,60.8%,68.8%,56.2%.Immune adjustment is reasonable.

Classical swine fever;Evaluation of immune ef fect;Adjustment of the immunization schedule

S858.28

1672-9692(2015)08-0052-06

2015-07-05

王慧(1988-)，女，初級職稱，碩士研究生，主要從事動物疫病防控工作。