王望寶 包喜軍 劉文春 葉俊華

氟啶蜱脲口服與透皮給藥對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)

王望寶 包喜軍 劉文春 葉俊華

為闡明氟啶蜱脲的毒性，指導(dǎo)臨床用藥，本試驗(yàn)用昆明小鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)氟啶蜱脲原料藥和透皮劑進(jìn)行毒性研究。預(yù)實(shí)驗(yàn)中小鼠一次性口服不同劑量的原料藥和透皮劑，測(cè)定LD0和LD100，再根據(jù)最大給藥試驗(yàn)和簡(jiǎn)化寇氏法分組正式試驗(yàn)，測(cè)定LD50和95%的可信限。結(jié)果測(cè)出小鼠口服氟啶蜱脲原料藥的LD50大于16.0 g/kg，小鼠口服透皮劑的LD50和95%的可信限分別為5.8594g/kg和5.2732～6.5276g/kg，由于LD50值均大于5000m g/kg，故氟啶蜱脲原料藥和透皮劑判定為實(shí)際無毒或無毒。小鼠透皮給予高劑量透皮劑10.0g/kg，小鼠未出現(xiàn)死亡，表明透皮劑臨床用藥安全。

氟啶蜱脲是由汽巴——嘉基公司最先研發(fā)的一種苯甲酰脲類昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，并由諾華公司實(shí)現(xiàn)商品化，諾華公司開發(fā)的用于控制動(dòng)物體表寄生的硬蜱。本課題組在參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上研制出氟啶蜱脲透皮劑，臨床試驗(yàn)表明，透皮劑對(duì)犬體表寄生的血紅扇頭蜱有很好的控制效果。本研究以《化學(xué)藥物急性毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》為指導(dǎo)，按照簡(jiǎn)化寇氏法對(duì)氟啶蜱脲原料藥及透皮劑進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，為該藥的的毒性研究和臨床安全用藥提供依據(jù)。

一、材料與方法

（一）供試藥品

氟啶蜱脲原料藥，白色粉末狀，水中溶解度小于0.02m g/l，純度99.2%，批號(hào)：121101，常州佳靈藥業(yè)有限公司提供。氟啶蜱脲透皮劑，淡黃色，透皮油狀液體，規(guī)格：100m l，10.0g氟啶蜱脲，本課題組研制。吐溫80、羧甲基纖維素均購于天津市大茂化學(xué)試劑廠。

（二）試驗(yàn)動(dòng)物

昆明小鼠（普通級(jí)）134只，雌雄各半，體重18~22g，購于江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK(贛)2011-0001。

（三）試驗(yàn)方法

1.藥物配置

氟啶蜱脲原料藥用含有0.5%羧甲基纖維素、0.1%吐溫80的蒸餾水配置成不同質(zhì)量濃度的懸浮液；透皮劑用食用大豆油配成不同質(zhì)量濃度。

2.預(yù)試驗(yàn)

將8只試驗(yàn)小鼠，雌雄各半，每組4只，禁食12h后，高、低劑量組分別按40m l/kg和20m l/kg體重容積，以最大質(zhì)量濃度（0.4g/m l）一次性灌服氟啶蜱脲原料藥懸浮液，灌胃后觀察7天。

每組4只試驗(yàn)小鼠，雌雄各半，禁食12h后，按20m l/kg體重容積灌服不同濃度的氟啶蜱脲制劑，測(cè)定LD0和LD100。

將10只試驗(yàn)小鼠，雌雄各半，禁食12h后透皮給予高劑量氟啶蜱脲透皮劑10.0g/kg，觀察動(dòng)物的毒副反應(yīng)。

3.正式試驗(yàn)

最大給藥量試驗(yàn)：將40只小鼠分為2組（實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組），雌雄各半，禁食12h后，小鼠給予最大質(zhì)量濃度（0.4g/m l）及最大給藥容積40m l/kg，一次性灌服氟啶蜱脲原料藥懸浮液，對(duì)照組灌服給予等量的溶媒。透皮劑組根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的最高致死量和最低致死量的比值對(duì)正式試驗(yàn)分組，每組10只試驗(yàn)動(dòng)物，雌雄各半。透皮給藥的小鼠數(shù)量增至20只，雌雄各半。給藥后觀察小鼠的死亡情況、出現(xiàn)的癥狀、癥狀起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間，給藥后連續(xù)觀察14天。對(duì)試驗(yàn)中死亡的動(dòng)物以及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死的動(dòng)物進(jìn)行解剖，對(duì)組織出現(xiàn)的體積、顏色等的改變進(jìn)行詳細(xì)的記錄。

（四）數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

二、結(jié)果

（一）預(yù)實(shí)驗(yàn)

小鼠口服氟啶蜱脲原料藥，高劑量組和低劑量組小鼠全部存活，未能測(cè)出氟啶蜱脲原料藥的LD50，說明原料藥的毒性很低，故進(jìn)行最大給藥試驗(yàn)。小鼠口服氟啶蜱脲制劑的LD0及LD100分別為3.59g/kg、8.77g/kg。小鼠按照10.0g/kg的劑量透皮給予氟啶蜱脲制劑，部分小鼠表現(xiàn)為瞇眼、弓背、活動(dòng)減少、呼吸加快、飲食正常，給藥8小時(shí)后小鼠恢復(fù)正常，未見小鼠死亡。

（二）正式試驗(yàn)

1.口服原藥試驗(yàn)

試驗(yàn)組給藥后2h大部分小鼠活動(dòng)減少，反應(yīng)遲鈍，小部分小鼠瞇眼，給藥后8h小鼠活動(dòng)恢復(fù)正常，未見瞇眼，給藥后第1天小鼠食欲降低，第2天至14天小鼠飲食正常。對(duì)照組小鼠口服溶媒后，未見明顯變化。給藥后觀察14天，試驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠都未出現(xiàn)死亡。試驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，并剖檢，試驗(yàn)組和對(duì)照組都未見明顯的眼觀病變。表明氟啶蜱脲原藥口服給藥對(duì)小鼠的LD50大于16.0g/kg，說明氟啶蜱脲對(duì)昆明小鼠無毒。

2.口服制劑試驗(yàn)

測(cè)出的LD50=5.8594g/kg，LD50的95%可信限為5.2732～6.5276g/kg。由于LD50值在5000~15000m g/kg之間，因此氟啶蜱脲制劑對(duì)昆明小鼠是實(shí)際無毒的。

在小鼠口服透皮劑急性毒力試驗(yàn)中，給藥后5分鐘內(nèi)大部分小鼠表現(xiàn)為反應(yīng)遲鈍、四肢發(fā)紫；給藥1h后，大部分小鼠精神沉郁、弓背不動(dòng)、豎毛、呼吸急促、食欲降低。試驗(yàn)中未死亡的小鼠36小時(shí)后能正常運(yùn)動(dòng)，死亡時(shí)間出現(xiàn)在給藥后的1.5~40h。尸體剖檢大部分小鼠可見皮下、腹膜、腸系膜、胸膈肌、心被膜、睪丸、子宮輕微充血，胃鼓氣，胃壁變薄，十二指腸、空腸壞死液化呈雞蛋黃色，腸壁變薄，腸粘膜易剝離，肝、脾、腎呈鮮紅色，有的小鼠腎和脾腫大，膀胱充盈，肝呈暗紅色，肺充血呈鮮紅色。試驗(yàn)第14天，未死亡的小鼠處死剖檢，未觀察到明顯的眼觀病變。

小鼠口服透皮劑正式試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率無顯著差異（P＞0.05）。小鼠的給藥、死亡情況詳見上表。

3.制劑透皮給藥試驗(yàn)

小鼠透皮給予制劑10.0g/kg，給藥后0.5h大部分小鼠瞇眼，3h后表現(xiàn)為瞇眼、弓背、活動(dòng)減少、呼吸加快、飲食正常，在給藥后8h小鼠恢復(fù)正常，給藥后觀察14天，小鼠未出現(xiàn)死亡。試驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，并剖檢觀察，未見明顯的眼觀病變。

三、分析與討論

氟啶蜱脲是一種親脂性物質(zhì)(正辛醇水分配系數(shù)logP=5.1)，在水中的溶解度小于0.02m g/l，因此選擇含有0.5%羧甲基纖維素、0.1%吐溫80的蒸餾水把氟啶蜱脲原料藥配置成懸浮液便于灌胃給藥。本課題組研制的透皮劑也是個(gè)油性體系，用含有羧甲基纖維素和吐溫80的蒸餾水配置時(shí)，會(huì)析出乳白色的果凍狀物，會(huì)造成給藥不準(zhǔn)確，而大豆油能很好地稀釋透皮劑，因此采用大豆油作為稀釋劑。

氟啶蜱脲原料藥和透皮劑口服給藥時(shí)，不同給藥體積會(huì)影響藥物的吸收，從而影響到動(dòng)物的死亡率，因此分別按照40m l/kg、20m l/kg的劑量給小鼠氟啶蜱脲原料藥和透皮劑灌胃。此外胃內(nèi)容物的量會(huì)影響到受試物的給藥容量；嚙齒類動(dòng)物禁食時(shí)間長(zhǎng)短會(huì)影響藥物代謝酶的活性和受試物在腸道的吸收，故小鼠在給藥前禁食12h。

試驗(yàn)中，氟啶蜱脲原料藥按16.0g*kg-1給昆明小鼠灌胃，未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡，說明氟啶蜱脲對(duì)小鼠實(shí)際無毒，這和苯甲酰脲的作用機(jī)理有著密切的關(guān)系。苯甲酰脲類幾丁質(zhì)合成抑制劑主要通過影響昆蟲幾丁質(zhì)的合成而起效，不同于作用于神經(jīng)系統(tǒng)的傳統(tǒng)農(nóng)藥，因此苯甲酰脲類幾丁質(zhì)合成抑制劑對(duì)靶標(biāo)動(dòng)生物有較高的選擇性。此外，透皮劑口服給藥對(duì)昆明小鼠的LD50為5.86 g/kg、經(jīng)皮給藥對(duì)昆明小鼠的LD50大于10.0g/kg，表明了透皮劑對(duì)小鼠也是實(shí)際無毒的。兩種不同給藥方式測(cè)量的半數(shù)致死量有著明顯的差別，這可能是因?yàn)橥钙┙?jīng)皮給藥的生物利用度有限導(dǎo)致的。

（作者單位：王望寶，修水縣畜牧水產(chǎn)局，332400；
包喜軍，公安部南京警犬研究所，210012；
劉文春、葉俊華，公安部南昌警犬基地，330100）

（編輯：李 冰）

項(xiàng)目編號(hào)：公安部應(yīng)用創(chuàng)新科研項(xiàng)目（2010YYCXNCJQ154）