樊三忠

江蘇省揚(yáng)州市廣陵區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇揚(yáng)州 225001

1例雞大腸桿菌病的診治

樊三忠

江蘇省揚(yáng)州市廣陵區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇揚(yáng)州 225001

雞大腸桿菌病是由某些血清型大腸埃希氏菌引起的一種細(xì)菌性傳染病，嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)，可導(dǎo)致雞發(fā)生一系列疾病，如敗血癥、臍炎、胚胎死亡、肉芽腫、卵黃性腹膜炎和眼炎等，給養(yǎng)雞戶帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本文以1例雞大腸桿菌病為例，通過臨床癥狀、病理剖檢進(jìn)行觀察，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷方法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分離鑒定。

雞大腸桿菌；診斷；治療

1894年，Ligniers首次報(bào)道雞大腸桿菌病，此后，許多國家和地區(qū)都有報(bào)道本病發(fā)生[1-2]。首先David 和Twisselman報(bào)道了由腸桿狀微生物引起的禽類感染，后來Wasserman等和Fahey分別在雞“氣囊病”病例中發(fā)現(xiàn)并分離出了大腸桿菌[3]。隨著20世紀(jì)80年代的集約化養(yǎng)禽業(yè)的不斷發(fā)展，該病在養(yǎng)禽業(yè)中已被列為重要細(xì)菌病，嚴(yán)重威脅著禽業(yè)的發(fā)展[4]。建立正確地診治禽大腸桿菌病方法，是基層獸醫(yī)工作者的重要研究課題。本文就臨床1例雞大腸桿菌病進(jìn)行了細(xì)菌學(xué)診斷及治療，取得了很好的效果。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）菌株來源于江蘇省揚(yáng)州市廣陵區(qū)畜牧獸醫(yī)站，解剖來自廣陵區(qū)某養(yǎng)殖戶的疑似大腸桿菌病死雞，無菌采集心、肝等病料。

2）培養(yǎng)基。麥康凱瓊脂，普通營養(yǎng)瓊脂，三糖鐵瓊脂，血培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)基。

3）主要試劑。麥芽糖、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸櫞酸鹽、側(cè)金盞花醇等細(xì)菌生化微量管（購自杭州天和微生物試劑有限公司）。草酸銨結(jié)晶紫染液、95%的乙醇溶液、盧戈碘液、番紅復(fù)染液、歐立希氏（Ehrlich’s）試劑，V-P試劑，M.R試劑。

4）藥敏紙片。復(fù)方新諾明（23.75/1.25）、左氧氟沙星（5 μg）、鏈霉素（10 μg）、氯霉素（30 μg）、四環(huán)素（30 μg）、慶大霉素（30 μg）、環(huán)丙沙星（5 μg）、多粘菌素（300 IU）、強(qiáng)力霉素（30 μg）、磺胺甲基異噁唑（300 μg）（購自杭州天和微生物試劑有限公司）。

5）大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)抗O因子血清、大腸桿菌O抗原單因子和多因子血清（購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）。

1.2 方 法

1）細(xì)菌分離培養(yǎng)。對(duì)無菌采集的心、肝臟樣品，進(jìn)行大腸桿菌的分離培養(yǎng)，對(duì)單個(gè)典型菌落進(jìn)行純培養(yǎng)并凍干保存。

2）革蘭氏染色鏡檢。用接種環(huán)蘸取少許生理鹽水于潔凈玻片上，再挑取適量的分離細(xì)菌純培養(yǎng)與玻片上的生理鹽水混合，均勻涂布，自然干燥后用火焰固定，在玻片上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，作用1～3 min后，水洗，加盧戈碘液于玻片上媒染，作用1 min后，水洗，再加95%酒精溶液脫色，作用15～30 s后水洗，最后加番紅復(fù)染液復(fù)染1 min后，水洗，自然晾干后鏡檢，觀察細(xì)菌染色與形態(tài)。

3）大腸桿菌生化試驗(yàn)。取分離的細(xì)菌分別接種三糖鐵瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)24～48 h后觀察斜面與底部的顏色變化以及產(chǎn)氣情況，并對(duì)分離株進(jìn)行麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、側(cè)金盞花醇、吲哚、M.R、V-P、枸櫞酸鹽10項(xiàng)生化指標(biāo)的測定。

4）大腸桿菌O血清型的鑒定。

①凝集原的制備。挑取普通瓊脂平板上的純培養(yǎng)物，接種至營養(yǎng)肉湯，37℃，震蕩培養(yǎng)24 h，然后挑取一環(huán)營養(yǎng)肉湯的培養(yǎng)物，劃線接種至麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)箱，靜置培養(yǎng)24 h，挑取麥康凱瓊脂平板上2～3個(gè)典型菌落再接種到普通瓊脂斜面，37℃靜置培養(yǎng)24 h，然后，用2 mL 0.5%石炭酸生理鹽水將普通瓊脂斜面上的菌苔洗脫下來，通過121℃高壓滅菌器高壓2 h的方式來除去K抗原和H抗原的O不凝集性，隨后制成濃稠的O凝集原，滅菌前菌液濃度大約為1010菌落形成單位（cfu/mL）。

②玻板凝集試驗(yàn)。在一潔凈的玻片上滴1滴制備好的凝集原，再用接種環(huán)挑取1環(huán)多價(jià)因子血清，充分混勻，涂成大小為1.5 cm的圓圈，輕輕搖動(dòng)玻片，30 s后若出現(xiàn)明顯凝集的現(xiàn)象可判定為陽性反應(yīng)。同時(shí)以生理鹽水代替多家因子血清混合菌懸液作對(duì)照，觀察是否出現(xiàn)自凝現(xiàn)象。重復(fù)以上操作，然后使每一O凝集原與多因子血清內(nèi)的每一單價(jià)因子血清再作進(jìn)一步的凝集試驗(yàn)，從而確定每株大腸桿菌的具體血清型。

5）藥敏試驗(yàn)。采用紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauer），即將含有不同濃度的抗菌藥物的紙片置于平板培養(yǎng)基上，平板已接種了被檢菌，抗菌藥物向周圍擴(kuò)散，因此在藥敏紙片的周圍會(huì)出現(xiàn)抑菌圈，被檢菌對(duì)該種抗菌藥物的敏感性與抑菌圈的大小成正相關(guān)，根據(jù)抑菌圈的大小，判斷該菌對(duì)各種藥物的敏感程度。判斷標(biāo)準(zhǔn)為抑菌圈直徑大于20 mm為高度敏感，20～15 mm為中度敏感，15～10 mm為低度敏感，小于10 mm為耐藥。

在麥康凱瓊脂平板上用滅菌接種環(huán)挑取一典型大腸桿菌單菌落，在LB培養(yǎng)基表面作致密劃線。用無菌小鑷子將上述12種已滅菌的藥敏試紙貼于瓊脂平板表面，輕壓與平板表面緊貼，且不能再移動(dòng)，然后將平板倒置于37℃培養(yǎng)箱，靜置培養(yǎng)后取出觀察結(jié)果。各紙片中心相距應(yīng)該大于24 mm，紙片距離平板內(nèi)緣應(yīng)大于15 mm。

2 結(jié)果

2.1 病理剖檢

病死雞剖檢后可見纖維素性心包炎，心包膜明顯增厚，并有黃色或白色纖維素性附著物（圖1），肝臟發(fā)生腫大，且其表面附著纖維素樣物（圖2）。

圖1 嚴(yán)重的心包炎

圖2 嚴(yán)重的肝周炎

2.2 細(xì)菌分離

經(jīng)過37℃/24 h培養(yǎng)后，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成粉紅色、光滑濕潤、圓形隆起、邊緣整齊、中等大小的菌落（圖3）；使三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基斜面和底部均由原來的紅色變?yōu)辄S色，并且底部有氣泡產(chǎn)生。培養(yǎng)物涂片后經(jīng)革蘭氏染色并鏡檢，可觀察到兩端鈍圓、間或細(xì)長、呈兩極著色的革蘭氏陰性短桿菌，多呈單個(gè)或成對(duì)出現(xiàn)。另外，分離菌均無芽孢（圖4）。

圖3 細(xì)菌在麥康凱培養(yǎng)基上形態(tài)

圖4 顯微鏡下觀察的G-桿菌

2.3 生化試驗(yàn)結(jié)果

生化試驗(yàn)結(jié)果見表1，其生化試驗(yàn)結(jié)果符合大腸埃希氏菌的生化特性，可基本判定此次分離到的菌株為大腸桿菌。

表1 生化試驗(yàn)結(jié)果1）

2.4 分離株O血清型分析

通過玻板凝集試驗(yàn)，測定該大腸桿菌分離株的血清型為O2。

2.5 藥敏試驗(yàn)

本試驗(yàn)選用10種抗生素進(jìn)行耐藥性檢測，結(jié)果見表2。

表2 大腸桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

在供試的10種抗生素中，受試菌株對(duì)左氧氟沙星、慶大霉素和多粘菌素都敏感，左氧氟沙星最敏感，而對(duì)其他幾種抗生素則有耐藥性。

2.6 治療結(jié)果

治療本病用0.1%氟哌酸飲水，連飲3～5 d；硫酸慶大霉素肌肉注射，按5 000 U/kg連續(xù)注射3～5 d；3 d后，死亡率減少，5 d后治愈，治愈率達(dá)95%。

3 討 論

帶來了嚴(yán)重的阻礙。作為基層獸醫(yī)工作者，對(duì)目前臨床上大腸桿菌進(jìn)行耐藥情況普查，以便正確指導(dǎo)臨床用藥很有必要。如果能夠在臨床的實(shí)際用藥中采取交叉、輪換、聯(lián)合等用藥方式，同時(shí)制定合理的治療程序，將會(huì)大大減少大腸桿菌產(chǎn)生耐藥性的機(jī)會(huì)，從而達(dá)到相對(duì)較好的防制效果。

雞大腸桿菌病重在預(yù)防，應(yīng)減少飼料和飲水的污染，尤其飲水器，適當(dāng)增加葡萄糖等。更應(yīng)注意洗刷和消毒，用具及環(huán)境要經(jīng)常徹底消毒。搞好種蛋及孵化器的清潔衛(wèi)生和消毒工作，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理[5]。

雞大腸桿菌病是一種常見病和多發(fā)病，由致病性大腸埃希氏菌感染而引起的。大腸桿菌病屬于條件性疾病，而大腸桿菌普遍存在，因此，當(dāng)雞群飼養(yǎng)密度大，疾病干擾，氣候突變，應(yīng)激因素存在時(shí)，便會(huì)造成本病暴發(fā)流行。另外，由于集約化養(yǎng)雞業(yè)不斷發(fā)展，使得該病的發(fā)病率和死亡率隨之增加，嚴(yán)重導(dǎo)致家禽生產(chǎn)性能的下降，給養(yǎng)禽業(yè)造成重大損失。

本試驗(yàn)中的10種抗生素均為革蘭氏陰性菌敏感的代表藥物。結(jié)果顯示臨床上大腸桿菌的耐藥現(xiàn)象已十分顯著，這給家禽養(yǎng)殖業(yè)大腸桿菌病的防治

[1] 崔治中.獸醫(yī)全攻略雞病[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009：194-195.

[2] 劉振湘，姚衛(wèi)東.畜禽傳染病[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008：219-223.

[3]俆建義.禽病防治[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：86-93.

[4]臧素敏.養(yǎng)雞與雞病防治[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2012：120-124.

[5]黃炎坤，趙云煥.養(yǎng)雞實(shí)用新技術(shù)大全[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2011：167-172.

疫苗注射部位不準(zhǔn)確效果差

疫苗能否產(chǎn)生足夠的免疫力與注射方法有很大關(guān)系，有些疫苗要求肌肉注射，有些疫苗需要皮下注射，有些要求后海穴注射，因?yàn)檫@樣做才能發(fā)揮疫苗的最佳效果。但在生產(chǎn)上并沒有完全做到，特別是在豬沒有保定好的情況下打飛針，很難掌握準(zhǔn)確的部位，可能注入肌肉，也可能注入脂肪，也可能注入皮下，這樣疫苗的效果要大打折扣。比如需要肌肉注射的疫苗，在肌肉內(nèi)很容易吸收，但如注入脂肪，疫苗長時(shí)間不能吸收，在體溫38℃的高溫下，疫苗很快會(huì)失效，也就起不到免疫的效果了。

所以，在給仔豬和后備豬注射疫苗時(shí)必須將豬保定好。育肥豬也像后備豬一樣固定是不現(xiàn)實(shí)的，因?yàn)閿?shù)量太大，會(huì)花費(fèi)太大的工作量；而如果打飛針則往往會(huì)使部分豬的注射失敗或效果不理想，所以尋找一種可操作的方法非常必要。

在生產(chǎn)中，可以在1個(gè)小圈里，幾個(gè)飼養(yǎng)人員用1個(gè)鐵欄桿將豬擠到1個(gè)角落或邊上，因豬擠在一起時(shí)不易活動(dòng)，特別是豬頭都要抬起來，很容易固定部位打針。大一些的保育豬也可以這樣操作。

來源：金河動(dòng)保網(wǎng)

2015-10-27

樊三忠，1970年生，男，獸醫(yī)師。