王愛鳳，張社峰

(1.河南省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河南鄭州450003;2.河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州450004)

高血壓性腦出血是最常見的非外傷性腦出血，占所有腦出血的60%［1］，是高血壓病在腦部的嚴(yán)重并發(fā)癥。該病發(fā)病急，致死率40% ～70%，即使患者得以生存，大多數(shù)也遺留嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙。目前，無論是常規(guī)的內(nèi)科治療，還是外科血腫清除手術(shù)治療，均不是十分有效的治療方法［2］。有學(xué)者［3］運用活血化瘀法、通腑泄熱法治療高血壓腦出血，取得滿意效果。血腫消合劑是河南省中醫(yī)院王松齡主任醫(yī)師經(jīng)驗方，臨床研究［4］顯示，其治療高血壓腦出血效果較好。本研究通過觀察血腫消合劑對腦出血大鼠模型腦組織SOD、MDA的影響，探討其治療高血壓腦出血的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物與分組

SD大鼠216只，雄性，體質(zhì)量250～300 g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物許可證號:SCXK(京)2002－0003。將大鼠分為假手術(shù)對照組(30只)，模型對照組(42只)，血腫消合劑大(36只)、中(36只)、小劑量組(36只)和腦血康對照組(36只)。動物進(jìn)入實驗室后，按每籠放養(yǎng)5只標(biāo)準(zhǔn)放置大鼠，飼養(yǎng)3 d后啟用。動物室光照充足，通風(fēng)和空調(diào)設(shè)備良好，實驗室按常規(guī)定期消毒。

1.2 藥品、試劑與儀器

血腫消合劑處方組成:三七180 g，大黃100 g，莪術(shù) 200 g，川芎 200 g，生蒲黃 100 g， 黃芩120 g，茯苓300 g。由河南省中醫(yī)院制劑室提供，批準(zhǔn)文號為鄭衛(wèi)(2001)Вw－10398，每瓶25 mL，含生藥25 g。腦血康口服液，10 mL/支，河南省宛西制藥股份有限公司產(chǎn)品，批號060201。注射用生理鹽水，北京雙鶴藥業(yè)有限公司產(chǎn)品;膠原酶Ⅶ型，購自美國Sigma公司;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供，批號分別為20020905，20020828;水合氯醛等均為國產(chǎn)分析純。SN－2型調(diào)整腦立體定位儀，產(chǎn)地日本。

1.3 腦出血大鼠模型的建立

用100 g/L水合氯醛按3.0μL/g體質(zhì)量的劑量腹腔注射麻醉大鼠;將麻醉后的大鼠俯臥位固定于腦立體定位儀上，剃毛，常規(guī)消毒;頭皮下正中切口約0.8 cm，暴露顱骨;以前囟為零點，向右旁開4 mm，向后1 mm，在顱骨表面用牙鉆鉆孔。將固定在立體定向儀上的微量注射器(針頭直徑約0.7 mm)垂直插入腦組織，深度為5 mm(此處為尾狀核部位)，用自動推進(jìn)器向右側(cè)尾狀核推入含0.5 u/μL 膠原酶Ⅶ(生理鹽水配制成 1 u/μL);退針后縫合頭皮。通過破壞尾狀核內(nèi)的血管基底膜，造成腦實質(zhì)出血。假手術(shù)組采用同樣手術(shù)方法，但注入等體積生理鹽水。

1.4 給藥方法

大鼠造模前稱量體質(zhì)量、編號。給藥劑量按大鼠與人體表面積等效劑量折算，動物造模麻醉清醒后即刻給藥。假手術(shù)對照組和模型對照組以生理鹽水4μL/g體質(zhì)量灌胃，血腫消合劑大、中、小劑量組依次給予血腫消合劑 9，4.5，2.25 μL/g體質(zhì)量灌胃，腦血康對照組給腦血康口服液2.7 mL/g體質(zhì)量灌胃，均1 d 2次。連續(xù)給藥3 d。

1.5 檢測指標(biāo)

1.5.1 大鼠死亡數(shù)量、死亡率

觀察各組大鼠的死亡數(shù)量，計算死亡率。

1.5.2 神經(jīng)功能缺失評分

于造模24 h，72 h按Longa等的5級評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分。0分:無功能障礙。1分:不能伸展右側(cè)前肢。2分:向右側(cè)旋轉(zhuǎn)。3分:向右側(cè)傾倒。4分:無自主活動伴意識喪失。

1.5.3 腦組織MDA含量、SOD活性

在最后一次神經(jīng)功能缺失評分后，處死大鼠;取腦組織塊約0.3 g(電子天平稱量)，用冰生理鹽水沖洗，除去血液，濾紙拭干;稱量質(zhì)量放入勻漿器中，以0.1 g∶0.9 mL比例加入預(yù)冷的生理鹽水，制備腦組織勻漿;用低溫低速離心機(jī)將勻漿以3 000～4 000 r/min離心15 min;取上清液，即為100 g/L組織勻漿;分裝，放－86℃冰箱保存?zhèn)溆?。采?22分光光度計以硫代巴比妥酸法檢測MDA、黃嘌呤氧化酶法檢測SOD活性，并按Folin－酚試劑法標(biāo)定蛋白含量，所有操作均嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS10.0統(tǒng)計分析軟件處理。計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)()±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料采用χ2檢驗。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠死亡數(shù)量、死亡率對比

見表1。

2.2 神經(jīng)功能缺失評分

假手術(shù)組大鼠未出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙。造模各組大鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能障礙。給藥后各藥物組較模型對照組癥狀均有不同程度恢復(fù);除血腫消合劑小劑量組外，其余各組24，72 h神經(jīng)功能缺失評分均較同時間點模型對照組下降，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05或 P ＜0.01)。見表2。

表2 各組大鼠的神經(jīng)功能缺失評分對比

2.3 各組大鼠腦勻漿MDA含量、SOD活性對比

造模72 h，與模型對照組對比，各藥物組MDA含量下降，但只有血腫消合劑中劑量組較之差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);各藥物組SOD活性均增高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。見表3。

3 討論

高血壓性腦出血屬于中醫(yī)學(xué)“中風(fēng)”范疇。瘀血、濁邪、熱毒是本病的主要病機(jī)。高血壓腦出血的病理檢查可見病變側(cè)腦組織腫脹、充血，切面顯示病損區(qū)有多發(fā)性瘀點、片狀出血或血腫，可見瘀血是高血壓腦出血病理變化的結(jié)果。高血壓腦出血后腦水腫、缺血性損害、腦局部血流量下降亦符合血瘀病機(jī)。腦局部血流量下降是神經(jīng)功能惡化的直接因素，提高病灶區(qū)腦局部血流量、減少病理產(chǎn)物蓄積、減輕毒性腦損害是治療腦出血的關(guān)鍵。血腫消合劑具有破血化瘀、泄?jié)峤舛鹃_竅作用。方中田三七、大黃具有出血者止血、瘀血者活血的雙向調(diào)節(jié)作用，可有效預(yù)防再次出血和出血后的瘀血，活血而不加重腦水腫。大黃通腑瀉熱解毒。茯苓健脾滲濕，瀉濁強(qiáng)腦，有利于顱內(nèi)壓下降、昏迷病人清醒。莪術(shù)、川芎、生蒲黃活血化瘀，莪術(shù)偏于破血，但蒲黃又能止血，故三七、莪術(shù)、川芎、生蒲黃合用具有化瘀通脈、凝血止血的雙重作用。黃芩清熱解毒。諸藥合用，共奏破血逐瘀、泄?jié)峤舛尽⑿焉裢}之效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為:出血后腦損傷是一個惡性級聯(lián)過程，自由基反應(yīng)和氧化應(yīng)激效應(yīng)參與了腦出血損傷機(jī)制，其中MDA毒性作用最大。SOD是自由基清除劑，增加SOD可起到神經(jīng)保護(hù)作用［5］。MDA、SOD水平與血腫體積、發(fā)病時間、神經(jīng)功能損傷程度具有密切關(guān)系，可作為判定病情和評估預(yù)后的參考指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示:血腫消合劑大、中、小劑量能顯著提高腦組織中SOD活性(P＜0.05或P＜0.01);血腫消合劑中劑量能明顯降低MDA含量(P＜0.01)，提示血腫消合劑能減輕腦組織的脂質(zhì)過氧化損傷。

［1］David O Wiebers，Valery L Feigin，Robert D Brown Jr.腦卒中手冊［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:205.

［2］Naval NS，Nyquist P，Carhuapoma JR.ICH aspiration and thrombolysis［J］.J Neurol Sci，2007，261(1/2):80 －83.

［3］馬云枝，莊志江，張麗紅.活血化瘀法治療急性高血壓性腦出血64例［J］.陜西中醫(yī)，2006，27(2):163 －165.

［4］趙彥青，王偉民.血腫消合劑干預(yù)高血壓性腦出血后毒性腦損傷的研究［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2007，41(6):32－33.

［5］程澤沛，蔡志友，劉薇，等.急性自發(fā)性腦出血血清SOD、MDA和反應(yīng)性高血糖的臨床研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2008，37(13):1450－1452.