劉漢珍，俞 浩，毛斌斌，馬世堂，周國梁，張孝林，方艷夕，楊桂香

（安徽科技學院 食品藥品學院，安徽 鳳陽 233100）

菊科菊屬植物滁菊（Chrysanthemum morifolium cv.Chuju Ramat.）為安徽省四大道地藥材之一，是滁州市最具特色的中藥資源，史稱:甘菊、池茶菊、滁貢菊等［1－2］。1932年《張山雷醫(yī)集》記載:“（白滁菊）此菊為滁邑特產(chǎn)，色白而氣味不烈，清芬微甘，能和肝陰、潤肝燥，近世醫(yī)家甚重之?！保?］其藥用部位為頭狀花序，味辛、甘、苦，性微寒。研究表明，滁菊主要有效成分為黃酮，綠原酸，揮發(fā)油和多糖等。主要藥理作用為抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗菌、抗衰老、抗腫瘤等作用［4］。

針對近年滁菊的產(chǎn)量的不斷增大，花期集中，滁菊加工企業(yè)大量收購后因不能及時加工處理，造成大量鮮花腐爛變質。有研究表明，滁菊常溫貯放或光照條件下總黃酮降解較為明顯［5－6］。本試驗采用紫外分光光度法測定經(jīng)不同溫度儲藏后的滁菊中總黃酮和總有機酸含量的變化，為滁菊生產(chǎn)加工企業(yè)提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

滁菊（Chrysanthemum morifolium cv.Chuju Ramat.）鮮花2013年11月采于安徽菊泰滁菊草本科技有限公司施集種植基地，經(jīng)筆者鑒定為正品。

蘆丁標準品（MUST－11040302），中國藥品生物制品檢定所;綠原酸標準品（批號:885－200001），中國藥品生物制品檢定所等。試驗所用試劑無水乙醇等均為分析純。

低溫冷凍箱（MDF－U5410），日本三洋公司;冷藏箱（YC－260L），中科美菱低溫科技有限責任公司;數(shù)顯鼓風干燥箱（GZX－9146 MBE），上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠;紫外－可見分光光度計（UV－5500PC），上海元析儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 滁菊的預處理 將從安徽菊泰滁菊草本科技有限公司施集種植基地采得的新鮮滁菊進行分袋封口包裝，分為47組，將其中的2個15組滁菊分別在10℃、0℃的條件下，分別處理1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d、9d、10d、11d、12d、13d、14d、15d，并貼上相應的標簽;2 個 8 組分別置于冷凍室中－10℃、－30℃條件下，分別處理1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d;余下的1 組滁菊，直接于恒溫干燥箱中 40℃條件下干燥至完全，并通過粉碎機分別對已經(jīng)經(jīng)過相關貯藏及干燥處理后的各組滁菊粉碎過篩處理［7］。

1.2.1 滁菊總黃酮含量的測定［8］

1.2.1.1 滁菊總黃酮樣品溶液的制備 先配置70%的乙醇溶液，用無水乙醇和蒸餾水按照體積比為7∶3來配置。

10℃冷藏處理組:分別稱取4g經(jīng)過不同冷藏時間處理的滁菊粉末放于圓底燒瓶中，并且編號為A1，A2，……，A15。再加入70%的乙醇80mL回流提取1.5h，抽濾，取濾液蒸干［9］。

0℃冷藏處理組、－10℃冷凍處理組、－30℃冷凍處理組黃酮的提取與上述方法相同，編號分別為B1，B2，……，B15;C1，C2，……，C8;D1，D2，……，D8。另取未經(jīng)任何冷藏及冷凍處理而直接經(jīng)過40℃烘干的滁菊粉末作為空白對照，按相同提取方法提取總黃酮，編號為E。

1.2.1.2 蘆丁標準品的制備 精密稱取蘆丁標準品1.6mg，置10mL量瓶中，用70%乙醇溶解定容至刻度，振蕩均勻，配得濃度為0.16mg/mL 的對照品溶液。精密量取對照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分別置于10mL量瓶中，分別加入乙醇2.4mL，搖勻，再加5%NaNO2溶液0.4mL，搖勻，放置6min;分別加10%Al（NO3）3溶液0.4mL，搖勻，放置6min;加4%NaOH溶液4mL搖勻，最后加入70%的乙醇定容至刻度，搖勻，放置15min，備用，待測。

1.2.1.3 黃酮含量的測定 按照1.2.1.2中的方法配制供試品溶液，在504nm處采用紫外分光光度法測吸光度，依據(jù)已制定的標準曲線換算出供試品黃酮的含量。

黃酮得率（w/w）/%=［黃酮干品的重量（g）/粗粉的重量（g）］×100%

1.2.2 滁菊總有機酸的測定

1.2.2.1 滁菊樣品溶液的制備 10℃貯藏組:準確稱取不同貯藏時間的滁菊粉末各2g，分別放置于錐形瓶中且編號為a1，a2，……，a15，加60%的乙醇溶液，物料比為1:40，即加入乙醇量為80mL，超聲提取45min，提取兩次后過濾，合并兩次濾液，離心5min（2500r/min）后抽濾，蒸干至完全，用60%乙醇定容至一定 10mL，待測［10］。

0℃貯藏組、－10℃冷凍組、－30℃冷凍組，分別編號為 b1，b2，……，b15;c1，c2，……，c8;d1，d2，……，d8和e，將提取液蒸干至完全，用提取試劑定容至10mL，待測。

1.2.2.2 綠原酸標準溶液及標準曲線的制備［10－11］精密稱取綠原酸標準品3.0mg至100mL容量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，備用。準確量取綠原酸樣品溶液1，2，3，4，5mL，置10mL容量瓶中，加60%乙醇定容至刻度，備用。

圖1 不同貯藏條件對總黃酮提取率的影響Fig.1 Influence of different storage conditions on flavonoids

2 結果與分析

2.1 蘆丁標準曲線的繪制

用上述放置備用的對照品溶液，在400～600nm范圍內(nèi)掃描最大吸光度的波長，以70%的乙醇溶液作空白對照，掃描蘆丁標準品溶液，在504nm處有最大吸光度。得到回歸方程為:Abs=0.0136*（C）－0.0925 R2=0.9990。

2.1.1 滁菊總黃酮提取率的測定 分別取一定的量的上述五組滁菊提取物于25mL的容量瓶中，加入70%的乙醇溶解至刻度，精密吸取0.2mL于10mL容量瓶中，按照蘆丁標準曲線繪制方法操作，測定吸光度值，并計算干燥滁菊中總黃酮提取率。結果見圖1。

2.1.2 直接烘干滁菊總黃酮的含量測定 用紫外可見－分光光度計在波長504nm處測量E組，其總黃酮提取率平均為6.23%。

2.2 綠原酸標準溶液及標準曲線的制備

以標準品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程為:Abs=0.06553*（C）－0.02414 R2=0.9994。

2.2.1 滁菊總有機酸提取率的測定 精密量取1mL的上述五組待測液于50mL的容量瓶中，加入60%的乙醇溶解至刻度，按照綠原酸標準曲線繪制方法操作，測定吸光度值，并計算干燥滁菊中總有機酸的提取率。結果見圖2。

圖2 不同貯藏條件對總有機酸提取率的影響Fig.2 Influence of different storage conditions on the total organic acid

在實驗中，貯藏溫度為0℃時黃酮含量維持的穩(wěn)定時間最長，為11d，且總有機酸含量降低緩慢，相對于其他貯藏溫度來看更為適合作為滁菊的貯藏方法。溫度過低或過高都會使總黃酮的保存的時間縮短，在0℃貯藏時，總黃酮維持的時間長，且總有機酸降低的速度相對較慢。

外觀的變化:經(jīng)過－30℃、－10℃、0℃、10℃貯藏處理數(shù)天的滁菊，分別在40℃的烘箱中干燥后的顏色:－30℃貯藏后烘干的滁菊，其顏色全為深棕色，脆性大，用水浸泡后顏色變淺近原色;－10℃儲藏后烘干的滁菊，其大多數(shù)顏色為棕色;0℃貯藏的滁菊烘干后顏色基本與直接烘干組的顏色一致;10℃貯藏的滁菊在貯藏期間顏色開始改變?yōu)楹稚娓珊蟮念伾S貯藏時間的延長而加深。關于其外觀顏色等性狀的改變，是否是其有效成分的作用，還需進一步的探究。

3 結論

根據(jù)不同貯藏溫度對總黃酮、總有機酸提取率以及外觀的變化，確定0℃是新鮮滁菊的最佳貯藏溫度，該溫度貯藏下，在一定的時間內(nèi)對滁菊總黃酮、有機酸類含量影響較少，外觀影響也較小，可作為滁菊生產(chǎn)加工企業(yè)對滁菊的短時貯存溫度。

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