劉小鳳,沈守星,魏秋姣,徐剛,周儉中,吳興中(.廣東省珠海市慢性病防治中心 59000;.廣東省皮膚性病防治中心,廣東廣州 50500)
淋病是性傳播疾病之一,也是一種公共衛(wèi)生疾病,能夠促進(jìn)艾滋病的感染和傳播,多年來由于抗菌藥物的濫用和不規(guī)范使用,使淋球菌對(duì)外環(huán)境產(chǎn)生了適應(yīng)性變異,致使其對(duì)多種抗菌藥物的敏感性不斷下降。為了解珠海地區(qū)淋球菌流行株對(duì)抗菌藥物的敏感性及產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的淋球菌(PPNG)和質(zhì)粒介導(dǎo)的四環(huán)素高度耐藥淋球菌(TRNG)的流行狀況,現(xiàn)對(duì)2011~2013年度珠海地區(qū)臨床分離的192株淋球菌流行株檢測其對(duì)6種抗菌藥物的最小抑菌濃度(MIC)、PPNG 和TRNG,報(bào)道如下。
1.1 一般資料來自2011年1月至2013年6月珠海市22家性病監(jiān)測點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室從STD 門診患者和高危人群體檢者的泌尿生殖道分泌物中,分離得到的192株淋球菌株。所有菌株經(jīng)革蘭染色、氧化酶試驗(yàn)和糖發(fā)酵試驗(yàn)證實(shí)后,在選擇性培養(yǎng)基(TM)上傳代1次,經(jīng)18h培養(yǎng)后,將純菌株洗脫于小牛血清中,保存于-70℃低溫冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>
1.2 藥物與菌株6種抗菌藥物(青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、壯觀霉素、頭孢曲松和頭孢克肟)由廣東省皮膚性病防治中心提供。GC基礎(chǔ)培養(yǎng)基(Oxoid公司生產(chǎn))加入10%脫纖維新鮮羊血。6株淋球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株D、G、J、L 由廣東省皮膚性病防治中心提供,其中D、G、L 株為產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶陰性菌株,J株為PPNG 菌株。
1.3 方法
1.3.1 最小抑菌濃度(MIC)測定采用世界衛(wèi)生組織(WHO)西太區(qū)淋球菌耐藥監(jiān)測規(guī)劃推薦的瓊脂稀釋法測定MIC[1]。先將各抗菌藥物用適當(dāng)?shù)木彌_液按要求配制成原液,再倍比稀釋成多個(gè)濃度,各抗菌藥物在培養(yǎng)皿上的最終濃度,青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星和壯觀霉素均為0.03~32μg/mL,頭孢克肟、頭孢曲松0.002~1μg/mL。試驗(yàn)菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株首先在無選擇性培養(yǎng)基(GC)上傳代兩次,選用16~18h的新鮮培養(yǎng)物制成107~108cfu/mL菌懸液,用多頭接種器蘸取菌液接種于含各種不同濃度抗菌藥物的瓊脂平板上,置35℃、5%CO2環(huán)境下培養(yǎng),24h后觀察結(jié)果,記錄無菌落生長的最低藥物濃度為該藥的MIC。每批試驗(yàn)均由標(biāo)準(zhǔn)菌株質(zhì)控,按WHO 西太平洋地區(qū)淋球菌耐藥監(jiān)測項(xiàng)目推薦的標(biāo)準(zhǔn)判斷藥物敏感性[1]。頭孢克肟敏感性試驗(yàn)和判斷標(biāo)準(zhǔn)按美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)判斷[2]。并統(tǒng)計(jì)出MIC50及MIC90。
1.3.2 產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶淋球菌(PPNG)的檢驗(yàn)采用紙片酸度法[3],即先將濾紙吸足青霉素溶液(以溴甲酚紫為指示劑),取待檢菌涂于濾紙上,置37℃溫育30min,濾紙上菌落顏色由紫色變?yōu)辄S色為β-內(nèi)酰胺酶陽性,顏色無變化為陰性。每批試驗(yàn)以標(biāo)準(zhǔn)菌株J株作陽性對(duì)照,標(biāo)準(zhǔn)菌株L株作陰性對(duì)照。
1.3.3 質(zhì)粒介導(dǎo)的四環(huán)素高度耐藥淋球菌(TRNG)的檢驗(yàn)采用監(jiān)測規(guī)劃要求的瓊脂稀釋法,當(dāng)四環(huán)素MIC≥16μg/mL時(shí)判為TRNG 株[3]。
2.1 質(zhì)粒介導(dǎo)的淋球菌耐藥性192株淋球菌中共檢出PPNG 66株(34.4%),檢出TRNG 94株(49.0%)。
2.2 MIC測定結(jié)果2011~2013年度監(jiān)測的淋球菌對(duì)青霉素耐藥率為68.8%(132/192),環(huán)丙沙星耐藥率為100.0%(192/192),四環(huán)素耐藥率為99.0%(190/192),其中同時(shí)對(duì)青霉素、四環(huán)素和環(huán)丙沙星三重耐藥的有130株(67.7%);青霉素、四環(huán)素和環(huán)丙沙星的MIC50和MIC90均已超過耐藥標(biāo)準(zhǔn)。壯觀霉素、頭孢曲松和頭孢克肟耐藥株,敏感性分別為100.0%、66.7%和95.8%,頭孢曲松中敏率為33.3%(64/192),頭孢克肟中敏率為4.2%(8/192)。見表1、2。
表1 192株淋球菌對(duì)6種抗菌藥物MIC的結(jié)果比較(n)
表2 192株淋球菌對(duì)6種抗菌藥物的敏感性[n(%)]
淋球菌對(duì)抗菌藥物耐藥性的問題早已引起全球關(guān)注,1987年WHO 在全球范圍內(nèi)開展淋球菌耐藥性監(jiān)測,建議對(duì)青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松和壯觀霉素5種核心組抗菌藥物進(jìn)行監(jiān)測,以動(dòng)態(tài)了解和掌握各國、各地流行的淋球菌株對(duì)抗菌藥物的敏感性。從國內(nèi)外學(xué)者的研究報(bào)道中顯示,淋球菌的耐藥性及質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥菌株的流行狀況隨時(shí)間和地區(qū)的不同而存在差異[4-8]。本研究通過對(duì)6種抗菌藥物MIC 測定,結(jié)果顯示珠海地區(qū)淋球菌對(duì)青霉素、四環(huán)素和環(huán)丙沙星的耐藥率均很高,分別為68.8%、99.0%和100.0%,與2010年該地區(qū)的監(jiān)測結(jié)果基本相近[4]。青霉素的耐藥率低于廣州、佛山、江門和肇慶4個(gè)城市的84.8%、深圳的85.7%和汕頭的84.8%,也低于上海的98.11%,可能與該地區(qū)較少使用青霉素有關(guān)[5-8]。四環(huán)素及環(huán)丙沙星該地區(qū)耐藥率為99.0%和100.0%,均高于國內(nèi)其他地區(qū)的報(bào)道[5-8]。提示青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星對(duì)該地區(qū)流行的淋球菌株的敏感性差,不應(yīng)作為治療淋病的首選藥物。
質(zhì)粒介導(dǎo)的淋球菌PPNG 和TRNG 的檢出率為34.4%和49.0%,與2010年該地區(qū)的監(jiān)測結(jié)果31.4%和48.6%基本相近,說明該地區(qū)PPNG 和TRNG 仍處于高流行率[4]。雖然青霉素和四環(huán)素很少作為治療淋病的首選藥物,但PPNG 和TRNG 流行率仍是淋球菌耐藥性流行病學(xué)監(jiān)測的重要指標(biāo)之一,PPNG 和TRNG 是由質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性,耐藥質(zhì)粒可以在同種菌屬間傳遞造成耐藥質(zhì)粒的廣泛傳播和高水平的耐藥性,通過對(duì)質(zhì)粒介導(dǎo)的淋球菌耐藥株的監(jiān)測,可以評(píng)估淋球菌耐藥發(fā)展趨勢,了解流行病學(xué)狀況。
頭孢菌素作為淋病治療的首選藥物,多年來一直為臨床醫(yī)師所關(guān)注,但近年來其敏感性受到挑戰(zhàn),低敏株不斷上升,本組監(jiān)測的192株臨床菌株,中敏率為33.3%(64/192),與吳興中等[5]報(bào)道的廣東省4個(gè)城市的34.0%中敏率基本一致,也與2010年該地區(qū)的監(jiān)測結(jié)果37.10%基本相近,低于2008年中國淋球菌監(jiān)測網(wǎng)監(jiān)測頭孢曲松低敏率的47.42%[4-5,9]。雖然該地區(qū)尚未出現(xiàn)耐藥菌株,但2009年在日本東京已分離到頭孢曲松耐藥株,香港也有口服頭孢布烯治療淋病失敗的報(bào)道[10-11]。珠海是珠三角中心城市和旅游城市,比鄰港澳,接壤中山、江門,各地經(jīng)濟(jì)及商務(wù)活動(dòng)聯(lián)系密切,人口流動(dòng)性大,容易造成各地耐藥菌株的攜入性傳播,因此,應(yīng)引起臨床和有關(guān)部門的高度重視,治療時(shí)應(yīng)注意劑量和療效的觀察,防止頭孢曲松耐藥菌株在該地區(qū)的出現(xiàn)。頭孢克肟為第3代口服頭孢菌素類的抗菌藥物,在珠海地區(qū)用于治療淋病的仍較少,從監(jiān)測結(jié)果顯示,其敏感率為95.8%,低敏率為4.2%,提示頭孢克肟對(duì)該地區(qū)淋球菌流行株有較好的敏感性,也可以作為淋球菌治療的首選藥物。
壯觀霉素的抗菌活性仍較強(qiáng),MIC50和MIC90均為16μg/mL,仍處在敏感范圍,該地區(qū)流行的淋球菌株對(duì)壯觀霉素的敏感性為100%,與各地報(bào)道的一致,提示該種藥物仍是該地區(qū)治療淋病的有效藥物[4-9]。但蘇曉紅等[12]報(bào)道壯觀霉素治療淋球菌失敗的3例中,有2例為壯觀霉素耐藥株,因此臨床在選用壯觀霉素治療淋病時(shí),應(yīng)足量規(guī)范用藥。
本研究分析了珠海地區(qū)淋球菌對(duì)6種抗菌藥物的敏感性和PPNG、TRNG 的流行狀況,提示頭孢曲松、頭孢克肟和壯觀霉素可作為該地區(qū)治療淋病的首選藥物,但隨著其廣泛的應(yīng)用,耐藥性也逐漸上升,當(dāng)1種抗菌藥物在某一地區(qū)對(duì)某種細(xì)菌的耐藥性達(dá)到5%以上時(shí),就不應(yīng)成為臨床上治療該細(xì)菌感染所致疾病的第一線藥物,因此,加強(qiáng)該地區(qū)淋球菌耐藥性及耐藥株的流行狀況的持續(xù)監(jiān)測很有必要。
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