馬楠，李國智，馬?。ㄋ拇ㄊ〗褪芯农柸t(yī)院：.檢驗科；.重癥醫(yī)學(xué)科；.婦產(chǎn)科 6700）

血流感染為最嚴重的臨床感染之一，致病的微生物包括病毒、細菌及寄生蟲等，病死率較高［1］。據(jù)報道，全球每年約發(fā)生2×106例血流感染，病死率為20%～50%［2］。第6代全自動血培養(yǎng)BacT／Alert3D240系統(tǒng)的引進和推廣使用，為敗血癥及嚴重感染的診斷和治療提供了十分有利的條件。為了進一步了解抗菌藥物治療濃度、送檢時間、溫度、不同細菌濃度、采血量及采集套數(shù)對血培養(yǎng)結(jié)果的影響，現(xiàn)選擇該院2009年1月至2013年3月374例住院患者，回顧分析了BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)的檢測結(jié)果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2009年1月至2013年3月該院門、急診及住院發(fā)熱或全身性感染患者374例。血培養(yǎng)系統(tǒng)采用BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)（法國梅里埃公司）。血培養(yǎng)瓶使用BacT／Alert的專用配套血培養(yǎng)瓶，包括成人需氧血培養(yǎng)瓶、成人厭氧血培養(yǎng)瓶、兒童專用瓶、樹脂瓶（法國梅里埃公司）。

1.2 方法

1.2.1 采取患者血液標本按BacT／Alert操作規(guī)程加入相應(yīng)的血培養(yǎng)瓶。

1.2.2 陽性培養(yǎng)瓶的處理陽性標本采用常規(guī)步驟斜瓶，及時轉(zhuǎn)種血瓊脂平板、巧克力瓊脂和中國藍平皿，置35℃培養(yǎng)18～24h。每一陽性培養(yǎng)瓶必須做涂片行革蘭染色并做直接藥敏試驗，以確定細菌類型，將初步結(jié)果通知臨床作為血培養(yǎng)的一級報告，為臨床醫(yī)師初步診斷提供依據(jù)，同時將分離出的菌落做藥敏試驗和生化鑒定，經(jīng)17～22h培養(yǎng)后，作為最終血液培養(yǎng)報告。

1.2.3 陰性培養(yǎng)瓶的處理培養(yǎng)監(jiān)測7d系統(tǒng)報告的陰性瓶，可發(fā)出無菌生長報告。同時用無菌注射器或系統(tǒng)附帶采樣針取材轉(zhuǎn)種血瓊脂和巧克力平皿，35℃培養(yǎng)18～24h后，仍無細菌生長，則確定為陰性。

1.2.4 假陽性和假陰性的判斷如果系統(tǒng)報警提示有菌落生長，但分離不到細菌且革蘭染色涂片未檢測到微生物即為假陽性；5d未顯示報警而轉(zhuǎn)種涂片后發(fā)現(xiàn)細菌即為假陰性。

1.2.5 細菌鑒定按Microscan儀操作程序進行，個別細菌輔以常規(guī)方法。

1.2.6 細菌濃度對檢出時間的影響分別用ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌，分別制成1×102、1×104、1×106cfu／mL 菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1mL菌液，置于血培養(yǎng)瓶內(nèi)，立即放入BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.7 不同溫度放置對檢測結(jié)果的影響將ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌制成1×102cfu／mL 的菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1 mL菌液置于血培養(yǎng)瓶內(nèi)，放置4、10、25℃12h后移入BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.8 不同時間放置后對檢測結(jié)果的影響將ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌制成1×102cfu／mL的菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1 mL菌液置于血培養(yǎng)瓶內(nèi)，放置2、4、8、12、24h后移入BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.9 抗菌藥物對培養(yǎng)結(jié)果的影響培養(yǎng)瓶接種完菌液后加入抗菌藥物，同時將菌液加入不含抗菌藥物的培養(yǎng)瓶作為對照。

1.2.10 采樣量及采樣套數(shù)對檢測結(jié)果的影響對成人采集2～5mL、5～10mL血液，對兒童采集1～2mL、2～5mL，分別采用1、2、3套，比較其對檢測結(jié)果的影響。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。組間比較采用配對t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 菌株的種類與檢出時間的關(guān)系374份血標本中共檢出63株病原菌，陽性率為16.8%，其中65.1%的細菌在24h內(nèi)檢出，28.5%的細菌在24～48h內(nèi)檢出，6.3%的細菌在48h后檢出。見表1。

2.2 假陽性與假陰性的檢出率在374份標本中假陽性4株，假陽性率為1.1%；假陰性為1株，假陰性率為0.2%。

2.3 不同細菌濃度的檢出時間不同細菌濃度與檢測時間的關(guān)系，見表2。

2.4 不同溫度對檢測結(jié)果影響血培養(yǎng)瓶放置4、10、25℃3種溫度與檢測時間的關(guān)系，見表3。

2.5 送檢時間對檢測結(jié)果的影響放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時間之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），放置2h的血培養(yǎng)檢測結(jié)果與放置12、24h比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

2.6 抗菌藥物對檢測結(jié)果的影響選擇常用的幾種抗菌藥物分別加入接種菌液的培養(yǎng)瓶中，同時將菌液加入不含抗菌藥物的培養(yǎng)瓶作為對照。見表5。

2.7 采樣量及采樣套數(shù)對檢測結(jié)果的影響成人采血量為2～5mL時檢出率為55.13%，5～10mL 檢出率為90.21%；兒童采血量為1～2mL時檢出率為46.75%，2～5mL 時檢出率為87.68%；采集數(shù)為3套時檢出率最高（96.87%）。見表6。

表1 菌株的種類與檢出時間的關(guān)系（n）

表2 3種不同細菌濃度與檢出時間的關(guān)系（%）

表3 放置3種不同溫度細菌與檢出時間的關(guān)系（%）

表4 送檢時間對檢測結(jié)果的影響（%）

表5 抗菌藥物對檢測結(jié)果的影響（%）

續(xù)表5 抗菌藥物對檢測結(jié)果的影響（%）

表6 采樣量及采樣套數(shù)對檢測結(jié)果的影響（%）

3 討論

BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)儀是第6代全新的血培養(yǎng)系統(tǒng)，通過自動連續(xù)不斷地監(jiān)測細菌在生長過程中消耗氧，產(chǎn)生氫氣、二氧化碳和氮氣，通過pH 及顏色變化及培養(yǎng)瓶內(nèi)壓力改變，可報警提示培養(yǎng)液中細菌數(shù)量。有研究顯示，BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)儀具有操作簡便、靈敏度高、準確性好、特異性強、誤診率及污染率低的特點［3－4］。本組374份標本中假陽性4株，假陽性率為1.1%，假陰性1株，假陰性率為0.2%。據(jù)有關(guān)報道，血標本體積超過12 mL，有可能導(dǎo)致假陽性，同時，細菌自溶、溫度不穩(wěn)定或其他原因也可能導(dǎo)致假陽性的出現(xiàn)［5－6］。1例假陰性標本，盲轉(zhuǎn)培養(yǎng)為表皮葡萄球菌，患者此前血培養(yǎng)結(jié)果也為表皮葡萄球菌，推測該次假陰性結(jié)果可能與患者接受抗菌藥物治療，外周血細菌濃度太低導(dǎo)致血培養(yǎng)儀無法檢出有關(guān)。假陰性比假陽性對患者的危害更大，因為其會忽略病情，錯過關(guān)鍵治療時間，造成嚴重后果，因此，血液培養(yǎng)檢測質(zhì)量顯得至關(guān)重要［7］。

3.1 檢出時間與細菌種類和濃度的關(guān)系本研究檢出的細菌種類多，分布范圍廣。其中大腸埃希菌最多，占分離病原菌總數(shù)的14.3%，其次依次為金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌及醋酸鈣不動桿菌，前6位分離出的菌株數(shù)占總數(shù)的61.9%，與張冀霞等［8］報道的相符合。本研究表明，細菌濃度與檢出時間有相關(guān)性，即細菌濃度越高，檢出時間越短。

3.2 放置溫度和時間對培養(yǎng)結(jié)果的影響將含有細菌的培養(yǎng)瓶放置不同溫度對檢出時間影響不大；送檢時間的延遲不影響病原菌檢測，但檢出的時間有所減少。放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時間之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時間與放置12、24h比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3.3 抗菌藥物對檢出結(jié)果的影響部分患者在接受抗菌藥物治療后采集血培養(yǎng)標本，病原菌的生長會受到血液中藥物濃度的抑制，對陽性檢出率無影響，僅檢出時間稍為延長。雖然添加了一些吸附抗菌藥物的物質(zhì)，如活性炭或樹脂在商品培養(yǎng)基中，但這類物質(zhì)不是對所有抗菌藥物都能起到作用。在當(dāng)前抗菌藥物濫用的情況下，各廠家應(yīng)該考慮進一步改進培養(yǎng)瓶在成分和離子強度上具有對抗菌藥物濃度一定的稀釋作用，但抗菌藥物的長期使用可能會影響檢測速度甚至造成假陰性［9－10］。

3.4 采血量及采集套數(shù)對檢出結(jié)果的影響血液采樣量不足時會導(dǎo)致檢測敏感度下降，成人采血量為5～10mL 時檢出率為90.21%，兒童采血量為2～5mL時檢出率為87.68%；采集數(shù)為3套時檢出率最高（96.87%）。成人推薦的采血量為5～10mL，兒童為2～5mL；每次應(yīng)采集2～3套標本。

綜上所述，細菌濃度及種類、抗菌藥物、溫度及送檢時間、采血量及采集套數(shù)均會使BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)儀對病原菌的檢出時間產(chǎn)生影響，不能有效地反映患者準確的檢測指標。

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