張俊英+馮發(fā)青+李霞+王蘭蘭+向麗萍+王奧

摘要：建立了基于高效液相色譜（HPLC）同時(shí)測(cè)定鳳岡鋅硒綠茶中7種兒茶素類物質(zhì)：兒茶素（+C）、沒食子兒茶素（GC）、沒食子兒茶素沒食子酸酯（GCG）、表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素（EGC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、沒食子酸（GA）和咖啡因（CAF）的方法。色譜條件為Kromasil 100-5 C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈、乙酸及EDTA溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫；柱溫為35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm。結(jié)果表明，茶葉中各目標(biāo)峰均達(dá)基線分離，線性關(guān)系良好，該方法簡(jiǎn)捷、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

關(guān)鍵詞：鳳岡鋅硒茶；兒茶素；沒食子酸；咖啡因；HPLC

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）17-4175-03

Simultaneous Determination of Nine Quality Ingredients in Zinc and Selenium

Tea of Fenggang with HPLC

ZHANG Jun-ying， FENG Fa-qing， LI Xia， WANG Lan-lan， XIANG Li-ping， WANG Ao

（Institute of Product Quality Inspection & Testing of Zunyi， Zunyi 563000， Guizhou， China）

Abstract： HPLC was used to simultaneously determine catechin（+C），（-）-gallocatechin （GC）， （-）-gallocatechin gallate （GCG）， L-epicatechin（EC），（-）-epigallocatechin（EGC），epigallocatechin gallate（EGCG），（-）-epicatechin gallate （ECG）， gallic acid （GA） and caffeine （CAF） in zinc and selenium tea of Fenggang. The analyses were made with a Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）. The mobile phase was mixture solution of acetonitrile， acetic acid and EDTA solution with the gradient elution. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 278 nm. The column temperature was 35 ℃. The results showed that there was a good separation and linearity for all 9 compounds tested in zinc and selenium tea of Fenggang. It is indicated that the method was simple， feasible and reproducible.

Key words： zinc and selenium tea of Fenggang；catechins； gallic acid； caffeine； HPLC

兒茶素類化合物具有防治心血管疾病、預(yù)防癌癥等功能[1，2]；咖啡因具有適度祛疲勞、興奮神經(jīng)的作用[3]；沒食子酸具有抗菌，抗病毒、抗腫瘤等功效[4]，而且兒茶素、咖啡堿類物質(zhì)還是決定茶葉色、香、味的重要成分，是茶湯滋味苦澀的主要因素之一[5]，也與茶葉品質(zhì)密切相關(guān)。但值得注意的是，現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8313-2008中對(duì)茶葉中兒茶素類物質(zhì)的測(cè)定僅限于5種[6]，而且對(duì)國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定以外的其他兒茶素類物質(zhì)測(cè)定的研究較少[7，8]，缺乏以HPLC技術(shù)為基礎(chǔ)同時(shí)測(cè)定茶葉中沒食子酸、咖啡因和兒茶素等品質(zhì)成分的研究[9-11]。因此，本研究以貴州特色地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品鳳岡鋅硒茶為對(duì)象，建立并優(yōu)化了一種基于HPLC對(duì)茶葉中沒食子酸、咖啡因和兒茶素等9種品質(zhì)成分的同時(shí)測(cè)定方法，以期更好地反映鳳岡鋅硒茶質(zhì)量，并為其進(jìn)一步的研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

于2012～2013年，依據(jù)鳳岡富鋅富硒茶地理標(biāo)志產(chǎn)地保護(hù)所界定的地域范圍，在貴州省遵義市鳳岡縣田壩的3個(gè)茶園現(xiàn)場(chǎng)采摘、經(jīng)過加工得到7個(gè)鳳岡鋅硒綠茶樣品。所有樣品均為獨(dú)芽、依照鳳岡富鋅富硒茶加工工藝進(jìn)行制作，樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎、過20目篩后密封備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取樣品0.200 0 g于離心管中，加入5 mL 70%的甲醇溶液，超聲提取，于5 000 r/min離心5 min后收集上清液，重復(fù)提取一次，合并所得上清液。準(zhǔn)確量取2.0 mL上清液至10 mL容量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，過0.45 μm濾膜，即得待測(cè)液。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置 將25 mL EDTA溶液（10 g/L）、25 mL抗壞血酸溶液（10 g/L）、50 mL乙腈、以去離子水定容至500 mL，制得混合溶液。

分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品適量，以混合溶液溶解定容配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，其濃度分別為：0.121 1 mg/mL（GA）、0.484 6 mg/mL（GC）、2.450 0 mg/mL（EGC）、1.098 0 mg/mL（+C）、2.014 0 mg/mL（CAF）、2.008 0 mg/mL（EGCG）、1.019 0 mg/mL（EC）、0.441 1 mg/mL（GCG）、2.002 0 mg/mL（ECG）。endprint

取上述儲(chǔ)備液GA、GC、GCG各1.00 mL，EGC、CAF、EC、ECG各0.50 mL，EGCG 0.20 mL，+C 0.35 mL，以混合溶液溶解并定容至10 mL，即得混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.3 檢測(cè)條件 美國Waters公司e2695高效液相色譜儀，流動(dòng)相A：90 mL乙腈、20 mL乙酸、2 mL EDTA，以去離子水定容至1 L；流動(dòng)相B：800 mL乙腈、20 mL乙酸、2 mL EDTA，以去離子水定容至1 L。

色譜柱為Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），梯度洗脫條件為：0～10 min（100% A），10～32 min（100%～80% A）；流量為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm；進(jìn)樣體積為10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的優(yōu)化

本研究考察了10、20、30、40、60 min共5個(gè)提取時(shí)間對(duì)茶葉中9種成分含量的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)提取時(shí)間為30 min時(shí)，提取出茶葉中9種成分含量總和達(dá)到最大，所以選擇最佳提取時(shí)間為30 min。

同時(shí)考察了以5 mL 70%的甲醇溶液超聲30 min提取1、2、3次所得茶葉中9種成分含量總和，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重復(fù)提取兩次效果最佳，所以選擇以5 mL 70%的甲醇溶液提取兩次。

試驗(yàn)還考察超聲30 min重復(fù)提取兩次與GB/T 8313-2008中70 ℃水浴提取進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果表明，超聲30 min重復(fù)提取兩次與70 ℃水浴提取10 min兩種提取效果相當(dāng)。但因超聲提取操作簡(jiǎn)便，過程易于控制，所以選擇超聲取作為提取方式。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

紫外光譜掃描結(jié)果顯示，9種組分在278 nm處均有較強(qiáng)吸收，故設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm。標(biāo)準(zhǔn)品、供試品、空白溶液的色譜圖如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)品、供試品色譜圖中的各目標(biāo)峰分離度、峰型均較好，且無雜質(zhì)干擾。

2.3 方法驗(yàn)證

2.3.1 線性方程 分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于10 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋并定容至刻度，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積值（y）對(duì)進(jìn)樣量（x）進(jìn)行線性回歸，9種組分的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)如表1所示，測(cè)定結(jié)果表明，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算RSD值。取同一樣品待測(cè)液，分別在0、1、2、3、4、5 h進(jìn)樣，記錄各色譜峰峰面積，計(jì)算其RSD值。取相同樣品，按優(yōu)化后的方法制備6份待測(cè)液，計(jì)算測(cè)得的9種組分含量RSD值。精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗(yàn)計(jì)算RSD值結(jié)果如表2所示，結(jié)果表明，儀器精密度良好，供試品溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定，方法重復(fù)性良好。

2.3.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn) 采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行方法回收率試驗(yàn)，準(zhǔn)確稱取已知組分含量的茶葉樣品1份，再加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，按優(yōu)化后的方法制備待測(cè)液，測(cè)定并計(jì)算回收率。加樣回收率測(cè)定結(jié)果如表3所示，各組分的回收率均為96.36%～104.59%，說明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.4 樣品測(cè)定

取各茶葉樣品按前述方法制備待測(cè)液，以峰面積為指標(biāo)，外標(biāo)法定量，測(cè)定結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，9種品質(zhì)成分在鳳岡鋅硒茶樣品中均檢出，且兒茶素類物質(zhì)EGCG含量最高，GA含量最低。該方法能夠有效的進(jìn)行包括GC、GCG在內(nèi)的茶葉中9種品質(zhì)相關(guān)成分的同時(shí)測(cè)定。

3 小結(jié)與討論

通過對(duì)供試品溶液制備方法的試驗(yàn)考察和對(duì)色譜條件的優(yōu)化，建立了同時(shí)測(cè)定鳳岡鋅硒茶中兒茶素（GC、EGC、+C、EGCG、EC、GCG、ECG）、沒食子酸（GA）和咖啡因（CAF）等9個(gè)成分的高效液相色譜方法。結(jié)果表明，各目標(biāo)峰分離度、峰型均較好。通過線性范圍、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率的系統(tǒng)性試驗(yàn)考察，表明該方法操作簡(jiǎn)單、快速，且測(cè)定效果良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本方法在GB/T 8313-2008的基礎(chǔ)上增加了GC和GCG兩種兒茶素類物質(zhì)的測(cè)定，同時(shí)對(duì)其提取工藝進(jìn)行了改進(jìn)，使得樣品前處理更加方便快捷、提取過程更易于控制，為更加全面的反映鳳岡鋅硒茶品質(zhì)提供了一種可行的方法，同時(shí)也為其他茶葉的品質(zhì)成分研究提供了參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙保路.茶多酚的抗氧化作用[J].科學(xué)通報(bào)，2002，47（16）： 1206-1210.

[2] 焦蓓蓓.茶多酚的藥理作用研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009， 5（1）：131-133.

[3] 易超然，衛(wèi)中慶.咖啡因的藥理作用和應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2005，18（3）：270-272.

[4] 江蘇新藥學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上海科技出版社，2000.

[5] 蒲曉亞，袁毅君，王廷璞，等.茶葉的主要呈味物質(zhì)綜述[J].天水師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，31（2）：40-44.

[6] GB/T 8313-2008，茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法[S].

[7] 鐘世安，周春山，李宇萍.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中六種兒茶素組分的研究[J].理化檢驗(yàn)，2003，39（9）：542-546.

[8] 劉小喬，李忠岐，高 靜，等.茶多酚中兒茶素類的HPLC分析[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2012，29（5）：2611-2615.

[9] 高 俊，夏 濤，朱 博，等.HPLC-PDA對(duì)茶葉中茶氨酸、兒茶素和生物堿的同時(shí)分離檢測(cè)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2008，35（3）：324-328.

[10] 凌 云，趙云峰，李志軍，等.茶葉及茶飲料中兒茶素和咖啡因的多組分HPLC分析方法[J].衛(wèi)生研究，2005，34（2）：187-190.

[11] 李銀花，李 娟，龔 雪，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中8種兒茶素、3種嘌呤堿和沒食子酸[J].食品科學(xué)，2011，32（18）： 214-217.endprint

取上述儲(chǔ)備液GA、GC、GCG各1.00 mL，EGC、CAF、EC、ECG各0.50 mL，EGCG 0.20 mL，+C 0.35 mL，以混合溶液溶解并定容至10 mL，即得混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.3 檢測(cè)條件 美國Waters公司e2695高效液相色譜儀，流動(dòng)相A：90 mL乙腈、20 mL乙酸、2 mL EDTA，以去離子水定容至1 L；流動(dòng)相B：800 mL乙腈、20 mL乙酸、2 mL EDTA，以去離子水定容至1 L。

色譜柱為Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），梯度洗脫條件為：0～10 min（100% A），10～32 min（100%～80% A）；流量為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm；進(jìn)樣體積為10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的優(yōu)化

本研究考察了10、20、30、40、60 min共5個(gè)提取時(shí)間對(duì)茶葉中9種成分含量的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)提取時(shí)間為30 min時(shí)，提取出茶葉中9種成分含量總和達(dá)到最大，所以選擇最佳提取時(shí)間為30 min。

同時(shí)考察了以5 mL 70%的甲醇溶液超聲30 min提取1、2、3次所得茶葉中9種成分含量總和，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重復(fù)提取兩次效果最佳，所以選擇以5 mL 70%的甲醇溶液提取兩次。

試驗(yàn)還考察超聲30 min重復(fù)提取兩次與GB/T 8313-2008中70 ℃水浴提取進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果表明，超聲30 min重復(fù)提取兩次與70 ℃水浴提取10 min兩種提取效果相當(dāng)。但因超聲提取操作簡(jiǎn)便，過程易于控制，所以選擇超聲取作為提取方式。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

紫外光譜掃描結(jié)果顯示，9種組分在278 nm處均有較強(qiáng)吸收，故設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm。標(biāo)準(zhǔn)品、供試品、空白溶液的色譜圖如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)品、供試品色譜圖中的各目標(biāo)峰分離度、峰型均較好，且無雜質(zhì)干擾。

2.3 方法驗(yàn)證

2.3.1 線性方程 分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于10 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋并定容至刻度，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積值（y）對(duì)進(jìn)樣量（x）進(jìn)行線性回歸，9種組分的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)如表1所示，測(cè)定結(jié)果表明，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算RSD值。取同一樣品待測(cè)液，分別在0、1、2、3、4、5 h進(jìn)樣，記錄各色譜峰峰面積，計(jì)算其RSD值。取相同樣品，按優(yōu)化后的方法制備6份待測(cè)液，計(jì)算測(cè)得的9種組分含量RSD值。精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗(yàn)計(jì)算RSD值結(jié)果如表2所示，結(jié)果表明，儀器精密度良好，供試品溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定，方法重復(fù)性良好。

2.3.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn) 采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行方法回收率試驗(yàn)，準(zhǔn)確稱取已知組分含量的茶葉樣品1份，再加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，按優(yōu)化后的方法制備待測(cè)液，測(cè)定并計(jì)算回收率。加樣回收率測(cè)定結(jié)果如表3所示，各組分的回收率均為96.36%～104.59%，說明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.4 樣品測(cè)定

取各茶葉樣品按前述方法制備待測(cè)液，以峰面積為指標(biāo)，外標(biāo)法定量，測(cè)定結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，9種品質(zhì)成分在鳳岡鋅硒茶樣品中均檢出，且兒茶素類物質(zhì)EGCG含量最高，GA含量最低。該方法能夠有效的進(jìn)行包括GC、GCG在內(nèi)的茶葉中9種品質(zhì)相關(guān)成分的同時(shí)測(cè)定。

3 小結(jié)與討論

通過對(duì)供試品溶液制備方法的試驗(yàn)考察和對(duì)色譜條件的優(yōu)化，建立了同時(shí)測(cè)定鳳岡鋅硒茶中兒茶素（GC、EGC、+C、EGCG、EC、GCG、ECG）、沒食子酸（GA）和咖啡因（CAF）等9個(gè)成分的高效液相色譜方法。結(jié)果表明，各目標(biāo)峰分離度、峰型均較好。通過線性范圍、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率的系統(tǒng)性試驗(yàn)考察，表明該方法操作簡(jiǎn)單、快速，且測(cè)定效果良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本方法在GB/T 8313-2008的基礎(chǔ)上增加了GC和GCG兩種兒茶素類物質(zhì)的測(cè)定，同時(shí)對(duì)其提取工藝進(jìn)行了改進(jìn)，使得樣品前處理更加方便快捷、提取過程更易于控制，為更加全面的反映鳳岡鋅硒茶品質(zhì)提供了一種可行的方法，同時(shí)也為其他茶葉的品質(zhì)成分研究提供了參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙保路.茶多酚的抗氧化作用[J].科學(xué)通報(bào)，2002，47（16）： 1206-1210.

[2] 焦蓓蓓.茶多酚的藥理作用研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009， 5（1）：131-133.

[3] 易超然，衛(wèi)中慶.咖啡因的藥理作用和應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2005，18（3）：270-272.

[4] 江蘇新藥學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上?？萍汲霭嫔?，2000.

[5] 蒲曉亞，袁毅君，王廷璞，等.茶葉的主要呈味物質(zhì)綜述[J].天水師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，31（2）：40-44.

[6] GB/T 8313-2008，茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法[S].

[7] 鐘世安，周春山，李宇萍.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中六種兒茶素組分的研究[J].理化檢驗(yàn)，2003，39（9）：542-546.

[8] 劉小喬，李忠岐，高 靜，等.茶多酚中兒茶素類的HPLC分析[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2012，29（5）：2611-2615.

[9] 高 俊，夏 濤，朱 博，等.HPLC-PDA對(duì)茶葉中茶氨酸、兒茶素和生物堿的同時(shí)分離檢測(cè)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2008，35（3）：324-328.

[10] 凌 云，趙云峰，李志軍，等.茶葉及茶飲料中兒茶素和咖啡因的多組分HPLC分析方法[J].衛(wèi)生研究，2005，34（2）：187-190.

[11] 李銀花，李 娟，龔 雪，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中8種兒茶素、3種嘌呤堿和沒食子酸[J].食品科學(xué)，2011，32（18）： 214-217.endprint

取上述儲(chǔ)備液GA、GC、GCG各1.00 mL，EGC、CAF、EC、ECG各0.50 mL，EGCG 0.20 mL，+C 0.35 mL，以混合溶液溶解并定容至10 mL，即得混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.3 檢測(cè)條件 美國Waters公司e2695高效液相色譜儀，流動(dòng)相A：90 mL乙腈、20 mL乙酸、2 mL EDTA，以去離子水定容至1 L；流動(dòng)相B：800 mL乙腈、20 mL乙酸、2 mL EDTA，以去離子水定容至1 L。

色譜柱為Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），梯度洗脫條件為：0～10 min（100% A），10～32 min（100%～80% A）；流量為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm；進(jìn)樣體積為10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的優(yōu)化

本研究考察了10、20、30、40、60 min共5個(gè)提取時(shí)間對(duì)茶葉中9種成分含量的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)提取時(shí)間為30 min時(shí)，提取出茶葉中9種成分含量總和達(dá)到最大，所以選擇最佳提取時(shí)間為30 min。

同時(shí)考察了以5 mL 70%的甲醇溶液超聲30 min提取1、2、3次所得茶葉中9種成分含量總和，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重復(fù)提取兩次效果最佳，所以選擇以5 mL 70%的甲醇溶液提取兩次。

試驗(yàn)還考察超聲30 min重復(fù)提取兩次與GB/T 8313-2008中70 ℃水浴提取進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果表明，超聲30 min重復(fù)提取兩次與70 ℃水浴提取10 min兩種提取效果相當(dāng)。但因超聲提取操作簡(jiǎn)便，過程易于控制，所以選擇超聲取作為提取方式。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

紫外光譜掃描結(jié)果顯示，9種組分在278 nm處均有較強(qiáng)吸收，故設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm。標(biāo)準(zhǔn)品、供試品、空白溶液的色譜圖如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)品、供試品色譜圖中的各目標(biāo)峰分離度、峰型均較好，且無雜質(zhì)干擾。

2.3 方法驗(yàn)證

2.3.1 線性方程 分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于10 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋并定容至刻度，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積值（y）對(duì)進(jìn)樣量（x）進(jìn)行線性回歸，9種組分的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)如表1所示，測(cè)定結(jié)果表明，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算RSD值。取同一樣品待測(cè)液，分別在0、1、2、3、4、5 h進(jìn)樣，記錄各色譜峰峰面積，計(jì)算其RSD值。取相同樣品，按優(yōu)化后的方法制備6份待測(cè)液，計(jì)算測(cè)得的9種組分含量RSD值。精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗(yàn)計(jì)算RSD值結(jié)果如表2所示，結(jié)果表明，儀器精密度良好，供試品溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定，方法重復(fù)性良好。

2.3.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn) 采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行方法回收率試驗(yàn)，準(zhǔn)確稱取已知組分含量的茶葉樣品1份，再加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，按優(yōu)化后的方法制備待測(cè)液，測(cè)定并計(jì)算回收率。加樣回收率測(cè)定結(jié)果如表3所示，各組分的回收率均為96.36%～104.59%，說明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.4 樣品測(cè)定

取各茶葉樣品按前述方法制備待測(cè)液，以峰面積為指標(biāo)，外標(biāo)法定量，測(cè)定結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，9種品質(zhì)成分在鳳岡鋅硒茶樣品中均檢出，且兒茶素類物質(zhì)EGCG含量最高，GA含量最低。該方法能夠有效的進(jìn)行包括GC、GCG在內(nèi)的茶葉中9種品質(zhì)相關(guān)成分的同時(shí)測(cè)定。

3 小結(jié)與討論

通過對(duì)供試品溶液制備方法的試驗(yàn)考察和對(duì)色譜條件的優(yōu)化，建立了同時(shí)測(cè)定鳳岡鋅硒茶中兒茶素（GC、EGC、+C、EGCG、EC、GCG、ECG）、沒食子酸（GA）和咖啡因（CAF）等9個(gè)成分的高效液相色譜方法。結(jié)果表明，各目標(biāo)峰分離度、峰型均較好。通過線性范圍、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率的系統(tǒng)性試驗(yàn)考察，表明該方法操作簡(jiǎn)單、快速，且測(cè)定效果良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本方法在GB/T 8313-2008的基礎(chǔ)上增加了GC和GCG兩種兒茶素類物質(zhì)的測(cè)定，同時(shí)對(duì)其提取工藝進(jìn)行了改進(jìn)，使得樣品前處理更加方便快捷、提取過程更易于控制，為更加全面的反映鳳岡鋅硒茶品質(zhì)提供了一種可行的方法，同時(shí)也為其他茶葉的品質(zhì)成分研究提供了參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙保路.茶多酚的抗氧化作用[J].科學(xué)通報(bào)，2002，47（16）： 1206-1210.

[2] 焦蓓蓓.茶多酚的藥理作用研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009， 5（1）：131-133.

[3] 易超然，衛(wèi)中慶.咖啡因的藥理作用和應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2005，18（3）：270-272.

[4] 江蘇新藥學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上?？萍汲霭嫔纾?000.

[5] 蒲曉亞，袁毅君，王廷璞，等.茶葉的主要呈味物質(zhì)綜述[J].天水師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，31（2）：40-44.

[6] GB/T 8313-2008，茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法[S].

[7] 鐘世安，周春山，李宇萍.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中六種兒茶素組分的研究[J].理化檢驗(yàn)，2003，39（9）：542-546.

[8] 劉小喬，李忠岐，高 靜，等.茶多酚中兒茶素類的HPLC分析[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2012，29（5）：2611-2615.

[9] 高 俊，夏 濤，朱 博，等.HPLC-PDA對(duì)茶葉中茶氨酸、兒茶素和生物堿的同時(shí)分離檢測(cè)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2008，35（3）：324-328.

[10] 凌 云，趙云峰，李志軍，等.茶葉及茶飲料中兒茶素和咖啡因的多組分HPLC分析方法[J].衛(wèi)生研究，2005，34（2）：187-190.

[11] 李銀花，李 娟，龔 雪，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茶葉中8種兒茶素、3種嘌呤堿和沒食子酸[J].食品科學(xué)，2011，32（18）： 214-217.endprint