賢景春+謝婷婷

摘要：以連錢草（Glechoma longituba）為原料，乙醇為溶劑，采用浸提法提取連錢草中總多酚含量并對(duì)其抗氧化性進(jìn)行分析，研究乙醇體積分?jǐn)?shù)、溫度、時(shí)間和料液比對(duì)總多酚含量的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)浸提條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，最佳浸提條件為50%乙醇，溫度80 ℃，時(shí)間2.0 h，料液比1∶25（g∶mL）。在此條件下浸提，得到的總多酚含量為4.275 mg/g，且連錢草提取物對(duì)自由基具有一定的清除能力。

關(guān)鍵詞：連錢草（Glechoma longituba）；多酚；抗氧化性

中圖分類號(hào)：R282 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）17-4139-03

Extraction of Total Polyphenol in Glechoma longituba

and Its Anti-oxidation

XIAN Jing-chun，XIE Ting-ting

（The College of Chemistry and Life Science， Quanzhou Normal College， Quanzhou 362000， Fujian， China）

Abstract： Using Glechoma longituba as materials and ethanol as extractant， total polyphenol was extracted from Glechoma longituba with soaking method and its anti-oxidation was studied. The effects of volume fraction of ethanol， temperature， time，ratio of material to liquid on total quantity polyphenol were investigated. The results showed that the optimal conditions of extraction were 50% ethanol， temperature 80 ℃ ，extraction time 2.0 h， ratio of material to liquid on 1∶25（g∶mL）. Under these conditions， the rate of extraction reached up to 4.275 mg/g. The Glechoma longituba had strong anti-oxidation.

Key words： Glechoma longituba；polyphenol；anti-oxidation stability

連錢草（Glechoma longituba）又名金錢草、活血丹，為唇形科多年生草本植物。味辛、微苦、性微寒。主要用于利小便，治療膀胱結(jié)石、腎結(jié)石、輸尿管結(jié)石、腎炎水腫、濕熱黃疸等病癥[1]。有關(guān)研究表明，連錢草有降糖作用[2]。植物多酚具有降血脂和降血糖的雙重作用[3]。目前，對(duì)于連錢草的研究主要以化學(xué)成分、揮發(fā)油成分居多，有關(guān)連錢草多酚提取的系統(tǒng)性研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)用乙醇浸取法對(duì)連錢草的多酚進(jìn)行提取并對(duì)其抗氧化性進(jìn)行研究，以期為連錢草的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、藥劑和儀器

供試材料：連錢草（購(gòu)于泉州藥店）。

藥劑：無(wú)水乙醇（恒隆化工服份有限公司），七水合硫酸亞鐵、焦性沒(méi)食子酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），酒石酸鉀鈉（天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司），磷酸二氫鉀（廣東汕頭西隴化工公司），磷酸氫二鉀（汕頭市西隴化工有限公司）。

儀器：電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），循環(huán)水真空泵（河南省予華儀器有限公司），離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠制造），料理機(jī)（山東九陽(yáng)家電有限公司）。

1.2 連錢草總多酚含量的測(cè)定

根據(jù)Folin-Ciocalten法，以焦性沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用可見(jiàn)分光光度法測(cè)定連錢草的多酚含量。取0.25 mg/mL焦性沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于25 mL的容量瓶中，加去離子水5 mL，酒石酸鐵溶液5 mL，用pH 7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容。振蕩混勻靜置后，在波長(zhǎng)為540 nm下測(cè)其吸光度[4]。以焦性沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 連錢草總多酚提取條件的確定

將連錢草清洗干凈，60 ℃烘干，烘干后粉碎過(guò)40目篩。稱取1.000 g連錢草粉末，放入小燒杯中，控制單因素條件浸提總多酚。①乙醇體積分?jǐn)?shù)。分別用不同體積分?jǐn)?shù)（30%、40%、50%、60%、70%）的乙醇為提取劑，料液比1∶25，在60 ℃下提取2 h；②料液比。分別用不同的料液比（連錢草∶乙醇）（1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35）（g∶mL，下同），乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，溫度60 ℃提取2 h；③時(shí)間。乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，料液比1∶30，在60 ℃下不同時(shí)間（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h）下提取；④溫度。乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，料液比1∶30，分別用不同的溫度（40、50、60、70、80 ℃），提取2 h。

將提取液趁熱抽濾，并將其轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶劑定容。從中量取1 mL置于10 mL的容量瓶中，加入1 mL酒石酸亞鐵溶液，用pH 7.5的磷酸鹽緩沖溶液定容，混勻、靜置、離心后在540 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出連錢草中多酚的含量[5]。endprint

1.4 正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、溫度、時(shí)間和料液比4個(gè)因素進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)[7]，確定浸提連錢草中總多酚的最佳條件。正交試驗(yàn)因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L雙氧水、9 mmol/L水楊酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反應(yīng)體系中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去離子水定容，搖勻，恒溫37 ℃下，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液測(cè)定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，計(jì)算連錢草中總多酚的抗氧化性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以焦性沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示?；貧w線方程為Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

從圖2可以看出，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢(shì)。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，連錢草總多酚含量達(dá)到最高，含量為2.515 mg/g，而后隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，連錢草總多酚含量開(kāi)始下降。因此，選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%為宜。

2.3 料液比對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖3可知，在溶劑用量較小時(shí)，連錢草總多酚含量較低，加大溶劑用量，總多酚溶出率增大。當(dāng)料液比為1∶30時(shí)，連錢草總多酚含量最高。如果繼續(xù)加大溶劑量，連錢草總多酚含量反而下降。因此，選擇料液比1∶30為宜。

2.3 時(shí)間對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖4可知，時(shí)間較短時(shí)，浸提得到的連錢草總多酚含量較低，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，其總多酚不斷溶出，當(dāng)浸提時(shí)間為2.0 h時(shí)，溶出達(dá)到平衡，連錢草總多酚含量達(dá)到峰值。再繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)間，提取效果呈下降趨勢(shì)。因此，選擇2.0 h為浸提時(shí)間。

2.5 溫度對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖5可知，隨浸提溫度的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢(shì)，當(dāng)溫度達(dá)到70 ℃時(shí)，浸提效果最好，連錢草總多酚含量最高。溫度繼續(xù)升高，浸提效果明顯下降。因此，選擇溫度為70 ℃浸提連錢草中總多酚。

2.6 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2結(jié)果可知，4個(gè)因素對(duì)連錢草總多酚浸提效果影響最大的是浸提溫度，其次是時(shí)間，影響最小的是料液比。浸提連錢草中總多酚的最佳條件組合為A1B3C2D1，即50%乙醇、溫度80 ℃，時(shí)間2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此條件下進(jìn)行浸提，連錢草總多酚含量為4.275 mg/g。

2.7 對(duì)羥基自由基的清除作用

由圖6可知，連錢草浸提液中總多酚對(duì)羥基自由基有一定的清除作用，且清除率與浸提液的濃度呈線性相關(guān)。

3 結(jié)論

通過(guò)單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)確定了連錢草總多酚浸提的最佳工藝。結(jié)果表明，影響連錢草總多酚提取效果的因素大小順序?yàn)榻釡囟?、時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比。最佳浸提條件為50%乙醇、料液比1∶25，時(shí)間2.0 h，溫度80 ℃。在此浸提條件下，浸提得到的連錢草總多酚含量達(dá)到4.275 mg/g，且連錢草提取物對(duì)羥基自由基有一定的清除作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 宋 銳，張 云，叢曉東，等.連錢草的化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（12）：2511-2514.

[2] 袁春玲，王佩琪，郭偉英.連錢草的降血糖作用及其機(jī)制研究[J].中藥藥理與臨床，2008，24（3）：57-58.

[3] 翟清波，李 誠(chéng)，王 靜，等.植物多酚降血糖和降血脂作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2012，23（3）：279-281.

[4] 牛春艷，姜曉坤.葡萄皮渣中多酚物質(zhì)提取工藝的研究[J].遼寧化工，2011，40（9）：917-919.

[5] 賢景春，鄭鑫源，陳明真.少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（8）：275-277.

[6] 金 鳴，蔡亞欣，李金榮，等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測(cè)H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，1996，23（6）：553-555.

[7] 賈冬英，姚 開(kāi)，譚 薇，等.石榴皮中多酚提取條件的優(yōu)化[J]，林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2006，26（3）：123-126.endprint

1.4 正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、溫度、時(shí)間和料液比4個(gè)因素進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)[7]，確定浸提連錢草中總多酚的最佳條件。正交試驗(yàn)因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L雙氧水、9 mmol/L水楊酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反應(yīng)體系中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去離子水定容，搖勻，恒溫37 ℃下，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液測(cè)定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，計(jì)算連錢草中總多酚的抗氧化性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以焦性沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示?；貧w線方程為Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

從圖2可以看出，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢(shì)。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，連錢草總多酚含量達(dá)到最高，含量為2.515 mg/g，而后隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，連錢草總多酚含量開(kāi)始下降。因此，選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%為宜。

2.3 料液比對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖3可知，在溶劑用量較小時(shí)，連錢草總多酚含量較低，加大溶劑用量，總多酚溶出率增大。當(dāng)料液比為1∶30時(shí)，連錢草總多酚含量最高。如果繼續(xù)加大溶劑量，連錢草總多酚含量反而下降。因此，選擇料液比1∶30為宜。

2.3 時(shí)間對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖4可知，時(shí)間較短時(shí)，浸提得到的連錢草總多酚含量較低，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，其總多酚不斷溶出，當(dāng)浸提時(shí)間為2.0 h時(shí)，溶出達(dá)到平衡，連錢草總多酚含量達(dá)到峰值。再繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)間，提取效果呈下降趨勢(shì)。因此，選擇2.0 h為浸提時(shí)間。

2.5 溫度對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖5可知，隨浸提溫度的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢(shì)，當(dāng)溫度達(dá)到70 ℃時(shí)，浸提效果最好，連錢草總多酚含量最高。溫度繼續(xù)升高，浸提效果明顯下降。因此，選擇溫度為70 ℃浸提連錢草中總多酚。

2.6 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2結(jié)果可知，4個(gè)因素對(duì)連錢草總多酚浸提效果影響最大的是浸提溫度，其次是時(shí)間，影響最小的是料液比。浸提連錢草中總多酚的最佳條件組合為A1B3C2D1，即50%乙醇、溫度80 ℃，時(shí)間2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此條件下進(jìn)行浸提，連錢草總多酚含量為4.275 mg/g。

2.7 對(duì)羥基自由基的清除作用

由圖6可知，連錢草浸提液中總多酚對(duì)羥基自由基有一定的清除作用，且清除率與浸提液的濃度呈線性相關(guān)。

3 結(jié)論

通過(guò)單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)確定了連錢草總多酚浸提的最佳工藝。結(jié)果表明，影響連錢草總多酚提取效果的因素大小順序?yàn)榻釡囟?、時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比。最佳浸提條件為50%乙醇、料液比1∶25，時(shí)間2.0 h，溫度80 ℃。在此浸提條件下，浸提得到的連錢草總多酚含量達(dá)到4.275 mg/g，且連錢草提取物對(duì)羥基自由基有一定的清除作用。

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[5] 賢景春，鄭鑫源，陳明真.少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（8）：275-277.

[6] 金 鳴，蔡亞欣，李金榮，等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測(cè)H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，1996，23（6）：553-555.

[7] 賈冬英，姚 開(kāi)，譚 薇，等.石榴皮中多酚提取條件的優(yōu)化[J]，林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2006，26（3）：123-126.endprint

1.4 正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、溫度、時(shí)間和料液比4個(gè)因素進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)[7]，確定浸提連錢草中總多酚的最佳條件。正交試驗(yàn)因素和水平如表1所示。

1.5 抗氧化性

依次取9 mmol/L FeSO4、8.82 mmol/L雙氧水、9 mmol/L水楊酸溶液各2.0 mL于25 mL容量瓶中，向反應(yīng)體系中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL浸提液，用去離子水定容，搖勻，恒溫37 ℃下，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)其吸光度值（AX），按此方法不加浸提液測(cè)定吸光度值（A0）[6]。 按照公式：清除率=（A0-AX）/A0×100%，計(jì)算連錢草中總多酚的抗氧化性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以焦性沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示?；貧w線方程為Y=-0.011 86+16.474 29×X。

2.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

從圖2可以看出，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢(shì)。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，連錢草總多酚含量達(dá)到最高，含量為2.515 mg/g，而后隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，連錢草總多酚含量開(kāi)始下降。因此，選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%為宜。

2.3 料液比對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖3可知，在溶劑用量較小時(shí)，連錢草總多酚含量較低，加大溶劑用量，總多酚溶出率增大。當(dāng)料液比為1∶30時(shí)，連錢草總多酚含量最高。如果繼續(xù)加大溶劑量，連錢草總多酚含量反而下降。因此，選擇料液比1∶30為宜。

2.3 時(shí)間對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖4可知，時(shí)間較短時(shí)，浸提得到的連錢草總多酚含量較低，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，其總多酚不斷溶出，當(dāng)浸提時(shí)間為2.0 h時(shí)，溶出達(dá)到平衡，連錢草總多酚含量達(dá)到峰值。再繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)間，提取效果呈下降趨勢(shì)。因此，選擇2.0 h為浸提時(shí)間。

2.5 溫度對(duì)連錢草總多酚浸提效果的影響

由圖5可知，隨浸提溫度的升高，連錢草總多酚含量呈上升趨勢(shì)，當(dāng)溫度達(dá)到70 ℃時(shí)，浸提效果最好，連錢草總多酚含量最高。溫度繼續(xù)升高，浸提效果明顯下降。因此，選擇溫度為70 ℃浸提連錢草中總多酚。

2.6 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2結(jié)果可知，4個(gè)因素對(duì)連錢草總多酚浸提效果影響最大的是浸提溫度，其次是時(shí)間，影響最小的是料液比。浸提連錢草中總多酚的最佳條件組合為A1B3C2D1，即50%乙醇、溫度80 ℃，時(shí)間2.0 h、料液比1∶25（g∶mL）。在此條件下進(jìn)行浸提，連錢草總多酚含量為4.275 mg/g。

2.7 對(duì)羥基自由基的清除作用

由圖6可知，連錢草浸提液中總多酚對(duì)羥基自由基有一定的清除作用，且清除率與浸提液的濃度呈線性相關(guān)。

3 結(jié)論

通過(guò)單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)確定了連錢草總多酚浸提的最佳工藝。結(jié)果表明，影響連錢草總多酚提取效果的因素大小順序?yàn)榻釡囟?、時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比。最佳浸提條件為50%乙醇、料液比1∶25，時(shí)間2.0 h，溫度80 ℃。在此浸提條件下，浸提得到的連錢草總多酚含量達(dá)到4.275 mg/g，且連錢草提取物對(duì)羥基自由基有一定的清除作用。

參考文獻(xiàn)：

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[6] 金 鳴，蔡亞欣，李金榮，等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測(cè)H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，1996，23（6）：553-555.

[7] 賈冬英，姚 開(kāi)，譚 薇，等.石榴皮中多酚提取條件的優(yōu)化[J]，林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2006，26（3）：123-126.endprint