葛國(guó)平+張少雄+林金科

摘要：以茶樹(shù)新品系“1005”新梢3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期的芽頭、二葉、四葉為試驗(yàn)材料，用高效液相色譜檢測(cè)兒茶素含量，高通量測(cè)序技術(shù)分析結(jié)構(gòu)基因表達(dá)差異，應(yīng)用數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析其兒茶素含量與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果表明，茶樹(shù)新品系“1005”的兒茶素總量與CHI、F3′5′H、ANR、aroG等結(jié)構(gòu)基因的關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為0.339 74、0.716 47、0.467 89、-0.032 61；簡(jiǎn)單兒茶素含量與CHI、F3′5′H、ANR、aroG等結(jié)構(gòu)基因的關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為0.568 99、0.498 87、0.704 26、0.491 51；酯型兒茶素含量與CHI、F3′5′H、ANR、aroG等結(jié)構(gòu)基因的關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為0.160 66、0.598 08、0.250 61、-0.217 38。試驗(yàn)為研究茶樹(shù)兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提供了理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：茶樹(shù)；兒茶素；結(jié)構(gòu)基因；關(guān)聯(lián)性

中圖分類號(hào)：S571.1：Q78 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）17-4088-04

Correlation between Content of Catechins and Structure Genes of Tea Plant

New Strain “1005”

GE Guo-ping， ZHANG Shao-xiong， LIN Jin-ke

（College of Horticulture， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou 350002， China）

Abstract： Using bud， the 2nd leaf and 4th leaf from tea plant new strain “1005” as materials， content of catechins was detected by HPLC. Differential expression of structure gene were analyzed with high-throughput sequencing. The correlation between content of catechins and structural gene expression in tea plant new strain “1005” was analyzed. Results showed that correlation coefficient of content of total catechins and structural genes CHI， F3'5'H， ANR and aroG were 0.339 74， 0.716 47， 0.467 89， -0.032 61， respectively. Correlation coefficient of content of simple catechins and structural genes CHI， F3'5'H， ANR and aroG were 0.568 99， 0.498 87， 0.704 26， and 0.491 51， respectively. Correlation coefficient of content of ester catechins and structural genes CHI， F3'5'H， ANR and aroG were 0.160 66， 0.598 08， 0.250 61，-0.217 38， respectively. A theoretical basis was provided for the key structural genes of catechins biosynthesis.

Key words： tea plant； catechins； structural gene； correlation

茶樹(shù)新品系“1005”屬于灌木型中葉種茶樹(shù)，樹(shù)姿半披張，分枝較密，葉色黃綠，葉片長(zhǎng)橢圓形，葉片茸毛少且不顯，葉齒淺鈍，葉緣微波，是由福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)研究所選育出來(lái)的高表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）含量的茶樹(shù)新品系。據(jù)相關(guān)報(bào)道，茶樹(shù)EGCG含量高于10%則可視為高EGCG茶樹(shù)種[1]。試驗(yàn)所用的茶樹(shù)新品系“1005”的秋季新稍（一芽二葉）EGCG含量高于10%。

茶葉中的兒茶素屬于黃烷醇類化合物，在茶葉中的含量為12%～24%（干重）[2]，是茶湯滋味和收斂性的主要根源[3]。兒茶素分為酯型兒茶素和非酯型兒茶素，酯型兒茶素亦稱為“復(fù)雜兒茶素”，主要包括EGCG、GCG（沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯）、ECG（表兒茶素沒(méi)食子酸酯）、CG（兒茶素沒(méi)食子酸酯）；非酯型兒茶素亦稱為簡(jiǎn)單兒茶素，主要包括GC（沒(méi)食子兒茶素）、EGC（表沒(méi)食子兒茶素）、C（兒茶素）、EC（表兒茶素）[2]等。前人已確定兒茶素具有重要的保健和藥理作用，如抗癌、抗氧化、抗腫瘤，降血壓、降血糖、降血脂，保護(hù)腎功能、祛黃褐斑、抗抑郁等[4-9]。已研究得出兒茶素總量和組成與茶樹(shù)品種特性的關(guān)系：如適制綠茶要求總兒茶素含量低，酯型兒茶素含量高的品種[10]；適制烏龍茶要求酯型兒茶素與簡(jiǎn)單兒茶素的比值在1.5～2.0為好[11]；兒茶素總量與紅碎茶品質(zhì)呈極顯著的正相關(guān)[12]，兒茶素品質(zhì)指數(shù)[（L-EGCG+L-EGC）×100/L-EGC]與綠茶品質(zhì)呈正相關(guān)[13]。已探明改善兒茶素含量的人工栽培措施：如遮陽(yáng)網(wǎng)及黃紅薄膜的利用、外源誘導(dǎo)物WAT的噴施、輻射、有機(jī)肥料配合磷鉀肥的使用等[14-20]。已克隆得到茶樹(shù)黃烷醇類化合物的生物合成途徑的一些結(jié)構(gòu)基因：如茶樹(shù)的苯丙氨酸解氨酶（PAL）、查爾酮異構(gòu)酶（CHI）、查爾酮合成酶（CHS）、二氫黃酮醇還原酶（DFR）、花青素還原酶（ANR）、花青素合成酶（ANS）、黃烷酮3-羥基化酶（F3H）等，都已經(jīng)克隆得到其全長(zhǎng)cDNA序列，做了原核表達(dá)分析[21-23]。其中，CHS是黃烷醇類合成途徑中研究的最清楚的一個(gè)酶，在GenBank上已登錄的有三條（登錄號(hào)D26593.1、D26594.1和D26595.1），但是茶樹(shù)中實(shí)際的CHS基因數(shù)目可能更多。但對(duì)茶樹(shù)而言，兒茶素合成的分子機(jī)制了解仍然較為模糊，除了PAL、CHS以外，對(duì)其他涉及酶類的生化性質(zhì)、生理作用及其調(diào)控機(jī)制了解很少，從基因工程、代謝工程角度的研究更是缺乏基礎(chǔ)[24]，比如雖然茶樹(shù)的ANR基因已有報(bào)道，但對(duì)其酶學(xué)特性、功能的驗(yàn)證、酶蛋白細(xì)胞定位等尚不清晰。簡(jiǎn)言之，兒茶素作為茶葉中重要且有益的活性成分，對(duì)其進(jìn)行研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

試驗(yàn)以2012年秋季茶樹(shù)新品系“1005”新梢的3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期的芽頭、二葉、四葉為試驗(yàn)材料，用高效液相色譜檢測(cè)兒茶素含量，用高通量測(cè)序法分析兒茶素生物合成過(guò)程的結(jié)構(gòu)基因表達(dá)差異，應(yīng)用數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析其兒茶素含量與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)的關(guān)聯(lián)性，以期為研究茶樹(shù)的兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料及預(yù)處理 2012年9月下旬采自福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)研究所的茶樹(shù)新品系“1005”的芽頭、二葉、四葉，分別標(biāo)記為E0、E2、E4，先經(jīng)液氮瞬時(shí)冷凍固樣，之后于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 儀器 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9140A型）；電子天平（Sartorius BSA124S-CW）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（XMTD-204）；離心機(jī)（Sigma3k15）；HPLC儀（Waters1525泵、Waters2487紫外檢測(cè)器；色譜柱（Agilent Eclipse XDB-Pheny 4.6 mm×250 mm，2.5 μm）。

1.2 方法

1.2.1 兒茶素含量分析 兒茶素類檢測(cè)按照GB/T 8313-2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法》進(jìn)行。

1.2.2 茶樹(shù)RNA提取與質(zhì)量檢測(cè) 采用Novogene公司的Trizol總RNA提取試劑盒，參照說(shuō)明書的要求提取總RNA，并用RNA-free的DNaseI（ Promega， Madision，WI， USA ）進(jìn)行DNA消化，以保證總RNA中不含有DNA污染。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理與分析 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與結(jié)構(gòu)基因RPKM值計(jì)算委托北京諾禾致源公司完成。運(yùn)用Excel 2003數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件，根據(jù)各個(gè)基因在樣品中的RPKM值與相應(yīng)的兒茶素含量進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析；運(yùn)用DPS數(shù)據(jù)處理軟件，采用Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行兒茶素含量顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶樹(shù)RNA質(zhì)量檢測(cè)

經(jīng)檢測(cè)，提取的3個(gè)RNA樣品的OD260 nm/OD280 nm均在1.8～2.2之間，RIN值在6.6～8.7之間，結(jié)果均符合轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)NA的質(zhì)量要求。檢測(cè)結(jié)果如圖1所示。

2.2 基因表達(dá)量

根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序原理，測(cè)序過(guò)程是統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)錄組中各轉(zhuǎn)錄本打斷后隨機(jī)采樣的統(tǒng)計(jì)過(guò)程[25]。因此，當(dāng)某個(gè)基因表達(dá)水平較高或長(zhǎng)度較長(zhǎng)時(shí)，該基因的reads條數(shù)就多；另外，測(cè)序深度也與基因的reads條數(shù)有關(guān)。因此，需要對(duì)reads數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化來(lái)估計(jì)基因表達(dá)水平。在轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)中，RPKM（Reads Per Kilo bases per Million mapped Reads）是每百萬(wàn)reads中來(lái)自某一基因每千堿基長(zhǎng)度的reads數(shù)目，RPKM同時(shí)考慮了測(cè)序深度和基因長(zhǎng)度對(duì)reads計(jì)數(shù)的影響，是目前最為常用的基因表達(dá)水平估算方法[26]，其計(jì)算公式為：

RPKM=■×109。其中RPKM 為特定生物樣品中某一基因的表達(dá)水平；R為匹配到該基因上的原始 reads數(shù)目；T 為該樣品測(cè)序得到的reads總數(shù)；L為該基因的長(zhǎng)度（bp）。當(dāng)然，這里的reads必須是能夠匹配到基因組上的高質(zhì)量reads。茶樹(shù)新品系“1005”新梢的3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期（芽頭、二葉、四葉）RPKM分布情況如表1所示。

通過(guò)分析轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到的Unigene的RPKM分布情況，發(fā)現(xiàn)整體上3個(gè)樣品的RPKM在各個(gè)區(qū)間分布密度區(qū)別不大，且均以中低表達(dá)豐度的Unigene為主。RPKM在0.00～0.10之間的極低表達(dá)豐度的Unigene占很大一大部分，達(dá)到40%左右，RPKM在0.30～3.57之間的中等表達(dá)水平的Unigene 在20%以上，RPKM大于60的Unigene在1.3%左右。

2.3 茶樹(shù)新品系“1005”的兒茶素含量與結(jié)構(gòu)基因關(guān)聯(lián)分析

經(jīng)3次HPLC分析檢測(cè)取平均值，茶樹(shù)新品系“1005”的兒茶素含量如表2所示。表2數(shù)據(jù)顯示，茶樹(shù)新品系“1005”的3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期的兒茶素含量差異顯著。

根據(jù)高通量測(cè)序RNA-Seq結(jié)果，茶樹(shù)新品系“1005”的3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期共有7個(gè)不同的兒茶素合成相關(guān)基因差異表達(dá)，分別為4CL（4-coumaroyl-CoA ligase）、CHI（chalcone isomerase）、F3′5′H（flavonoid 3′，5′-hydroxylase）、DFR（dihydroflavonol 4-reductase）、ANR（anthocyanidin reductase）、aroG（3-deoxy-D-arabino-heptulosonate 7-phosphate synthase）、aroD（3-dehydroquinic acid dehydratase）等。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件表明，各基因與兒茶素關(guān)聯(lián)性結(jié)果如表3所示。

從表3可以看出，茶樹(shù)新品系“1005”的兒茶素總量與CHI、F3′5′H、ANR、aroG等結(jié)構(gòu)基因的關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為0.339 74、0.716 47、0.467 89、-0.032 61；簡(jiǎn)單兒茶素含量與CHI、F3′5′H、ANR、aroG等結(jié)構(gòu)基因的關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為0.568 99、0.498 87、0.704 26、0.491 51；酯型兒茶素含量與CHI、F3′5′H、ANR、aroG等結(jié)構(gòu)基因的關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為0.160 66、0.598 08、0.250 61、-0.217 38（與多基因家族ANR結(jié)構(gòu)基因的關(guān)聯(lián)系數(shù)取3個(gè)Unigene的平均值以便整體統(tǒng)計(jì)）。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，基因F3′5′H與高EGCG含量的茶樹(shù)新品系“1005”的兒茶素總量、酯型兒茶素含量的關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為0.716 47、0.598 08，它們?cè)趯?duì)應(yīng)類中的關(guān)聯(lián)系數(shù)的絕對(duì)值由大到小排名均位列第2，排名都是次于基因4CL，但不是位于同一個(gè)控制4CL的基因之后，另外4CL基因的關(guān)聯(lián)系數(shù)有正負(fù)有待探討。相反，基因F3′5′H與高EGCG含量的茶樹(shù)新品系“1005”的簡(jiǎn)單兒茶素含量的關(guān)聯(lián)系數(shù)0.498 87在對(duì)應(yīng)類中絕對(duì)值由大到小排名則較靠后，這將為推測(cè)基因F3′5′H（comp153174_c0）能作為兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提供可能的理論依據(jù)和指導(dǎo)方向。另外，ANR與簡(jiǎn)單兒茶素的關(guān)聯(lián)系數(shù)最大為0.704 26，這與前人研究得出的非酯型兒茶素C、GC、EC和EGC合成直接相關(guān)的酶是LAR和ANR相一致[27]。

3 小結(jié)

同其他許多木本植物一樣，目前關(guān)于茶樹(shù)分子生物學(xué)方面的研究還相對(duì)薄弱，遺傳背景了解較少，如目前茶樹(shù)中已登錄的兒茶素生物合成相關(guān)基因不多，且大多數(shù)是單基因；加之傳統(tǒng)測(cè)序手段的固有缺陷，導(dǎo)致無(wú)法對(duì)茶樹(shù)重要的次生代謝產(chǎn)物的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究和探討，借助高通量平臺(tái)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)為從分子方面研究茶樹(shù)提供了某些便捷的途徑。試驗(yàn)研究了4CL、CHI、F3′5′H、DFR、ANR、aroG、aroD等7個(gè)結(jié)構(gòu)基因在茶樹(shù)新品系“1005”的3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期發(fā)生顯著差異表達(dá)（差異倍數(shù)至少在1.3倍以上）。其中，4CL、DFR、aroD等3個(gè)多基因家族結(jié)構(gòu)基因表達(dá)差異與兒茶素含量的關(guān)聯(lián)系數(shù)有正相關(guān)或負(fù)相關(guān)，該問(wèn)題有待進(jìn)一步研究。試驗(yàn)根據(jù)關(guān)聯(lián)分析推測(cè)基因F3′5′H（comp153174_c0）能作為兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提拱了可能的理論依據(jù)，這與馬春雷[28]對(duì)不同茶樹(shù)品種間兒茶素合成相關(guān)酶研究表明LAR和DFR是兒茶素合成的重要酶略有出入，該問(wèn)題也有待進(jìn)一步研究。

由于兒茶素的生物合成非常復(fù)雜，它不僅受一系列結(jié)構(gòu)基因的控制，此外一些轉(zhuǎn)錄因子，如MYB類、bHLH類也發(fā)揮一定的作用。而基因PAL、CHS、CHI、DFR、aroG、LAR、ANR、ANS、4CL、F3′5′H等不僅影響兒茶素的合成，同時(shí)也影響花青素、木質(zhì)素、黃酮醇及原花青素的合成。因此，分析發(fā)現(xiàn)7個(gè)結(jié)構(gòu)基因與兒茶素的關(guān)聯(lián)系數(shù)有的相對(duì)較小，表明有的可能與兒茶素的生物合成關(guān)聯(lián)不大；但是通過(guò)關(guān)聯(lián)分析將為后續(xù)結(jié)合兒茶素含量變化趨勢(shì)及基因功能加以注釋，為研究茶樹(shù)的兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提供理論依據(jù)。

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3 小結(jié)

同其他許多木本植物一樣，目前關(guān)于茶樹(shù)分子生物學(xué)方面的研究還相對(duì)薄弱，遺傳背景了解較少，如目前茶樹(shù)中已登錄的兒茶素生物合成相關(guān)基因不多，且大多數(shù)是單基因；加之傳統(tǒng)測(cè)序手段的固有缺陷，導(dǎo)致無(wú)法對(duì)茶樹(shù)重要的次生代謝產(chǎn)物的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究和探討，借助高通量平臺(tái)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)為從分子方面研究茶樹(shù)提供了某些便捷的途徑。試驗(yàn)研究了4CL、CHI、F3′5′H、DFR、ANR、aroG、aroD等7個(gè)結(jié)構(gòu)基因在茶樹(shù)新品系“1005”的3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期發(fā)生顯著差異表達(dá)（差異倍數(shù)至少在1.3倍以上）。其中，4CL、DFR、aroD等3個(gè)多基因家族結(jié)構(gòu)基因表達(dá)差異與兒茶素含量的關(guān)聯(lián)系數(shù)有正相關(guān)或負(fù)相關(guān)，該問(wèn)題有待進(jìn)一步研究。試驗(yàn)根據(jù)關(guān)聯(lián)分析推測(cè)基因F3′5′H（comp153174_c0）能作為兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提拱了可能的理論依據(jù)，這與馬春雷[28]對(duì)不同茶樹(shù)品種間兒茶素合成相關(guān)酶研究表明LAR和DFR是兒茶素合成的重要酶略有出入，該問(wèn)題也有待進(jìn)一步研究。

由于兒茶素的生物合成非常復(fù)雜，它不僅受一系列結(jié)構(gòu)基因的控制，此外一些轉(zhuǎn)錄因子，如MYB類、bHLH類也發(fā)揮一定的作用。而基因PAL、CHS、CHI、DFR、aroG、LAR、ANR、ANS、4CL、F3′5′H等不僅影響兒茶素的合成，同時(shí)也影響花青素、木質(zhì)素、黃酮醇及原花青素的合成。因此，分析發(fā)現(xiàn)7個(gè)結(jié)構(gòu)基因與兒茶素的關(guān)聯(lián)系數(shù)有的相對(duì)較小，表明有的可能與兒茶素的生物合成關(guān)聯(lián)不大；但是通過(guò)關(guān)聯(lián)分析將為后續(xù)結(jié)合兒茶素含量變化趨勢(shì)及基因功能加以注釋，為研究茶樹(shù)的兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 蔣 堃，肖 斌，余有本.陜南地區(qū)高EGCG茶樹(shù)資源篩選[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010（9）：193-197.

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[23] 馬春雷，陳 亮.茶樹(shù)黃酮醇合成酶基因的克隆與原核表達(dá)[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2009，28（3）：10-14

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[28] 馬春雷.茶樹(shù)查爾酮異構(gòu)酶、黃酮醇合成酶和無(wú)色花色素還原酶等基因的克隆與表達(dá)分析[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院， 2007.

3 小結(jié)

同其他許多木本植物一樣，目前關(guān)于茶樹(shù)分子生物學(xué)方面的研究還相對(duì)薄弱，遺傳背景了解較少，如目前茶樹(shù)中已登錄的兒茶素生物合成相關(guān)基因不多，且大多數(shù)是單基因；加之傳統(tǒng)測(cè)序手段的固有缺陷，導(dǎo)致無(wú)法對(duì)茶樹(shù)重要的次生代謝產(chǎn)物的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究和探討，借助高通量平臺(tái)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)為從分子方面研究茶樹(shù)提供了某些便捷的途徑。試驗(yàn)研究了4CL、CHI、F3′5′H、DFR、ANR、aroG、aroD等7個(gè)結(jié)構(gòu)基因在茶樹(shù)新品系“1005”的3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期發(fā)生顯著差異表達(dá)（差異倍數(shù)至少在1.3倍以上）。其中，4CL、DFR、aroD等3個(gè)多基因家族結(jié)構(gòu)基因表達(dá)差異與兒茶素含量的關(guān)聯(lián)系數(shù)有正相關(guān)或負(fù)相關(guān)，該問(wèn)題有待進(jìn)一步研究。試驗(yàn)根據(jù)關(guān)聯(lián)分析推測(cè)基因F3′5′H（comp153174_c0）能作為兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提拱了可能的理論依據(jù)，這與馬春雷[28]對(duì)不同茶樹(shù)品種間兒茶素合成相關(guān)酶研究表明LAR和DFR是兒茶素合成的重要酶略有出入，該問(wèn)題也有待進(jìn)一步研究。

由于兒茶素的生物合成非常復(fù)雜，它不僅受一系列結(jié)構(gòu)基因的控制，此外一些轉(zhuǎn)錄因子，如MYB類、bHLH類也發(fā)揮一定的作用。而基因PAL、CHS、CHI、DFR、aroG、LAR、ANR、ANS、4CL、F3′5′H等不僅影響兒茶素的合成，同時(shí)也影響花青素、木質(zhì)素、黃酮醇及原花青素的合成。因此，分析發(fā)現(xiàn)7個(gè)結(jié)構(gòu)基因與兒茶素的關(guān)聯(lián)系數(shù)有的相對(duì)較小，表明有的可能與兒茶素的生物合成關(guān)聯(lián)不大；但是通過(guò)關(guān)聯(lián)分析將為后續(xù)結(jié)合兒茶素含量變化趨勢(shì)及基因功能加以注釋，為研究茶樹(shù)的兒茶素生物合成過(guò)程的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因提供理論依據(jù)。

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[23] 馬春雷，陳 亮.茶樹(shù)黃酮醇合成酶基因的克隆與原核表達(dá)[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2009，28（3）：10-14

[24] 夏 濤，高麗萍.類黃酮及茶兒茶素生物合成途徑及其調(diào)控研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，42（8）：2899-2908.

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[26] MORTAZAVI A，WILLIAMS B，MCCUE K，et al. Mapping and quantifying mammalian transcriptomes by RNA-Seq[J].Nature methods，2008，5（7）：621-628.

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