李 華 劉瀟瀟

廣東省藥品檢驗所，廣東 廣州 510180

碧玉珠是由人參、冬蟲草、枸杞子等10味中藥制成的中藥復方制劑，具有益氣養(yǎng)血，補腎填精之功效。用于皮膚斑印，頭暈目眩，崩漏帶下，月經(jīng)不調(diào)，腰酸背痛，久不受孕等癥。為更好地控制本品的質(zhì)量。本文采用了HPLC法測定人參所含成分人參皂苷Rg1的含量，該方法簡便、準確、可靠，可用于碧玉珠的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀 (UV檢測器)。色譜柱:Merck C18(5μm，150×4.6mm)。Millipore純水器;Sartorius電子天平;KQ-300DA超聲儀 (功率300W，頻率40kHz)。

1.2 試藥 余試劑huan bec Xiao Jun人參皂苷Rg1對照品，購自中國藥品生物制品檢定所，批號:110703-200425;碧玉珠，由香港峨眉藥廠有限公司生產(chǎn)，批號:260902;碧玉珠人參陰性對照，由香港峨眉藥廠有限公司制備;乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Merck C18(5μm，150×4.6mm);流動相:乙腈-水 (19∶81);流速:1.0 ml/min;檢測波長:203 nm;柱溫:20℃;進樣量:對照品和供試品溶液各 10μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取人參皂苷Rg1對照品適量，精密稱定，加甲醇制成①每1ml含人參皂苷Rg1 0.1842mg②每1ml含人參皂苷Rg1 0.3684 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品，混勻，研細，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取入70%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理 (功率300w，頻率45kHz)20分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例及制備工藝，配制不含人參的陰性對照樣品，按“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 0線性關系考察 取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成①每1ml含人參皂苷Rg1 0.1842mg②每1ml含人參皂苷Rg1 0.3684 mg的溶液。取溶液 ②進樣10μl，取溶液①分別進樣 1μl、2μl、5μl、10μl，注入液相色譜儀中，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，以對照品進樣量 (μg)為橫坐標 (X)，峰面積為縱坐標 (Y)繪圖標準曲線，得回歸方程為 Y=250.24X+6.0787，r=0.9998。結(jié)果表明，人參皂苷Rg1在0.1842μg～3.6840μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關系。

2.3.2 專屬性考察 分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μl，按“2.1”項下色譜條件進樣，結(jié)果:供試品與人參皂苷Rg1對照品在相應的位置上出現(xiàn)色譜峰，供試品色譜中分離度良好;陰性對照在該位置上未出現(xiàn)色譜峰，表明陰性對照溶液不干擾樣品測定，見圖1。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取人參皂苷Rg1對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件重復進樣6次，每次 10μl，測定人參皂苷Rg1峰面積。結(jié)果RSD為0.19%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一份供試品溶液，分別在0、4、8、12、18h依次進樣，測定人參皂苷Rg1峰面積。結(jié)果RSD為1.4%，表明供試品溶液在18h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復性試驗 取同一批樣品6份，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件測定。測得平均值為2.12 mg/g，RSD為0.89%，表明本方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取人參皂苷Rg1對照品0.01535g，置25 ml量瓶中，加甲醇適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻，作為回收用人參皂苷Rg1對照品溶液 (每1ml含人參皂苷Rg1 0.614mg)。取已知含量的同一批樣品 (含量:2.1175mg/g)6份，每份取樣量約1g，分別置100ml錐形瓶中，精密加入上述供試品溶液3ml，按“2.2.2”項下方法操作，并按“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。本方法回收率均在95%～105%以內(nèi)，符合要求。

表1 加樣回收試驗結(jié)果 (n=6)

2.4 樣品含量測定 取樣品，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件測定樣品中人參皂苷Rg1的含量。碧玉珠 (批號:260902)的人參皂苷的含量為:2.12mg/g。

3 討論

在實驗中考察了不同的提取方法、提取溶劑和提取時間對人參皂苷Rg1提取率的影響。 (1)選用30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇和甲醇[2]作為提取溶劑進行比較，結(jié)果表明純甲醇提取效率低，不能完全提取出人參皂苷Rg1;30%，50%，70%甲醇之間的提取效果無明顯差別，均能較完全提取出人參皂苷Rg1，本實驗用70%甲醇-水作為提取溶劑。(2)比較了直接超聲提取、超聲后通過大孔樹脂處理、超聲后正丁醇萃取[3]和加熱回流[4]四種提取方法對人參皂苷Rg1提取率的影響。結(jié)果無明顯差別，表明各提取方法均能將樣品中的人參皂苷Rg1完全提出，考慮到操作的簡便省時，采用直接超聲提取。(3)在實驗中選用超聲20、30、45、60min進行比較，結(jié)果無明顯差別，故選用20分鐘作為提取時間。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[M].一部.北京:化學工業(yè)出版社，2005:7-8.

[2]Xiao-xiao Liu，Lei Wang，Xiao-qing Chen，et al.Simultaneous quantification of both triterpenoid and steroidal saponins in various Yunnan Baiyao preparations using HPLC-UV and HPLC-MS [J].Journal of Separation Science，2008，31(22):3834-3846.

[3]余琳，文永蘭，黃濤.HPLC測定屏風生脈膠囊人參皂苷Rg1的研究[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2010，8(8):192-193.

[4]張婷，魏尊喜.RP-HPLC法同時測定保心寧膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量[J].安徽醫(yī)藥，2010，14(5):531-532.