劉瑩　劉麗蘭　陳雙

[摘 要] 建立一種梯度洗脫反相高效液相色譜 （H P LC ）-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定糕點(diǎn)中丙酸鈣的方法。色譜柱為C18（4.6mm x150mm ， 5μm ），流動(dòng)相為1.5g/L 的磷酸氫二銨酸性條件，在不同檢測(cè)波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，能夠進(jìn)行定性和定量的研究。結(jié)果表明，丙酸鈣的出峰時(shí)間約為3.5min，樣品檢出限為0.03g/kg，線性回歸方程相關(guān)系數(shù)r2=0.99990，方法回收率90% -101%。所建立的方法簡(jiǎn)單快速準(zhǔn)確，實(shí)用性強(qiáng)。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；糕點(diǎn)；食品添加劑；丙酸鈣

中圖分類號(hào)：O657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-5200（2014）05-076-03

[Abstract] A method was established to determine calcium propionate in cake by a gradient RP highperformance liquid chromatography （ HPLC） with diode arraydetector. The compound was separated by a C18（4.6mm×150m m ， 5μm）column with mobile phase of 1.5g/L acid ammonium phosphate， at different detection wavelength. Its qualitative and quantitative tests in this method have been done The experimental results show that calcium propionate was appeared in 3.5 min ，and the detection limit was 0.03g/kg， and the correlation coefficient r2 of equation of linear regression was 0.99990，and recoveries were between 90% and 101%.The established method is rapid accurate with good practical application and simple pretreatment.

[Key words] HPLC；Cake；Food Additive；Calcium Propionate

丙酸鈣[Caloium Propionate，（C2H5COO）2Ca]是我國近幾年發(fā)展起來的新型酸型食品防腐劑。在酸性條件下，產(chǎn)生游離丙酸，具有抗菌作用，對(duì)各類霉菌、革蘭氏陰性桿菌或好氧芽孢桿菌有較強(qiáng)抑制作用，還可以抑制黃曲霉素產(chǎn)生，而對(duì)酵母菌無害。丙酸（C2H5COOH）是人體代謝過程中的一種產(chǎn)物和反應(yīng)物，丙酸鈣分解后的Ca可被吸收[1]，所以丙酸鈣是一種安全性可靠的食品防霉劑。我國GB2760-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》[2]中規(guī)定， 丙酸鈣可用于豆類制品、生濕面制品、面包、糕點(diǎn)、醋、醬油、飲料等食品中，本文主要研究糕點(diǎn)中丙酸鈣的檢測(cè)。

食品中丙酸鈣的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法[3]氣相色譜法[4-8]離子色譜法[9-10] 。氣相色譜法定性定量能力較差，為尋找簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、實(shí)用的方法，本研究建立一種高效液相色譜法測(cè)定糕點(diǎn)中丙酸鈣方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器試劑和材料

HPLC-1260 高效液相色譜儀（美國安捷倫公司） 配有二極管陣列檢測(cè)器；KQ800DB 型數(shù)控超生波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；EASYPUREⅡ型超純水器（北京普析通用儀器有限責(zé)任司）；BSA2245-CW電子分析天平（北京賽多利斯公司）；H-2050R 型低速冷凍離心機(jī)（北京離心機(jī)公司）；IKA T25型組織搗碎機(jī)（上海標(biāo)本模型廠）；pH 紙（天津市塘沽區(qū)化學(xué)試劑廠）；0.45μm 微孔濾膜（天津市東康科技有限公司） ；磷酸、磷酸氫二銨、丙酸鈣、納他霉素、甲醇、乙酸銨、冰醋酸均為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

（1） 丙酸鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取丙酸鈣1.26g 用水溶解后定容100mL 容量瓶中， 配制成丙酸含量為10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。 （2） 1.5g/L磷酸氫二銨：稱取磷酸氫二銨1.5g，加水溶解后定容至1000mL容量瓶中。（3） l mol/L 磷酸溶液：加人3.4mL 濃磷酸，混勻加水定容至50mL容量瓶中。選擇以下幾種市售糕點(diǎn)進(jìn)行分析：月餅，綠豆糕，夾心蛋糕。

1.2 高效液相色譜分析條件

色譜柱：Agilent ZORBAXSB-C18柱（4.6mm× 150mm，5μm，安捷倫公司）；柱溫25℃；流速1.0mL/min；流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B： 為1.5g/L磷酸氫二銨，用磷酸調(diào)整pH值4.5-5.5，檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，選取214nm、305nm；進(jìn)樣量：10μL。按（表1）進(jìn)行梯度洗脫。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

1.4 樣品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取5g試樣至100mL燒杯中，加水20mL，加入1mol /L 磷酸溶液0.5mL 混勻，經(jīng)超聲浸提15min 后， 用1mol/L磷酸溶液調(diào)pH值至4.5-5.5左右，轉(zhuǎn)移試樣至50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度搖勻。將試樣全部轉(zhuǎn)移至50 mL 具塞塑料離心管中，以不低于4000r/min 離心10min，取上清液，經(jīng)0.45μm 微孔濾膜過濾后，待液相色譜測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取方法的選擇

丙酸鈣是新型防腐劑，易溶于水， 微溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑， 而在酸性條件下，丙酸鈣轉(zhuǎn)化成丙酸，所以選取pH值4.5-5.5純水提取丙酸鈣。常用的樣品提取方法有振蕩提取和超聲提取， 由于超聲利用超聲波的空化作用、機(jī)械效應(yīng)和熱效應(yīng)等加速分子運(yùn)動(dòng)，使細(xì)胞內(nèi)有效物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解，可以顯著提高提取效率，所以選擇超聲提取法提取15min。以此方法提取丙酸鈣回收率在90 %-101%。

2.2 流動(dòng)相的選擇

（1）以20%甲醇水做流動(dòng)相：根據(jù)極性有機(jī)化合物丙酸易溶于水的特點(diǎn)，選擇20%甲醇水做流動(dòng)相，采用ZORBAXSB-C18柱（4.6mm×150mm， 5μm不銹鋼柱）色譜柱，流速在1.0 mL/min條件下，進(jìn)行丙酸標(biāo)物實(shí)驗(yàn)，峰有拖尾。以綠豆糕，夾心蛋糕為代表樣品加標(biāo)試驗(yàn)，進(jìn)行定量計(jì)算，結(jié)果雜峰多，相似的光譜圖容易干擾，回收率<70%。（2）0.02mol/L乙酸銨溶液+10%甲醇，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值4.5-5.5采用ZORBAXSB-C18柱（4.6mm×150mm， 5μm不銹鋼柱）色譜柱，流速在1.0 mL/min條件下，出峰時(shí)間6.5min。以綠豆糕，夾心蛋糕為代表樣品加標(biāo)試驗(yàn)，進(jìn)行定量計(jì)算，結(jié)果不太滿意，回收率<80%。（3）流動(dòng)相采用1.5g/L磷酸氫二銨，用磷酸調(diào)節(jié)pH值4.5-5.5采用ZORBAXSB-C18柱（4.6mm×150mm，5μm不銹鋼柱）色譜柱，流速在1.0 mL/min條件下，以綠豆糕，夾心蛋糕為代表樣品加標(biāo)做試驗(yàn)，進(jìn)行定量計(jì)算，峰形對(duì)稱結(jié)果滿意，回收率>90%。采用梯度洗脫，可以保證丙酸出峰時(shí)間3.5min。

2.3 校正曲線和回歸方程

配制丙酸鈣標(biāo)準(zhǔn)系列溶液0、35.5、71.0、142.0、284.0、426.0、568.0、710.0μg/mL，在最佳色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定（3次平行），得到相應(yīng)峰面積，數(shù)值見表2。以濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)， 峰面積（UV·S）為縱坐標(biāo)繪制校準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：y=212001.8x-559.0，相關(guān)系數(shù)：r2=0.99990。結(jié)果表明，丙酸鈣在35.5-710.0μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4 樣品的測(cè)定及樣品色譜圖

3 結(jié)論

綜上所述，樣品前處理和流動(dòng)相中加入磷酸溶液， 作用是使樣品處于酸性條件下，使得樣品中的丙酸鈣轉(zhuǎn)化為丙酸，提取效率提高，本實(shí)驗(yàn)對(duì)糕點(diǎn)中丙酸鈣能夠準(zhǔn)確的定性和定量分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)r2=0.99990，線性關(guān)系良好，方法回收率90%-101%，方法檢出限0.03g/kg，方法定量限0.10 g/kg。該方法檢測(cè)操作快速，在工作中有較強(qiáng)的實(shí)用性。

參 考 文 獻(xiàn)

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[4] 中國人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn). 食品中丙酸鈉， 丙酸鈣的測(cè)定[S]. GB/T 5009.120-2003.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社， 2004.

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