楊 濤，孫軼飛，王立偉，張 穎，白文彩(.河北省石家莊市第一醫(yī)院普通外科，河北 石家莊 0500；.河北省滄州市傳染病醫(yī)院傳染科，河北 滄州06000；.河北省寧晉縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 寧晉 055550)

·論著·

KIF14過表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌手術(shù)預(yù)后密切相關(guān)

楊 濤1，孫軼飛1，王立偉1，張 穎2，白文彩3
(1.河北省石家莊市第一醫(yī)院普通外科，河北 石家莊 050011；2.河北省滄州市傳染病醫(yī)院傳染科，河北 滄州061000；3.河北省寧晉縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 寧晉 055550)

目的KIF14是有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白超家族成員，其在染色體分離和胞質(zhì)分裂過程中起著重要作用，KIF14表達(dá)增高與一系列人類癌癥發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究通過觀察KIF14表達(dá)與臨床變量的關(guān)系，探討KIF14過表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌手術(shù)預(yù)后的關(guān)系。方法取2005年2月—2010年12月我院進(jìn)行肝癌手術(shù)，并且術(shù)后病理證實(shí)為肝細(xì)胞肝癌的患者102例。應(yīng)用RT-qPCR檢測(cè)102例肝細(xì)胞肝癌組織中KIF14的表達(dá)量，并分析其與腫瘤分級(jí)、分期和無病生存率的關(guān)系。結(jié)果KIF14過表達(dá)與腫瘤分級(jí)(P=0.002)、分期(P=0.013)和無病生存率(P<0.001)均密切相關(guān)。結(jié)論肝細(xì)胞肝癌組織中KIF14過表達(dá)不利于手術(shù)預(yù)后，它也許可以作為肝細(xì)胞肝癌手術(shù)預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)及潛在治療靶點(diǎn)。

癌，肝細(xì)胞;驅(qū)動(dòng)蛋白;預(yù)后

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.03.006

肝細(xì)胞肝癌具有高侵襲、轉(zhuǎn)移早、易復(fù)發(fā)、預(yù)后差的臨床病理特征，是癌癥致死的第三大原因，而且還是肝硬化患者的首要致死原因。每年全球超過60萬人被診斷為肝癌，而我國又是全球肝癌發(fā)病率最高的國家，每年新發(fā)病例數(shù)占全球總數(shù)的55%，是目前對(duì)我國人民健康和生命威脅較大的惡性腫瘤之一[1]。改進(jìn)外科技術(shù)，使用新的化療藥物，改變化療方式和新興的分子靶點(diǎn)治療有利于改善患者的生存狀況。但是，對(duì)肝癌致癌機(jī)制了解不完全導(dǎo)致很難評(píng)估肝癌手術(shù)預(yù)后效果及選擇有針對(duì)性的治療方案并提高生存率。驅(qū)動(dòng)蛋白在無數(shù)細(xì)胞進(jìn)程，如胞內(nèi)運(yùn)輸和細(xì)胞分裂中起重要作用[2]。有跡象表明，具有異常表達(dá)和功能的驅(qū)動(dòng)蛋白對(duì)多種人類腫瘤的進(jìn)展起關(guān)鍵作用。更好地了解驅(qū)動(dòng)蛋白功能可能有利于腫瘤預(yù)后評(píng)估及靶向治療的發(fā)展[3-4]。人的KIF14是具有6 586個(gè)堿基對(duì)的驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員[5]，像所有驅(qū)動(dòng)蛋白一樣，KIF14包括一個(gè)驅(qū)動(dòng)蛋白域和一個(gè)叉頭關(guān)聯(lián)域[6]，并且KIF14預(yù)計(jì)在1q區(qū)域扮演可能的癌基因的角色。已有研究[7-9]表明，KIF14表達(dá)是乳癌、肺癌和卵巢癌的預(yù)后標(biāo)記，是卵巢癌的潛在治療目標(biāo)。本研究檢測(cè)原發(fā)肝癌組織中KIF14的表達(dá)，旨在探討其與腫瘤分級(jí)、分期及無病生存期的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2005年2月—2010年12月期間河北省石家莊市第一醫(yī)院進(jìn)行肝癌手術(shù)，并且術(shù)后病理證實(shí)為肝細(xì)胞肝癌的患者102例，組織標(biāo)本置于液氮中-80℃冷凍保存。102例患者的隨訪數(shù)據(jù)來源于醫(yī)院記錄和肝切除術(shù)后與患者的直接溝通。隨訪日期定為從手術(shù)切除腫瘤后到死亡或上次隨訪日。無病生存率(disease free surviva，DFS)定為患者肝癌切除后無肝癌復(fù)發(fā)跡象的時(shí)間。本研究通過我院審查機(jī)構(gòu)許可并書面征得所有患者同意。

1.2 組織RNA分離和實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative reverse transcription-PCR,RT-qPCR)：根據(jù)說明書使用TRIZOL試劑提取總RNA。使用5μg總RNA和SuperScript Ⅱ及寡dT執(zhí)行逆轉(zhuǎn)錄。RT-qPCR分析使用Fast SYBR Green MasterMix系統(tǒng)。KIF14引物和GAPDH內(nèi)參序列見表1。PCR反應(yīng)條件為95℃ 20s、95℃ 3min、60℃ 30s，使用ABI-7500(應(yīng)用生物系統(tǒng))共計(jì)40個(gè)循環(huán)。相對(duì)定量方法得到的CT值，通過三聯(lián)反應(yīng)測(cè)定所有樣本的KIF14與GAPDH。取探測(cè)基因的可用三聯(lián)反應(yīng)CT平均值，減去GAPDH的CT值，獲得ΔCT。KIF14的相對(duì)mRNA表達(dá)水平應(yīng)用2-ΔCT方法計(jì)算。

表1 KIF14的RT-qPCR擴(kuò)增引物Table 1 Primers used to perform RT-qPCR of KIF14

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0計(jì)算軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，按照Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析。KIF14與各種臨床病理變量間的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

由于在所有原發(fā)肝癌組織中KIF14 mRNA的分布不符合正態(tài)分布，所以我們基于肝癌患者的KIF14 mRNA相關(guān)水平和DPS狀況繪制ROC曲線。以1.5×10-3為界將患者分為KIF14低表達(dá)組(KIF14low)和高表達(dá)組(KIF14high)。

觀察KIF14表達(dá)與年齡，腫瘤大小、分級(jí)、分期，門靜脈癌栓和乙型肝炎病毒感染等相關(guān)因素的關(guān)系。結(jié)果顯示在KIF14高表達(dá)與腫瘤分級(jí)(P=0.002)和分期有關(guān)(P=0.013)，而與不同年齡、不同腫瘤大小癌栓和有無乙型肝炎病毒感染之間無關(guān)，見表2。

KIF14high患者DFS較KIF14low明顯縮短(圖1)。

表2 102例肝細(xì)胞肝癌患者中臨床病理因素與KIF14表達(dá)的關(guān)系Table 2 Relationship between clinicopathological factors and KIF14 expression in 102 hepatocellular carcinoma patients

圖1 102例肝細(xì)胞肝癌患者中KIF14 mRNA表達(dá)與5年無病生存率Kaplan-Meier曲線分層的關(guān)系(P<0.001)
Figure 1 The Kaplan-Meier plot of 5-year disease free survival curves stratified by KIF14 mRNA expression in 102 HCC patients(P<0.001)

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，KIF14在肝癌中過表達(dá)，這種過表達(dá)與腫瘤分級(jí)、分期有關(guān)。表明KIF14在人類肝癌癌變過程中具有重要作用，KIF14過表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌手術(shù)預(yù)后密切相關(guān)。

KIF14是胞質(zhì)分裂和染色體分離的必要條件[9]。多篇報(bào)道[6,8,10]稱，KIF14表達(dá)增加與多種不同的腫瘤發(fā)生有關(guān)，包括肝癌。在以往的研究中由于標(biāo)本數(shù)有限，Kim等[10]沒有觀察到KIF14表達(dá)水平與腫瘤侵襲性、分級(jí)、大小和生存率之間的特殊聯(lián)系。而本研究觀察到了KIF14表達(dá)水平與肝癌分級(jí)、分期及生存率之間密切相關(guān)。

盡管KIF14的確切功能尚不清楚，但它在細(xì)胞分裂中期使染色體對(duì)齊的作用[2]表明它在形成非整倍體方面可以發(fā)揮重要作用，并且它的過表達(dá)可能在癌癥進(jìn)展中起到加速細(xì)胞周期的作用。不管它的作用模式是什么，它在肝癌中的特異性過表達(dá)及它與腫瘤分級(jí)、生存率的關(guān)系，均證明KIF14作為可疑癌基因、治療靶點(diǎn)和預(yù)后目標(biāo)的重要性。

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《河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》編輯部

OVER EXPRESSION OF KIF14 IS CLOSELY RELATED WITH THE PROGNOSIS OF HEPATOCELLULAR CARCINOMA AFTER OPERATION

YANG Tao1,SUN Yifei1,WANG Liwei1,ZHANG Ying2,BAI Wencai3
(1.DepartmentofGeneralSurgerytheFirstHospitalofShijiazhuangCity,Shijiazhuang，HebeiProvince，050011； 2.DepartmentofInfectiousDiseasestheContagiousHospitalofCangzhouCity,HebeiProvince，Cangzhou061000,China；3.DepartmentofObstetricsandGynecologytheHospitalofNingjinCounty，HebeiProvince，Ningjin055550,China)

ObjectiveThe mitotic kinesin superfamily protein KIF14 is essential for cytokinesis and chromosome segregation and increased KIF14 expression is related to a variety of human cancers.This study is to explore the relationship between KIF14 expression and operation prognosis of hepatocellular carcinoma by investigating the connection between KIF14 expression and clinical variables.MethodsThe study involved 102 patients who were confirmed as hepatocellular carcinoma by pathology after operation from February,2005 to December,2010 in our hospital.The expression of KIF14 in 102 hepatocellular carcinoma cases was detected by RT-qPCR and coalition statistical analysed with tumor grade,stage and disease-free survival.ResultsKIF14 overexpression was closely related with tumor grade (P=0.002),stage (P=0.013) and disease-free survival (P<0.001).ConclusionKIF14 overexpression in hepatocellular carcinoma is not conducive to prognosis.It may be used as an important index and potential treatment target in evaluating the prognosis of hepatocellular carcinoma after operation.

carcinoma，hepatocelluar;kinesin;prognosis

2013-12-06；

2014-01-25

河北省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(132777236)

楊濤(1979-)，男，河北棗強(qiáng)人，河北省石家莊市第一醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事普通外科疾病診治研究。

R730.261

A

1007-3205(2014)03-0263-03

許卓文)