李業(yè) 柳小慶 李素貞 周曉今 楊文竹 陳茹梅

啟動(dòng)子在基因的功能研究及基因工程領(lǐng)域中扮演著重要的角色。目前轉(zhuǎn)基因研究中使用的啟動(dòng)子大多是組成型的強(qiáng)啟動(dòng)子，如花椰菜花葉病毒CaMV35S啟動(dòng)子和玉米 pUbi啟動(dòng)子等［1，2］。但是，組成型啟動(dòng)子在應(yīng)用中也漸漸顯現(xiàn)出了一些問(wèn)題。因?yàn)榻M成型啟動(dòng)子使目的基因在植物中全方位表達(dá)，這勢(shì)必會(huì)對(duì)宿主植物的正常生長(zhǎng)發(fā)育甚至環(huán)境造成不良影響［3，4］。組織特異性的啟動(dòng)子將目的基因的表達(dá)限定在特定的組織或器官中，在一定程度上避免了組成型啟動(dòng)子的弊端，因此受到了越來(lái)越多的關(guān)注。目前，大量的組織特異性啟動(dòng)子已經(jīng)被分離并報(bào)道，主要包括根特異性啟動(dòng)子［5-7］，莖特異性啟動(dòng)子［8，9］，葉片特異性啟動(dòng)子［10］，花粉、花藥特異性啟動(dòng)子［11-14］，果實(shí)、種子特異性啟動(dòng)子［15-18］，胚特異性啟動(dòng)子等［19，20］。但是，能像CaMV35S啟動(dòng)子一樣在植物基因工程中得到廣泛應(yīng)用的組織特異性啟動(dòng)子卻仍未見(jiàn)報(bào)道。

在研究玉米組織特異性啟動(dòng)子的過(guò)程中，本實(shí)驗(yàn)室篩選到一個(gè)特殊的啟動(dòng)子——枯草桿菌蛋白酶-糜蛋白酶抑制劑（Subtilisin-chymotrypsin inhibitor，CI-1B）基因，即ZmCI-1B基因的啟動(dòng)子。將全長(zhǎng)2 kb的ZmCI-1B啟動(dòng)子從玉米自交系B73中分離出來(lái)并轉(zhuǎn)化玉米，轉(zhuǎn)基因玉米植株的GUS染色結(jié)果表明，全長(zhǎng)啟動(dòng)子在玉米的根和胚中有較高的表達(dá)活性。為了進(jìn)一步分析啟動(dòng)子的調(diào)控特性，構(gòu)建了一系列的5'端缺失的啟動(dòng)子片段，以期利用5'端缺失法來(lái)研究啟動(dòng)子的功能。

由于擬南芥具有基因組簡(jiǎn)單，遺傳轉(zhuǎn)化效率高等特點(diǎn)，而被廣泛用于植物的基因功能的研究中。因此，本研究將先前構(gòu)建好的ZmCI-1B基因的全長(zhǎng)啟動(dòng)子及其7個(gè)5'端缺失體轉(zhuǎn)化到擬南芥中，通過(guò)GUS組織化學(xué)染色的方法來(lái)分析ZmCI-1B啟動(dòng)子在擬南芥中驅(qū)動(dòng)GUS基因的表達(dá)情況，以此來(lái)探究ZmCI-1B 啟動(dòng)子的功能；同時(shí)也為下一步比較ZmCI-1B 啟動(dòng)子在單子葉和雙子葉植物中功能活性的差異奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 擬南芥生態(tài)型為哥倫比亞野生型，由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 菌株和質(zhì)粒 根癌農(nóng)桿菌GV3101由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所提供。P2000-GUS，P1430-GUS，P1040-GUS，P800-GUS，P537-GUS，P348-GUS，P249-GUS，P220-GUS是將 pCAMBIA3301的 35S啟動(dòng)子分別用ZmCI-1B全長(zhǎng)啟動(dòng)子（P2000）以及7個(gè)5'端缺失的啟動(dòng)子序列（P1430，P1040，P800，P537，P348，P249，P220）替換而得到的重組表達(dá)載體。各個(gè)啟動(dòng)子構(gòu)建的簡(jiǎn)圖見(jiàn)圖1。載體上攜帶β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS）及bar基因。以上質(zhì)粒均由本實(shí)驗(yàn)室保存。

圖1 啟動(dòng)子缺失表達(dá)載體的示意圖

1.1.3 試劑 卡那霉素、慶大霉素及利福平均為Sigma公司產(chǎn)品；Taq DNA聚合酶、dNTP 為上海博彩生物科技有限公司產(chǎn)品；MS 粉末、植物凝膠購(gòu)于北京西美杰科技有限公司；蔗糖及其它試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 用熱擊法將P2000-GUS，P1430-GUS，P1040-GUS，P800-GUS，P537-GUS，P348-GUS，P249-GUS和P220-GUS 8個(gè)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞中。以pCAMBIA3301序列上特異引物3301F/3301R，進(jìn)行菌落PCR鑒定。引物序列見(jiàn)表1。PCR陽(yáng)性的單菌落，繼代培養(yǎng)，保菌于-80℃冰箱。各包含有表達(dá)載體的農(nóng)桿菌菌株分別命名為GV2000，GV1430，GV1040，GV800，GV537，GV348，GV249，GV220。

表1 菌落PCR鑒定陽(yáng)性克隆所用引物

1.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥轉(zhuǎn)化

1.2.2.1 擬南芥種子的播種及植株培養(yǎng) 將20μL擬南芥種子用加有0.05％吐溫-20的75％乙醇消毒10min；再吸棄乙醇，加入無(wú)水乙醇，與種子混合后，倒在濾紙上。晾干后的種子，用鑷子蘸取平鋪在MS培養(yǎng)基上，用封口膜封口，放入4℃冰箱內(nèi)春化2-3d。而后在22℃，16h晝/ 8h夜的光周期條件下培養(yǎng)7-14d。當(dāng)幼苗長(zhǎng)出四片真葉時(shí)，移栽到配制的營(yíng)養(yǎng)土中（蛭石∶營(yíng)養(yǎng)土=1∶3），繼續(xù)在22℃，16h晝/8h夜的光周期條件下培養(yǎng)，待擬南芥長(zhǎng)到開(kāi)花期時(shí)進(jìn)行侵染。

1.2.2.2 農(nóng)桿菌的培養(yǎng) 從-80℃冰箱取出GV2000，GV1430，GV1040，GV800，GV537，GV348，GV249和 GV220農(nóng)桿菌菌種，以1/100的體積比，接菌到200mL包含卡那霉素和利福平的YEB培養(yǎng)基中，28℃，200r/min培養(yǎng)36h。當(dāng)測(cè)得0D600=0.8-1.6時(shí)，5000r/min，5min離心收集菌體。然后吸棄上清，用5％的蔗糖（含有0.02％ Silwet L-77）重懸菌體，稀釋至OD600=0.6-0.8即可用作擬南芥侵染。

1.2.2.3 擬南芥轉(zhuǎn)化 擬南芥轉(zhuǎn)化采用花序侵染法。將擬南芥的主花序的頂端剪掉，以誘導(dǎo)側(cè)花序的生成，并使側(cè)花序同時(shí)開(kāi)花，以便于轉(zhuǎn)化。侵染步驟為：先將擬南芥的花序浸沒(méi)在侵染液中，約20s；然后將擬南芥平放到盤(pán)子里；并用薄膜覆蓋保濕，暗培養(yǎng)1d。第2天放于長(zhǎng)日照培養(yǎng)室培養(yǎng)。5-7d以后，按上述操作再侵染1次，一般侵染3-4次。待侵染后的擬南芥成熟后，收獲種子，充分干燥后儲(chǔ)存。

1.2.2.4 種子的篩選 分別收獲轉(zhuǎn)化后的T0代種子。種子滅菌后，平鋪在含10mg/L草銨膦的1/2MS固體培養(yǎng)基上。在4℃條件下，春化2-3d，然后在溫室中正常見(jiàn)光培養(yǎng)。生長(zhǎng)1周后的綠色植株可能是T1代陽(yáng)性植株（陰性植株葉片變黃），將綠色植株進(jìn)行土培。正常開(kāi)花結(jié)實(shí)后的植株，分單株收獲種子，得到T2代。

1.2.2.5 PCR驗(yàn)證 取轉(zhuǎn)基因擬南芥T0代及野生型植株的葉片組織，用CTAB法提取基因組DNA進(jìn)行PCR驗(yàn)證。PCR擴(kuò)增的引物由博邁德公司合成，引物序列見(jiàn)表2。以擬南芥葉片基因組DNA為模板，用F/R為引物，用普通Taq酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，65℃退火30s，72℃延伸15s，共32個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。擴(kuò)增產(chǎn)物為220bp，反應(yīng)產(chǎn)物用1.2％的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

表2 轉(zhuǎn)基因擬南芥PCR檢測(cè)所用引物

1.2.3 GUS組織化學(xué)染色 將擬南芥組織浸泡在GUS染色液中［1mmol/L X-Gluc，100mmol/L 磷酸氫二鈉，10mmol/L EDTA，1mmol/L 鐵氰化鉀，0.1％（V/V）的Triton X-100，2％ DMSO，pH7.0］，在 37℃下孵育3-8h。然后用100％乙醇進(jìn)行脫色。每個(gè)樣本重復(fù)染色3次，最后用體視顯微鏡觀察，并拍照。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的PCR檢測(cè)

采用熱擊法將8種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞，然后將恢復(fù)培養(yǎng)后的轉(zhuǎn)化體系菌液涂布在含有Kan、Gen、Rif的YEB固體培養(yǎng)基平板上。待有單個(gè)菌落長(zhǎng)出后，每個(gè)轉(zhuǎn)化體挑取4個(gè)單菌落進(jìn)行菌落PCR來(lái)鑒定陽(yáng)性克隆。從圖2（部分檢測(cè)結(jié)果）可以看出，挑取的單克隆均擴(kuò)增出特異目的條帶，說(shuō)明各個(gè)質(zhì)粒均已轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中，這些重組菌體均可用作擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化。

2.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的獲得

為了在擬南芥中研究ZmCI-1B啟動(dòng)子以及其各種缺失的片段的功能，通過(guò)浸花法將8種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到擬南芥中。獲得的T1代種子滅菌后，平鋪在含10mg/L草銨膦的1/2MS固體培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。4℃冰箱內(nèi)春化2d，然后在溫室中正常見(jiàn)光培養(yǎng)。生長(zhǎng)1周后，能長(zhǎng)出綠色葉片，并且有1-2cm長(zhǎng)的白色主根的植株是抗性植株；陰性植株葉片萎蔫變黃。將綠色植株進(jìn)行土培，能正常健壯生長(zhǎng)的初步認(rèn)定為陽(yáng)性植株。最終獲得P2000轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗11株；P1430轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗7株；P1040轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗10株；P800轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗6株；P537轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗15株；P348轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗12株；P249轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗12株；P220轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗22株。

圖2 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的PCR檢測(cè)

2.3 轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)

提取T1代各株系的葉片基因組DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)。從圖3可以看出，選取的各株系（部分株系）均有一條特異的擴(kuò)增條帶，而且條帶的大小與質(zhì)粒陽(yáng)性對(duì)照獲得的條帶相同；同時(shí)，野生型擬南芥作為陰性對(duì)照的泳道沒(méi)有擴(kuò)增條帶，這說(shuō)明從篩選培養(yǎng)基上篩選出的陽(yáng)性株系的確為轉(zhuǎn)基因株系。

圖3 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的部分PCR檢測(cè)結(jié)果

2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的GUS組織化學(xué)染色分析

為了分析ZmCI-1B全長(zhǎng)啟動(dòng)子及其7個(gè)5'端缺失的啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)基因擬南芥中啟動(dòng)子活性與組織特異性，分別檢測(cè)幼苗期，開(kāi)花期及角果成熟期3個(gè)時(shí)期的T2代轉(zhuǎn)基因擬南芥植株中的報(bào)告基因GUS的表達(dá)情況。同時(shí)取野生型擬南芥植株做同樣的處理，作為對(duì)照。每個(gè)包含啟動(dòng)子片段的表達(dá)載體均選取4個(gè)T1代轉(zhuǎn)基因擬南芥株系。各個(gè)株系分別收獲種子，并播種；正常生長(zhǎng)之后，取T2代植株的幼苗、花器官及角果進(jìn)行GUS染色。GUS染色結(jié)果表明，每個(gè)表達(dá)載體各個(gè)株系的GUS染色模式均一致。

從圖4-A可以看出，全長(zhǎng)啟動(dòng)子P2000驅(qū)動(dòng)的GUS基因只在轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗的葉片和上胚軸中有表達(dá)。從圖4-B、E、G可以看出，P1430、P537、P249驅(qū)動(dòng)的GUS基因在轉(zhuǎn)基因幼苗葉和根中均有表達(dá)，但在上胚軸卻沒(méi)有表達(dá)。但是1040bp的缺失片段在幼苗期擬南芥中完全喪失了啟動(dòng)子活性（圖4-C）。而800bp和348bp的缺失片段可驅(qū)動(dòng)GUS基因分別特異的在幼苗期擬南芥根和上胚軸中表達(dá)（圖4-D，F(xiàn)）。當(dāng)ZmCI-1B截短到220bp時(shí)，此缺失片段驅(qū)動(dòng)的GUS基因可在幼苗期的各個(gè)組織中表達(dá)（圖4-H）。

圖4 轉(zhuǎn)基因擬南芥T2代生長(zhǎng)10d的幼苗的GUS染色

從圖5可以看出，除1430bp、1040bp、537bp的缺失片段外，其他缺失片段以及全長(zhǎng)的ZmCI-1B啟動(dòng)子在花器官中均無(wú)活性（圖5-A，D，F(xiàn)-H）。1430bp缺失片段在柱頭和花瓣中有活性（圖5-B），1040bp缺失片段在柱頭、花藥和花瓣中有啟動(dòng)子活性，537bp缺失片段只在柱頭具有啟動(dòng)子活性（圖5-C）。

從圖6可以看出，全長(zhǎng)啟動(dòng)子ZmCI-1B與其800bp的缺失片段在轉(zhuǎn)基因擬南芥角果中均無(wú)啟動(dòng)子活性（圖6-A，E），而P1430在轉(zhuǎn)基因擬南芥在角果的果瓣中有較強(qiáng)的啟動(dòng)子活性（圖6-B）；而P1040驅(qū)動(dòng)的GUS只在角果的端部有表達(dá)（圖6-C）；其余缺失片段P537、P348、P249、P220在果瓣中也有啟動(dòng)子活性，但是其活性比P1430弱。

圖6 轉(zhuǎn)基因擬南芥T2代角果的GUS染色

3 討論

組織特異性啟動(dòng)子能將目的基因的表達(dá)限定在特定的組織或器官中，不僅增加了基因在特定區(qū)域的表達(dá)量，同時(shí)也避免了植物營(yíng)養(yǎng)的不必要的浪費(fèi)。因此，組織特異性啟動(dòng)子在植物的基因工程領(lǐng)域中具有重要的應(yīng)用價(jià)值［21］。其它研究工作表明（尚未發(fā)表），ZmCI-1B基因的啟動(dòng)子在玉米的根和胚具有較高的調(diào)控活性，有望成為玉米中有組織特異性的候選啟動(dòng)子。

通過(guò)PLANTCARE數(shù)據(jù)庫(kù)分析表明，在2kb的ZmCI-1B啟動(dòng)子序列上存在著多種順式作用元件，包括與基因時(shí)空表達(dá)相關(guān)的元件，如與根、葉片、種子、花藥等組織特異性相關(guān)的元件ROOTMOTIFTAPOX1，DPBFCOREDCDC3，POLLEN1LELAT52，CACTFTPPCA1等；與植物生理代謝或外界環(huán)境響應(yīng)有關(guān)的元件，如MYBCORE、ABRERATCAL等；與激素應(yīng)答有關(guān)的元件，如ABRELATERD1和SBOXATRBCS等；與轉(zhuǎn)錄激活、增強(qiáng)或抑制有關(guān)的元件，如CTRMCAMV35S等。5'端缺失法是目前常用的研究啟動(dòng)子功能的方法。我們根據(jù)全長(zhǎng)啟動(dòng)子（P2000）上預(yù)測(cè)的順式作用元件的分布和位置，設(shè)計(jì)了7個(gè)5'端缺失的啟動(dòng)子片段，即P1430、P1040、P800、P537、P348、P249和 P220。由于目前玉米的遺傳轉(zhuǎn)化效率較低，而擬南芥是研究基因功能的模式植物。因此，本試驗(yàn)通過(guò)擬南芥轉(zhuǎn)化的方式對(duì)ZmCI-1B啟動(dòng)子及7個(gè)5'端缺失的啟動(dòng)子片段的功能活性進(jìn)行分析。

從轉(zhuǎn)基因擬南芥植株不同組織的GUS染色結(jié)果來(lái)看，全長(zhǎng)啟動(dòng)子及7個(gè)5'端缺失的啟動(dòng)子片段在啟動(dòng)GUS報(bào)告基因的表達(dá)部位存在著明顯的差異（表3）；不同長(zhǎng)度的ZmCI-1B啟動(dòng)子缺失片段具有不同類型的組織特異性。全長(zhǎng)啟動(dòng)子ZmCI-1B只在擬南芥的葉片和上胚軸中有啟動(dòng)子活性，而在其它組織中均沒(méi)有活性。而其最短的5'缺失片段P220，在擬南芥的葉、上胚軸、根及果瓣中均表現(xiàn)出啟動(dòng)子活性，說(shuō)明這220bp的缺失片段仍然包含有啟動(dòng)子的核心啟動(dòng)子元件。通過(guò)PLANTCARE數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)，在220bp的序列內(nèi)也的確包含有核心啟動(dòng)子必需的元件TATABOX1，TATABOX2，CAATBOX1以及與根特異性表達(dá)相關(guān)的元件ROOTMOTIFTAPOX1，與葉肉表達(dá)相關(guān)的元件ANAERO2CONSENSUS。另外也說(shuō)明，截去的1780bp序列中包含有一些組織特異性負(fù)調(diào)控元件。

比P220的長(zhǎng)29bp的P249缺失片段與P220相比，其驅(qū)動(dòng)GUS的表達(dá)部位與P220類似，即都在根、葉及果瓣中表達(dá)，但是其驅(qū)動(dòng)的GUS在上述組織的表達(dá)水平要比P220高，說(shuō)明在220bp到249bp之間的29bp可能存在某些增強(qiáng)基因轉(zhuǎn)錄的基序；另外，其在上胚軸中的啟動(dòng)子活性失去了，也說(shuō)明那29bp的序列中可能存在抑制上胚軸中表達(dá)的負(fù)調(diào)控元件。而比P249長(zhǎng)約100bp的P348缺失片段，只保留了在果瓣中的啟動(dòng)子活性，同時(shí)也恢復(fù)了在上胚軸中的活性，但是卻喪失了在根和葉中的啟動(dòng)子活性。這說(shuō)明在那100bp序列中存在上胚軸特異表達(dá)的正調(diào)控元件和抑制在根和葉表達(dá)的負(fù)調(diào)控元件。有趣的是，在比P3485'端長(zhǎng)189bp的P537，恢復(fù)其在葉和根中啟動(dòng)子活性時(shí)，卻失去了在上胚軸中的活性，這說(shuō)明調(diào)控根和葉特異表達(dá)的元件與調(diào)控上胚軸特異表達(dá)的元件之間存在拮抗作用。而且這種拮抗作用也體現(xiàn)在調(diào)控花特異表達(dá)的元件與調(diào)控果瓣特異表達(dá)的元件之間。例如，在果瓣中有啟動(dòng)子活性的片段在花器官中卻沒(méi)有活性，但在花器官中有活性的片段卻在果瓣中沒(méi)有活性。

表3 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的GUS染色結(jié)果

值得關(guān)注的是P800和P1040兩個(gè)啟動(dòng)子缺失片段。P800只啟動(dòng)GUS在擬南芥的根和果瓣中表達(dá)，而在其他組織中均沒(méi)有活性，表現(xiàn)出了根特異的啟動(dòng)子活性。比P800長(zhǎng)240bp的P1040啟動(dòng)子在擬南芥的所有營(yíng)養(yǎng)器官中均沒(méi)有啟動(dòng)子活性，只在擬南芥的角果頂端有活性，卻在花中有較高的活性，GUS染色主要集中于雌花的柱頭、雄蕊及花瓣，因此P1040缺失片段表現(xiàn)出了花優(yōu)先表達(dá)的啟動(dòng)子活性。在-1040bp到-1bp的序列內(nèi)，預(yù)測(cè)有POLLEN1LELAT52元件存在，其是一個(gè)與花藥特異性相關(guān)的順式作用元件［22］；POLLEN1LELAT52的存在可能與擬南芥在花藥中具有較高的GUS表達(dá)有關(guān)。另外，這1040bp的序列內(nèi)還應(yīng)該存在著與花瓣特異表達(dá)相關(guān)的元件，然而數(shù)據(jù)庫(kù)中并沒(méi)有相關(guān)的注釋信息，因此要確定這段序列內(nèi)特異的順式作用元件還需要進(jìn)一步的試驗(yàn)探究。

另外，全長(zhǎng)2kb的ZmCI-1B啟動(dòng)子能驅(qū)動(dòng)GUS在轉(zhuǎn)基因玉米的胚中高表達(dá)（數(shù)據(jù)未發(fā)表），而所有的啟動(dòng)子包括全長(zhǎng)的及5'端缺失啟動(dòng)子的構(gòu)建，在擬南芥的種子中均沒(méi)有活性。其在轉(zhuǎn)基因擬南芥植株中只在葉片和上胚軸中表達(dá)，但其1430bp的缺失片段卻在除種子和上胚軸外的其它部位均有啟動(dòng)子活性，且活性有明顯增強(qiáng)。說(shuō)明截去的570bp序列中存在多種組織特異表達(dá)的負(fù)調(diào)控元件以及與啟動(dòng)子活性相關(guān)的抑制子。

有不少研究指出，將啟動(dòng)子轉(zhuǎn)化到異源植物中，其組織特異性會(huì)發(fā)生變化［23，24］。全長(zhǎng)2kb的ZmCI-1B啟動(dòng)子在擬南芥中具有葉特異性，這與在內(nèi)源植物——玉米中的ZmCI-1B啟動(dòng)子活性不同（在玉米中則在根和胚中有較高的活性）。這說(shuō)明單子葉植物的啟動(dòng)子在雙子葉植物中其功能發(fā)生了變化，這可能是單雙子葉植物的內(nèi)源環(huán)境的不同造成的。因此，要最終確定ZmCI-1B啟動(dòng)子的功能活性還需要將各個(gè)缺失啟動(dòng)子轉(zhuǎn)化玉米，在玉米中研究其功能。

4 結(jié)論

本研究以擬南芥為受體材料，將ZmCI-1B全長(zhǎng)啟動(dòng)子以及7個(gè)5'端缺失的啟動(dòng)子片段利用花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥，并進(jìn)行了GUS組織化學(xué)染色分析。結(jié)果表明，不同缺失的ZmCI-1B啟動(dòng)子在擬南芥的不同組織中具有不同調(diào)控功能，這與啟動(dòng)子上的順式作用元件密切相關(guān)。ZmCI-1B啟動(dòng)子在擬南芥中的活性與內(nèi)源植物——玉米中有差異。

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