金響國(guó) 孫向東 胡 凱 李興江 張麗艷 許景偉 王瑩穎

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外一科，黑龍江 齊齊哈爾 161041)

胃癌是消化系統(tǒng)常見的腫瘤之一，其轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)是引起患者死亡的主要原因，也是影響預(yù)后的主要因素。近來研究表明作為酪氨酸激酶受體家族重要成員之一的促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生肝細(xì)胞受體 A2 家族成員(EphA2 )在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及血管形成過程中發(fā)揮重要的作用〔1，2〕。EphA2是最早被分離出來的Eph亞家族成員，在多種腫瘤組織中有高表達(dá)〔2〕。有關(guān)EphA2表達(dá)與胃癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究較少。本文采用免疫組化SP法檢測(cè)EphA2在胃癌組織中的表達(dá)，旨在探討其在胃癌組織中表達(dá)的臨床病理學(xué)意義，為胃癌的臨床治療提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1標(biāo)本來源 收集本院病理中心2009年1月1日至2010年12月31日胃腺癌手術(shù)標(biāo)本60例，其中女24例，男36例，年齡50～62歲，中位年齡55歲，術(shù)前患者均未接受放化療。高分化胃腺癌23例(高分化管狀腺癌16例、高分化乳頭狀腺癌7例)，中低分化腺癌37例(中分化管狀腺癌18例、中分化乳頭狀腺癌5例、低分化黏液腺癌10例、腺鱗癌3例、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤1例)。浸潤(rùn)深度：早期胃癌(癌組織局限胃壁黏膜層及黏膜下層)10例；進(jìn)展期胃癌(癌組織浸潤(rùn)到黏膜下層)50例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例；有血道轉(zhuǎn)移13例，無血道轉(zhuǎn)移47例。腫瘤直徑<4 cm 26例，腫瘤直徑≥4 cm 34例。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟(IUCC)胃癌TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ期37例。

1.2主要試劑 兔抗EphA2多克隆抗體(SC-924，Santa Cruz)，通用型SP免疫組化試劑盒(SP-9000)及二氨基聯(lián)苯胺(DAB，ZLI-9031)均購(gòu)北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3免疫組織化學(xué)檢測(cè) 胃癌及癌旁胃組織(距腫瘤邊緣>5 cm的組織標(biāo)本)經(jīng)石蠟包埋后5 μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化、抗原修復(fù)。SP免疫組織化學(xué)染色方法按試劑盒說明書進(jìn)行，兔抗EphA2 稀釋比例為1∶200。磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照。已知陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對(duì)照。

1.4結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) EphA2蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃的顆粒為陽性細(xì)胞。結(jié)果判定〔3〕：染色強(qiáng)度計(jì)分淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，黃褐色或棕褐色計(jì)3分。染色陽性細(xì)胞百分率計(jì)分<25%計(jì)0分，26%～50%計(jì)1分，51%～75%計(jì)2分，>75%計(jì)3分。染色強(qiáng)度的計(jì)分乘以陽性細(xì)胞率計(jì)分≥3為陽性表達(dá)，計(jì)分<3分者為陰性表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，組間差異之間采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1EphA2胃癌組織及癌旁組中的表達(dá) EphA2在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為76.7%(46/60)，主要表達(dá)于癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色顆粒狀。EphA2在癌旁胃組織中的陽性表達(dá)率為48.3%(29/60)。EphA2在胃癌組織中的陽性表達(dá)率高于癌旁胃組織(χ2=10.276，<0.01)。見圖1。

圖1 胃癌組織中EphA2陽性表達(dá)(×200)

2.2EphA2蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 EphA2在中低分化胃癌組織中的陽性表達(dá)率高于高分化胃癌組織(P<0.05)；在早期胃癌組織中的陽性表達(dá)低于進(jìn)展期胃癌組織(P<0.05)；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組胃癌組織中表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)；在TNM分期中Ⅰ～Ⅱ期表達(dá)的陽性率低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)。EphA2的陽性表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤直徑及是否有血道轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1 EphA2表達(dá)與胃癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

Eph家族是已知受體酪氨酸激酶家族(RTK) 中最大的亞家族，為膜結(jié)合型糖蛋白，與配體結(jié)合后其構(gòu)象發(fā)生改變，形成受體-配體復(fù)合物，激活胞質(zhì)內(nèi)酪氨酸激酶，啟動(dòng)下游不同信號(hào)通路，從而引起一系列生物學(xué)效應(yīng)，參與胚胎發(fā)育、血管發(fā)生、細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、遷移及腫瘤形成等過程〔1，2〕。

EphA2基因是第一個(gè)被篩選出來的Eph亞家族成員，定位染色體1p36.1，編碼分子量為130 kD的蛋白。EphA2 與其配體結(jié)合，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)不同信號(hào)傳導(dǎo)通路，發(fā)揮不同作用〔2，4～7〕。EphA2廣泛表達(dá)于人類多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中，如肺癌、胃癌和結(jié)腸癌中〔4～7〕。本研究說明EphA2在胃癌組織中的高表達(dá)與胃癌的發(fā)生有著密切的關(guān)系，EphA2表達(dá)增高與其蛋白穩(wěn)定性增加、降解減少有關(guān)；EphA2表達(dá)增加促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化〔8〕及細(xì)胞增殖〔9〕參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。本研究結(jié)果與袁偉杰〔5，6〕等的研究結(jié)果基本一致，認(rèn)為EphA2的高表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)，說明EphA2蛋白的表達(dá)增加在胃癌的惡性進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用。已有研究顯示，EphA2蛋白具有促進(jìn)腫瘤侵襲的作用。EphA2受體與其配體結(jié)合發(fā)揮作用，如結(jié)合血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)促進(jìn)腫瘤血管生成、通過調(diào)節(jié)鈣黏蛋白及黏著斑激酶等影響腫瘤細(xì)胞間的黏附或腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲〔9〕，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。針對(duì)EphA2的靶向治療研究也取得一定進(jìn)展〔10〕。

綜上所述，EphA2的高表達(dá)與胃癌的發(fā)展、浸潤(rùn)密切相關(guān)，在臨床上檢測(cè)EphA2的表達(dá)能作為判斷胃癌惡性程度的指標(biāo)之一。EphA2有望成為胃癌基因治療的一個(gè)新靶點(diǎn)，對(duì)其結(jié)構(gòu)和功能的進(jìn)一步研究將為胃癌的治療開辟新思路。

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