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紅蔥提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用

何云1王慶華2*王曉藝1王紅星3

1.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，廣東 廣州 510006；3.廣州白云華南生物科技有限公司，廣東 廣州 510545

研究紅蔥不同溶劑提取物對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用。方法：通過95%乙醇、60%乙醇和水等三種不同的提取方式獲得紅蔥提取物，采用L-多巴速率氧化法，研究提取物對(duì)蘑菇酪氨酸酶催化L-多巴氧化活性的影響。結(jié)果：95%乙醇、60%乙醇和水的提取物對(duì)酪氨酸酶酶抑制作用的IC50分別約為5.76、3.04和5.81 mg/ml。結(jié)論：上述三種提取物均對(duì)蘑菇酪氨酸酶有一定的抑制作用，紅蔥60%醇提物對(duì)酪氨酸酶抑制作用最強(qiáng)。

紅蔥；酪氨酸酶；抑制作用

酪氨酸酶(Tyrosinase, EC1.14.18.1) 是一種多酚氧化酶[1, 2]，廣泛存在于動(dòng)植物和人體內(nèi)，是動(dòng)植物體酶促褐變、體內(nèi)色素合成的關(guān)鍵酶[1, 3]。它能將酪氨酸羥化，產(chǎn)生鄰位二羥基苯丙氨酸(L-多巴)，然后再將多巴氧化成多巴醌，進(jìn)而產(chǎn)生黑色素。因此，其代謝產(chǎn)物黑色素決定皮膚顏色深淺，其異常過量表達(dá)可導(dǎo)致人體的色素沉著性疾病，如雀斑、黃褐斑、老年斑等，因此酪氨酸酶活性是化妝品行業(yè)皮膚美白和治療皮膚色素沉著性疾病的藥物作用研究靶點(diǎn)。近年來，酪氨酸酶抑制劑的研究非?；钴S，有關(guān)植物提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用也越來越受到研究人員的重視。

紅蔥為鳶尾科紅蔥屬紅蔥Eleutherine americana Merr. et K. Heyne ，以全草、鱗莖入藥。原產(chǎn)于西印度群島，我國(guó)廣西、云南等地有分布，為民間藥用植物[4]。《中華本草》[5]記載，紅蔥有清熱涼血、活血通經(jīng)、消腫解毒的作用，主治吐血、咯血、體虛乏力，頭暈心悸，關(guān)節(jié)痛，跌打腫痛等。但目前對(duì)該藥物的藥理作用研究較少，本文報(bào)道了不同紅蔥提取方式對(duì)酪氨酸酶的影響，較好的闡明了紅蔥對(duì)酪氨酸酶的抑制作用和機(jī)制，可為進(jìn)一步開發(fā)和臨床用藥提供理論基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料 752紫外可見分光光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司；FA2104型電子天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；HH-1型電子恒溫水浴鍋，金壇市杰瑞爾電器有限公司。紅蔥，廣州白云華南生物科技有限公司云南種植基地提供；蘑菇酪氨酸酶(845U/mg)，worthington公司；L-多巴，廣州菲博生物科技有限公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 紅蔥提取物的制備 鮮紅蔥，烘干，粉碎后取1000 g，加入8倍量的95%(V/V)的乙醇和60%以及水分別提取2次，每次1 h。提取液過濾，合并濾液，濾液回收乙醇，得浸膏。在60℃下將浸膏濃縮到相對(duì)密度為1.30～1.40的稠膏，在60～70℃，-0.08 mpa的條件下真空干燥，粉碎，即得紅蔥提取物。

1.3 對(duì)酪氨酸酶活力的抑制作用 在pH6.8，25 mmol/L 磷酸鹽緩沖液體系中，以L-多巴為底物，將0.2 ml不同質(zhì)量濃度的紅蔥提取物與0.2 ml酪氨酸酶溶液于30℃預(yù)混合10 min后，加入 1 ml30℃L-多巴開始反應(yīng)，立即放入分光光度計(jì)中在475 nm處測(cè)定吸光值，共測(cè)定3次，根據(jù)以下公式計(jì)算紅蔥提取物對(duì)酪氨酸酶二酚酶活性的抑制率:

式中A1為含L-多巴、酪氨酸酶的測(cè)活體系時(shí)4 min時(shí)的吸光值；A2為含酪氨酸酶的測(cè)活體系4 min時(shí)的吸光值；A3為含L-多巴、酪氨酸酶、紅蔥提取物的測(cè)活體系4 min時(shí)的吸光值；A4為酪氨酸酶、紅蔥提取物的測(cè)活體系4 min時(shí)的吸光值；式中：A1、A2、A3、A4分別為表1中1、2、3、4號(hào)反應(yīng)液的吸光度值。

表1 反應(yīng)液組成

2 結(jié)果與討論

以L-多巴為底物，固定酪氨酸酶和L-多巴的質(zhì)量濃度分別為2.75×10-3mg/ml和2 mg/ml，以熟知的酪氨酸酶抑制劑曲酸和維生素C為陽性對(duì)照，考察95%、60%乙醇提取物和水提取物對(duì)酪氨酸酶二酚酶活性的影響。由圖1可見，三種紅蔥提取物對(duì)酪氨酸酶二酚酶均具有抑制作用，且抑制率隨著紅蔥提取物濃度的增加而增大。95%乙醇提取物、60%乙醇提取物和水提取物的IC50分別約為5.76 mg/ml、3.04 mg/ml和5.81 mg/ml。以60%乙醇提取物對(duì)蘑菇酪氨酸酶的抑制作用最為顯著，其質(zhì)量濃度為6.4 mg/ml時(shí)，對(duì)酪氨酸酶二酚酶活性的抑制率可達(dá)79.1%。在本酶活性測(cè)定體系中，陽性對(duì)照樣品曲酸和維生素C的IC50值分別約為3.84×10-3mg/ml和20.2×10-3mg/ml(圖2、3)。

目前多巴色素氧化法廣泛用于美白成分的篩選。曲酸和維生素C是熟知的酪氨酸酶抑制劑，實(shí)驗(yàn)中以此作為陽性對(duì)照，結(jié)果顯示本測(cè)試體系的結(jié)果與文獻(xiàn)一致[6]。實(shí)驗(yàn)中紅蔥60%乙醇提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制效果最好，優(yōu)于95%醇提和水提物，說明紅蔥中酪氨酸酶抑制劑成分在60%乙醇的溶解度較大。研究發(fā)現(xiàn)紅蔥含萘酚類、萘醌類和蒽醌類化學(xué)成分[2,7]，此類物質(zhì)通常具有酪氨酸酶活性抑制作用[8]。紅蔥60%乙醇提取物的IC50約為3.04 mg/ml，相較于文獻(xiàn)報(bào)道的一些具有美白作用的藥用植物提取物要低得多，如白芨水提取物(IC50 28 mg/ml)[9]，地榆多酚70%丙酮提取物(IC50 14.5 mg/ml)[10]、銀杏葉50%乙醇提取物(IC50 6.59 mg/ml)[11]、毛環(huán)竹95%乙醇提取物(IC50 7.88 mg/ml)、翠竹95%乙醇提取物IC50 6.83 mg/ml)[12]，顯示了紅蔥良好的美白功效潛力。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紅蔥提取物可有效抑制酪氨酸酶二酚酶活性，60%乙醇提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制效果優(yōu)于95%醇提取物和水提取物，IC50值約為3.04 mg/ml。實(shí)驗(yàn)為今后紅蔥這一民間藥材在食品和化妝品等領(lǐng)域進(jìn)一步開發(fā)利用提供一定參考。

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InhibitionofEleutherineplicataextractontyrosinase

HE Yun1,WANG Qing-hua2*,WANG Xiao-yi1,WANG Hong-xing3

1.Pharmaceutical College of Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China;2.The School of Basic Courses of Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006,China;3.Guangzhou Baiyun South China Bio-Technology Co., Ltd, Guangzhou 510545,China

To study the inhibition of Eleutherine plicata extract on the activity of tyrosinase. Methods: Three extracts of Eleutherine plicata were used to investigate the inhibition on the activity of tyrosinase by measuring the oxidation rate of L-dopa. Results: The IC50 of its 60% ethanol extract, 95% ethanol extract and water extract were about 5.60, 3.04 and 5.85mg/ml, respectively. Conclusion: These three extracts were on a certain inhibition of tyrosinase, and the 60% ethanol extract had the highest inhibitory activity to tyrosinase.

Eleutherine plicata；tyrosinase；inhibition

何云(1990-)，女，漢族，在讀碩士，研究方向：中藥制藥工程與技術(shù);E-mail：heyun1059947332@163.com

王慶華。

R285

A

1007-8517(2014)10-0013-02

2014.02.24)