李慧芝等

1引言

細胞內(nèi)的甲基化反應(yīng)存在通用甲基供體S腺苷甲硫氨酸（SAdenosylmethionine，AdoMet，SAM），SAM含有活性甲基，細胞內(nèi)幾乎所有用于甲基化修飾的甲基都來自SAM甲硫高能鍵。由于甲基化反應(yīng)的廣泛性，SAM是細胞內(nèi)參加反應(yīng)的重要性僅次于ATP的一種輔酶。細胞內(nèi)SAM濃度的微小改變，便會對細胞的生長、分化和功能產(chǎn)生重大影響＼[1＼]。因此，實現(xiàn)快速、靈敏、準確地檢測SAM具有重要意義。

目前，已報道的測定SAM的方法有電化學(xué)法＼[2＼]、HPLC法＼[3，4＼]和分光光度法＼[5＼]。光度法依賴甲基轉(zhuǎn)移酶、S腺苷高半胱氨酸核苷酶和S核糖基高半胱氨酸酶的催化作用，將SAM分解為高半胱氨酸，再對高半胱氨酸顯色反應(yīng)，操作比較繁瑣，準確度也不理想。熒光光度法具有操作簡單、靈敏度高、選擇性好等特點，作為熒光傳感器的有小分子＼[6，7＼]、聚合物＼[8，9＼]、量子點＼[10＼]等。近年來，基于熒光試劑和分析物質(zhì)之間競爭作用使熒光試劑的熒光恢復(fù)得到較多關(guān)注＼[11，12＼]。水溶性熒光共軛聚合物＼[13，14＼]作為一類新型熒光傳感材料，具有摩爾吸光系數(shù)大、熒光量子產(chǎn)率高等優(yōu)點，還具有“分子導(dǎo)線”的功能，能夠使熒光信號放大，常用于生物大分子和生物小分子的檢測＼[15，16＼]。

本研究采用的水溶性陽離子共軛聚合物聚3（1（2三乙胺乙?；┻哙?亞甲基）噻吩 （poly 3{＼[1（2hydrazino2oxoethyl）piperidin4ylidene＼]methyl}thiophene，PMTH），是具有優(yōu)良光電性能的熒光材料＼[17，18＼]。研究表明， Pb2+對PMTH熒光猝滅具有特異性，當(dāng)體系存在SAM時，SAM與Pb2+的配位作用很強，使PMTH從Pb2+PMTH配合物中被置換出來，PMTH的熒光性能又恢復(fù)，開啟了PMTH的“開關(guān)”熒光信號。本方法可以直接檢測SAM，不需要酶催化。

3.4pH值的影響

由于SAM結(jié)構(gòu)中有羥基、氨基和羧基，所以受體系pH值影響較大。實驗表明，pH≤4.5時，即在比較強酸性條件下，SAM與Pb2+很難形成配合物；pH>4.5時，SAM與Pb2+可以形成配合物； pH>8.5時，Cu2+有干擾；pH=4.5～9.0之間Pb2+與SAM以1∶1的比例形成配合物?？疾炝薖b2+與PMTH反應(yīng)的pH值范圍，結(jié)果表明， pH=5.6～8.2時熒光強度達到最大，而且穩(wěn)定，根據(jù)體系中兩個反應(yīng)情況，選擇加入1.0 mL pH=7.2 TrisHCl緩沖溶液。

3.5孵育時間和溫度對熒光恢復(fù)的影響

當(dāng)所有的試劑都加入后，熒光強度恢復(fù)程度逐漸增大，在室溫下孵育10 min，熒光強度恢復(fù)程度達到最大且穩(wěn)定，且在5 h內(nèi)熒光強度相對穩(wěn)定，所以測定要在5 h內(nèi)完成。溫度升高， 孵育的時間縮短，但穩(wěn)定的時間也相對縮短，提高溫度不能提高體系的靈敏度，所以本實驗采用在室溫條件下孵育10 min。

4結(jié)論

合成了一種水溶性共軛聚噻吩衍生物PMTH，通過對Pb2+與PMTH互相作用的熒光光譜的研究，考察了Pb2+對PMTH的熒光猝滅性能。在Pb2+PMTH的體系中加入SAM后，由于SAM與Pb2+的配位能力更強， SAM可與Pb2+形成配合物，將Pb2+從PMTH鏈上置換出來，使PMTH的熒光強度恢復(fù)，恢復(fù)的熒

光強度與SAM的濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。通過PMTH的熒光開關(guān)信號，成功建立了識別和檢測SAM的新方法。本方法具有高靈敏、高選擇性， 可簡便快速、無標記檢測SAM，并成功用于人血清、尿液及針劑樣品中SAM的檢測。

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19Wang X Y， Zhao J J， Guo C X， Pei M S， Zhang G G. Sensor. Actuat. B， 2014， 193： 157-165

AbstractA novel fluorescent switch was constructed based on poly 3{[1（2hydrazino2oxoethyl） piperidin4ylidene]methyl}thiophene （PMTH） in the presence of Pb2+ or Sadenosylmethionine （SAM）. The switch turned off in the presence of Pb2+owing to complex effect， and the fluorescence intensity of PMTH solution was efficiently quenched by Pb2+ ions. Upon adding SAM to the Pb2+PMTH solution， which was stronger Pb2+ chelators， it could form more stable SAMPb2+， the Pb2+ ion was displaced from PMTH and the fluorescence of PMTH was recovered. By triggering the "turnon" signal of PMTH， a new discrimination ability toward SAM method for the determination of SAM was established. The effects of the interaction on the fluorescence spectral

Symbolm@@ 9 mol/L. The system was successfully applied for detecting SAM in human serum， urine and injection samples.

KeywordsConjugated polymers； Fluorescence switch； Molecular recognition； SAdenosylmethionine； Lead ions

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Symbolm@@ 9 mol/L. The system was successfully applied for detecting SAM in human serum， urine and injection samples.

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AbstractA novel fluorescent switch was constructed based on poly 3{[1（2hydrazino2oxoethyl） piperidin4ylidene]methyl}thiophene （PMTH） in the presence of Pb2+ or Sadenosylmethionine （SAM）. The switch turned off in the presence of Pb2+owing to complex effect， and the fluorescence intensity of PMTH solution was efficiently quenched by Pb2+ ions. Upon adding SAM to the Pb2+PMTH solution， which was stronger Pb2+ chelators， it could form more stable SAMPb2+， the Pb2+ ion was displaced from PMTH and the fluorescence of PMTH was recovered. By triggering the "turnon" signal of PMTH， a new discrimination ability toward SAM method for the determination of SAM was established. The effects of the interaction on the fluorescence spectral

Symbolm@@ 9 mol/L. The system was successfully applied for detecting SAM in human serum， urine and injection samples.

KeywordsConjugated polymers； Fluorescence switch； Molecular recognition； SAdenosylmethionine； Lead ions