★ 丁建蘭 黃恩堂

(鷹潭市食品藥品檢驗(yàn)所 江西 鷹潭 335000)

白花蛇舌草為茜草科植物白花蛇舌草HedyotisDiffusaWilld.的干燥全草。具有清熱解毒，消癰散結(jié)，利水消腫等作用。廣泛用于咽喉腫痛，肺熱喘咳，熱淋澀痛，濕熱黃疸，毒蛇咬傷，瘡腫熱癰的治療。白花蛇舌草有較為復(fù)雜的化學(xué)成分，含有多糖、三帖酸、黃酮類、蒽醌類等多種化合物，齊墩果酸和熊果酸是其含有的兩個(gè)主要有效成分，前者有較強(qiáng)的抗菌消炎作用，同時(shí)還具有保護(hù)肝臟、利水滲濕等功效；后者對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞有抑制其生長(zhǎng)的作用，對(duì)誘癌致癌物也有一定的抵抗作用，除此之外還具有一些其他的更廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。但由于此兩者為同分異構(gòu)體，給分離和測(cè)定藥材中的齊墩果酸和熊果酸帶來(lái)一定難度。本研究建立HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地白花蛇舌草中齊墩果酸的含量，方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可應(yīng)用于藥材及其制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜系統(tǒng)(Waters2998二極管陣列檢測(cè)器)；DS3120超聲波清洗器(天津市東康科技有限公司)；PHS-3C數(shù)字式酸度計(jì)(上海理達(dá)儀器廠)；FW100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；CP225D電子精密天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。

齊墩果酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110709-200505)；甲醇為色譜純，冰乙酸和三乙胺為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Waters C18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(90∶10∶0.03∶0.06)；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；柱溫：20℃；流速：0.6mL/min；進(jìn)樣量：20μL；理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)不低于5000，分離度大于1.0。

2.2 供試品溶液的制備 取藥材粉末(過(guò)40目篩)3g，精密稱定，加氯仿回流提取3次，每次1h，合并濾液，減壓回收氯仿至干，殘?jiān)蛹状既芙庵?5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45μm濾膜，即得。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取齊墩果酸對(duì)照品適量，置10mL容量瓶中，以甲醇配制成1.01mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，搖勻。精密吸取該儲(chǔ)備液0.25,0.5,1.0,2.5,5mL，置于25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。

吸取上述各溶液，分別進(jìn)樣20μL，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=50122C+3888，r=0.9998。結(jié)果表明：齊墩果酸在10.1～202.0μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 取含齊墩果酸的對(duì)照品溶液20μL，按上述色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次，齊墩果酸峰面積的RSD為0.9%，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批江西產(chǎn)白花蛇舌草粉末(過(guò)40目篩)3g，共5份，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別計(jì)算齊墩果酸的含量，結(jié)果RSD為0.9%，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批白花蛇舌草供試品溶液，每隔1h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣8次，測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)下齊墩果酸峰面積和RSD值。結(jié)果，齊墩果酸峰面積的RSD為0.3%，表明供試品溶液至少在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的白花蛇舌草粉末(過(guò)40目篩)3g，共6份，分別精密加入齊墩果酸對(duì)照品溶液高、中、低不同的量，按供試品溶液的制備方法和上述色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果表示齊墩果酸的平均回收率為98.4%，RSD為0.6%，表明方法準(zhǔn)確，見(jiàn)表1。

2.8 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地的白花蛇舌草藥材，按按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別計(jì)算齊墩果酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 齊墩果酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 不同產(chǎn)地白花蛇舌草齊墩果酸的含量

3 討論

3.1 考察了不同流動(dòng)相甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸、甲醇-水-冰醋酸、乙腈-水-冰醋酸對(duì)齊墩果酸的分離效果，結(jié)果其峰形較差，分離度較低。

3.2 在甲醇-水-冰醋酸體系中加入適量的三乙胺，并考察了流動(dòng)相pH值在5.5～7.0時(shí)齊墩果酸的分離效果，結(jié)果三乙胺的加入有效抑制了齊墩果酸色譜峰的拖尾現(xiàn)象，改善了峰形，基線平穩(wěn)，提高了分離度，最終確定流動(dòng)相為甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(90∶10∶0.03∶0.06)。

[1]馬超，樸惠善.白花蛇舌草的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006,17(2):269-270.

[2]鄭茂，范博，丁紅，李潔娜,等.高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地白花蛇舌草中齊墩果酸和熊果酸的含量[J].中國(guó)藥物與臨床，2010,10(3):261-263.