孫曉慧 趙敏英 藺惠蘭 劉俊霞

·調(diào)查研究·

石家莊市女性HPV感染情況分析

孫曉慧 趙敏英 藺惠蘭 劉俊霞

目的研究石家莊市女性宮頸脫落細(xì)胞中人乳頭瘤病毒(HPV)的感染狀況及其特點(diǎn)。方法采用核酸分子快速導(dǎo)流雜交技術(shù)對石家莊市2 234例女性患者的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行HPV基因型檢測。結(jié)果所測標(biāo)本中HPV陽性檢出率為36.3%(812/2 234)，21種基因型均被檢出，其中高危型651例，低危型161例。HPV高危型中，陽性率最高的是HPV16型，其他主要基因型依次是HPV52、58、53、18、66、68、31、33、39型；低危型主要為6、11、81(CP8304)型；單一HPV基因型感染的陽性率為17.1%(381/2 234)，多重HPV基因型感染的陽性率為12.1%(270/2 234)。結(jié)論石家莊市女性宮頸脫落細(xì)胞HPV感染率為36.3%，HPV 16、52、58型是主要的感染基因型。

人乳頭瘤病毒；核酸分子雜交技術(shù)；基因型；石家莊

宮頸癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來宮頸癌的防治研究中認(rèn)為高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要危險因素[1，2]。因此，HPV檢測也成為宮頸癌篩查的必不可少的方法。核酸分子快速導(dǎo)流雜交技術(shù)通過寡核苷酸探針雜交可檢出15種高危型別HPV DNA，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，及6種低危型別HPV DNA，分別是HPV6、11、81(CP8304)、42、43、44。該技術(shù)建立在基因芯片和核酸雜交技術(shù)基礎(chǔ)之上，結(jié)果具有較高的可信性。因此，本研究通過核酸分子快速導(dǎo)流技術(shù)對石家莊市女性宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行HPV基因分型檢測，分析石家莊市女性HPV的感染狀況及分布特點(diǎn)，探討HPV篩查在宮頸病變防治中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年5月至2013年8月來我院婦科門診就診，有性生活史，自愿接受宮頸脫落細(xì)胞HPV感染分型篩查的2 234例女性患者的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行HPV基因型別檢測，年齡18～78歲，中位年齡33歲，受檢者均來自石家莊市及周邊地區(qū)。

1.2 儀器及試劑 核酸分子快速雜交基因分型檢測系統(tǒng)，包括PTC-200(MJ Reasearch)PCR擴(kuò)增儀，HybriMax核酸分子快速導(dǎo)流雜交儀，基因組抽提試劑盒、PCR擴(kuò)增試劑盒及雜交試劑盒，由凱普生物科技有限公司生產(chǎn)；高速離心機(jī)由白洋公司生產(chǎn)；超凈工作臺由蘇州凈工生產(chǎn)。

1.3 方法 (1) 宮頸脫落細(xì)胞的采集：先用棉拭子將陰道及宮頸口過多的分泌物輕輕擦拭干凈，再用宮頸刷采集宮頸脫落細(xì)胞，然后將其放入含專用細(xì)胞保存液的試管中，4℃保存。 (2) HPV DNA的提取 吸取800 μl細(xì)胞懸液標(biāo)本，14 000 r/min離心5 min后，棄上清，留取沉淀。按基因組抽提試劑盒說明書提取HPVDNA。(3)PCR擴(kuò)增：反應(yīng)體系25 μl，其中提取的DNA模板為1 μl，每一批同時擴(kuò)增HPV18型陽性對照和陰性對照各一份。反應(yīng)條件為95℃ 9 min，95℃ 20 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s擴(kuò)增40個循環(huán)，72℃ 延伸5 min。(4) 導(dǎo)流雜交：在HybriMax核酸分子快速導(dǎo)流雜交儀上進(jìn)行導(dǎo)流雜交，雜交儀及雜交液45℃預(yù)熱，在雜交平臺上放入標(biāo)記21種HPV基因型寡核苷酸探針的低密度基因芯片：將擴(kuò)增產(chǎn)物95℃變性5 min，冰浴2 min后，加入檢測孔內(nèi)進(jìn)行導(dǎo)流雜交，具體操作按照雜交試劑盒說明書進(jìn)行。(5) 結(jié)果判斷：陽性點(diǎn)為藍(lán)紫色圓點(diǎn)，其他為陰性。每張芯片上均有PCR反應(yīng)質(zhì)控點(diǎn)和雜交顯色質(zhì)控點(diǎn)各1個以進(jìn)行質(zhì)控。

2 結(jié)果

2.1 HPV DNA基因分型檢測結(jié)果 2 234例患者標(biāo)本中共檢出812例陽性，陽性檢出率為36.3%， 且21種基因型別均被檢測到；其中高危型別651例，占陽性標(biāo)本總數(shù)的80.2%，低危型別161例，占總陽性標(biāo)本總數(shù)的19.8%。

2.2 HPV DNA基因型別分布

2.2.1 高危型HPV主要基因型別陽性率：高危型別中陽性率最高的是HPV16(9.0%，200/2 234)，其他主要型別依次是52(5.7%)、58(5.1%)、53(2.7%)、18(2.5%)、66(2.1%)、68(2.0%)、31(2.0%)、33(2.0%)、39(2.0%)型。見表1，圖1。

表1 高危型HPV主要基因型別陽性率

圖1 高危型HPV主要基因型別在陽性標(biāo)本中的陽性率

2.2.2 高危型HPV單一、多重感染陽性率：單一HPV高危型別感染的陽性率為21.6%(483/2 234)，多重HPV基因型別感染的陽性率為13.8%(309/2 234)，其中二重感染161例，和三重感染148例，四重感染12例，五重感染5例，還有七重感染3例。見表2。

表2 高危型HPV單一、多重感染陽性率

3 討論

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，是威脅女性健康甚至導(dǎo)致女性病死的主要疾病[1]。近年來宮頸癌的發(fā)病率和病死率逐年上升且呈現(xiàn)地區(qū)增長趨勢。HPV是引發(fā)宮頸癌的主要致病因子，有近20種HPV基因亞型與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)[2]。在普通人群中HPV感染較為普遍，且HPV感染具有很強(qiáng)的地域差異，不同國家與地區(qū)HPV感染分型的流行病學(xué)分布不同[3]。

本研究對石家莊市2 234例婦科門診患者進(jìn)行篩查，以了解石家莊市女性HPV的感染狀況及分布特點(diǎn)，為宮頸病變的防治提供依據(jù)，早期預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。研究結(jié)果顯示，HPV21種基因型全部被檢出，石家莊市HPV總陽性率為36.3%，低于北京地區(qū)[4]的57.1%，高于呼和浩特地區(qū)[5]13.04%及西藏地區(qū)[6]9.19%，與浙江省臺州地區(qū)[7]35.08%結(jié)果相近。本研究結(jié)果顯示HPV16型是石家莊市女性最常見的HPV基因亞型，其次為HPV52、58型，與國內(nèi)其他地區(qū)研究結(jié)果基本一致，而與歐美人群中分布的HPV18型位于第二位的結(jié)果存在差異[8]，由此推測中國女性人群中HPV基因型別分布與歐美女性人群相比可能存在一定的地域特性。本研究中HPV53、18型陽性率較高，僅次于HPV52、58型，與其他研究結(jié)果有所不同，這可能與選取的篩查人群為婦科門診就診患者及研究樣本數(shù)偏少有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示HPV基因亞型單一感染率為59.5%(483/812)，多重感染率為40.5%(309/812)，與北京地區(qū)44.35%的結(jié)果相一致。在多重感染中，二重感染和三重感染占極大比例，還檢出了罕見的3例七重感染，與其他研究中多重感染以二重感染為主不同，且很少有七重感染病例的報道，表明HPV多重感染存在人群和地區(qū)差異。對于HPV感染的基因型數(shù)目與宮頸病變發(fā)生的相關(guān)性這一問題，目前爭議頗多。有學(xué)者認(rèn)為HPV多重感染增加了其持續(xù)感染的危險性，而高危型HPV的持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要危險因素，因此，多重感染可增加宮頸病變的發(fā)生[9]。也有學(xué)者認(rèn)為HPV多重感染各亞型之間存在競爭關(guān)系，相對于HPV單一感染而言，對宮頸細(xì)胞的侵害小，更易清除，因此不易導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生[10]。但另有研究發(fā)現(xiàn)[11]，HPV單一感染和多重感染的清除率無顯著差異，對某些特殊亞型如HPV16型的感染清除率較低，易導(dǎo)致其持續(xù)性感染，發(fā)生宮頸病變，甚至最終導(dǎo)致宮頸癌。

目前，大量的研究中，尚無對石家莊地區(qū)女性人群HPV感染情況的流行病學(xué)調(diào)查。因此，本研究對石家莊市2 234例婦科門診患者進(jìn)行HPV感染篩查，對于石家莊市女性宮頸癌的早期防治提供了依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2014.06.049

項(xiàng)目來源：石家莊市科技指導(dǎo)計劃項(xiàng)目(編號：12146803)

050011 河北省石家莊市第一醫(yī)院

劉俊霞，050011 河北省石家莊市第一醫(yī)院；

E-mail：20309337@qq.com

R 173

A

1002-7386(2014)06-0913-03

2013-10-17)