李英偉

·臨床醫(yī)學(xué)·

Survivin、PTEN、PCNA在早期宮頸癌中的表達(dá)及意義

李英偉

目的 檢測(cè)Survivin、PTEN和PCNA在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變、早期宮頸癌組織中的表達(dá), 進(jìn)一步探討這些因子表達(dá)和細(xì)胞增殖及凋亡的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法,檢測(cè)正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變和早期宮頸癌組織中Survivin、PTEN和PCNA的表達(dá)情況。結(jié)果 Survivin在早期宮頸癌中的陽性表達(dá)率明顯高于宮頸上皮內(nèi)瘤變及正常宮頸組織(P＜0.05)；PTEN在早期宮頸癌組織中的高表達(dá)率明顯低于宮頸上皮內(nèi)瘤變及正常宮頸組織(P＜0.05)；PCNA在早期宮頸癌中的陽性表達(dá)率明顯高于宮頸上皮內(nèi)瘤變及正常宮頸組織(P＜0.05)；Survivin和PTEN在早期宮頸癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論 Survivin、PTEN和PCNA可能在宮頸癌細(xì)胞的凋亡和增殖中發(fā)揮協(xié)同作用。Survivin和PTEN異常表達(dá)作為一種潛在的預(yù)測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤皮(CIN)轉(zhuǎn)歸的指標(biāo)有重要意義。

宮頸癌；Survivin；PTEN；PCNA；免疫組化

宮頸癌是全球婦女中第二個(gè)最常見的惡性腫瘤, 僅次于乳腺癌。近年來隨著生殖道病毒性疾病和性傳播疾病的增加,宮頸癌患病年齡呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)［1］。目前人們發(fā)現(xiàn)了許多與宮頸癌發(fā)生相關(guān)的危險(xiǎn)因素, 包括行為危險(xiǎn)因素、生物學(xué)因素、遺傳等方面因素。而細(xì)胞增殖和凋亡失衡成為腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)(S-P)方法, 通過對(duì)Survivin、PTEN、PCNA的進(jìn)一步研究, 旨在探討細(xì)胞增殖、凋亡與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。希望能為宮頸癌開辟有效地臨床治療新途徑提供可靠的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集內(nèi)蒙古赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院病理科及內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院2007～2009年存檔的活檢或手術(shù)切除的宮頸標(biāo)本, 所有患者術(shù)前均未接受過激素治療或放療、化療, 術(shù)后均經(jīng)病理檢查確診。其中宮頸上皮內(nèi)瘤變60例,包括CIN I 30例, CIN II～I(xiàn)II 30例；早期宮頸癌30例。另選用正常宮頸組織(患子宮肌瘤行全子宮切除手術(shù)的)蠟塊30例作為對(duì)照組。

1. 2 方法 采用免疫組化S-P法測(cè)定標(biāo)本。

1. 3 免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 光鏡下觀察免疫組織化學(xué)染色切片, Survivin以細(xì)胞漿表達(dá)為主, 偶見于細(xì)胞核；PTEN、PCNA以核表達(dá)為主。以細(xì)胞漿或細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒為陽性信號(hào)。無著色或與背景顏色一致為陰性細(xì)胞。

在北航圖像中心Cmais真彩色病理圖像分析系統(tǒng)下, 采用Frank等提出的半定量積分法確定其陽性強(qiáng)度。具體分析如下：①陽性細(xì)胞的百分率＜5%為0分, 6%～25%為1分, 26%～50%為2分, 51%～75%為3分, ＞75%為4分；②陽性細(xì)胞的強(qiáng)度：無著色或著色很弱, 0分；淡棕黃色為1分,棕黃色為2分, 深棕褐色為3分。兩項(xiàng)積分相加:0分為陰性(-), 1～3分為弱陽性(+), 4～7分為強(qiáng)陽性(++～+++)。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析, 定性資料用陽性率(%)表示, Survivin、PTEN、PCNA的表達(dá)率比較用χ2檢驗(yàn)；Survivin、PTEN、PCNA在三組中的表達(dá)水平比較采用秩和檢驗(yàn)；Survivin、PTEN、PCNA 三者之間的關(guān)系用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 Survivin在各組組織中的表達(dá)狀況 Survivin在宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌組織中均有表達(dá), 但是在正常宮頸組織中的表達(dá)為陰性。Survivin由正常宮頸-CIN-宮頸癌組織的陽性表達(dá)率逐漸增高:宮頸癌組高于CIN組, CIN組高于正常宮頸組織(P＜0.05)。Suvrvini陽性表達(dá)率隨CIN級(jí)別的升高而升高：CIN II-III高于CIN I(P＜0.05)。而正常宮頸與CIN I之間及CIN II-III與宮頸癌之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2. 2 PTEN在各組組織中的表達(dá)狀況 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, PTEN蛋白在正常宮頸組織中強(qiáng)表達(dá), 由正常宮頸-CIN-早期宮頸癌組織的陽性表達(dá)呈進(jìn)行性下降, 在早期宮頸癌表達(dá)中多為陰性。

PTEN陽性表達(dá)率逐漸降低：顯示正常宮頸和CIN I組之間無差異, 宮頸癌低于CIN, CIN低于正常宮頸, CIN高于CIN II～I(xiàn)II, CIN I組、CIN II～I(xiàn)II組與宮頸癌組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

2. 3 PCNA在各組組織中的表達(dá)狀況 本研究組宮頸上皮內(nèi)瘤變及早期宮頸癌組織中有較豐富表達(dá), 對(duì)照組正常宮頸組織中多為陰性表達(dá)。PCNA由正常宮頸-CIN-宮頸癌組織的陽性表達(dá)呈逐漸增高的趨勢(shì), 且隨CIN級(jí)別的升高, PCNA指數(shù)亦升高。各級(jí)CIN和宮頸癌的PCNA指數(shù)都比正常宮頸有明顯增加, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 其中從CIN I到CIN II～I(xiàn)II, PCNA指數(shù)增高最為明顯, 而宮頸癌與CIN II～I(xiàn)II之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2. 4 宮頸癌組織中Survivin基因表達(dá)與PCNA、PTEN表達(dá)之間的關(guān)系 Survivin與PTEN、PCNA在早期宮頸癌中的表達(dá)經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：在早期宮頸癌組中Survivin與PTEN的表達(dá)為負(fù)相關(guān)關(guān)系, 相關(guān)系數(shù)r=-0.824, P=0.00, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PTEN與PCNA之間r=-0.740, P＜0.05, 表明兩者之間呈負(fù)相關(guān)。Survivin與PCNA的表達(dá)作相關(guān)性分析, Survivin與PCNA之間為正相關(guān)關(guān)系(r=0.779, P＜0.01), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此得出, Survivin與PCNA存在正相關(guān), 而與PTEN存在負(fù)相關(guān), Survivin與PCNA表達(dá)率越高, PTEN表達(dá)率越低。

3 討論

目前Survivin被認(rèn)為在細(xì)胞周期調(diào)控、抗細(xì)胞凋亡、促血管生成、促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化及細(xì)胞增殖等方面均發(fā)揮重要作用。近年來研究表明腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與Survivin密切相關(guān)。Ai Z等［2］發(fā)現(xiàn)Survivin在正常宮頸組織中表達(dá)均為陰性, 隨宮頸病變程度加重, Survivin表達(dá)逐漸增強(qiáng), 且與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況呈正相關(guān)。在作者的研究中發(fā)現(xiàn), 由正常宮頸-CIN-宮頸癌組織中Survivin的陽性表達(dá)率逐漸增高, 且隨CIN級(jí)別的升高而升高, 相鄰兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 而CIN I和正常宮頸之間及CIN II-III與宮頸癌之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明在宮頸癌組織中Survivin基因蛋白呈高表達(dá)狀態(tài)?？梢奡urvivin在宮頸癌組織中的表達(dá)是一個(gè)漸進(jìn)的過程。Survivin與腫瘤細(xì)胞生長失控以及腫瘤最終形成關(guān)系密切。

PTEN抑癌基因自發(fā)現(xiàn)以來就倍受腫瘤研究者的關(guān)注。Kurose K等［3］研究顯示鱗狀細(xì)胞癌者均有PTEN基因改變,且存在PTEN等位基因的缺失和突變。Depwski PL等［4］對(duì)63例宮頸上皮內(nèi)瘤變, 85例宮頸鱗癌及12例正常宮頸采用免疫組化法檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)隨病變進(jìn)展PTEN陽性表達(dá)率逐級(jí)降低, 認(rèn)為在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中PTEN基因有重要作用, 但并非獨(dú)立的預(yù)后影響因素。馬玉芳等［5］最近對(duì)60例宮頸鱗癌的PTEN表達(dá)水平進(jìn)行免疫組化檢測(cè), 表明PTEN與宮頸鱗癌的分化程度有關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)研究顯示, PTEN突變與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。在宮頸癌組織中PTEN基因蛋白的表達(dá)強(qiáng)度明顯低于CIN和正常宮頸組織, CINI組與宮頸癌組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 說明在宮頸癌組織中其呈低表達(dá)狀態(tài),在宮頸上皮不典型增生演化過程中PTEN基因扮演了重要角色。PTEN蛋白表達(dá)可作為監(jiān)測(cè)宮頸癌發(fā)生的輔助手段之一。

PCNA是近年來反應(yīng)腫瘤生物學(xué)行為可靠的標(biāo)志物。PCNA含量在正常增殖和轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中, 有明顯的周期性變化, 是一種細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白。Morawski K等［6］在對(duì)喉癌術(shù)后患者的研究中發(fā)現(xiàn), 原位復(fù)發(fā)組PCNA增殖指數(shù)顯著高于未復(fù)發(fā)組。本研究結(jié)果顯示PCNA的陽性表達(dá)率隨著宮頸病變發(fā)展有遞增趨勢(shì), 且在宮頸癌中的陽性表達(dá)明顯高于CIN組, CIN組高于正常宮頸組。說明PCNA蛋白積累在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要和關(guān)鍵的作用。PCNA蛋白高表達(dá)可能促使宮頸鱗狀上皮細(xì)胞過度增生并發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。研究還發(fā)現(xiàn)宮頸癌組和CIN II～I(xiàn)II組之間無顯著性差異, 推測(cè)PCNA蛋白積累可能在宮頸癌發(fā)生增殖過程的早期起著重要作用, 其高表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生及宮頸癌切除術(shù)后早期的復(fù)發(fā)、增殖密切相關(guān)。檢測(cè)PCNA能夠較為客觀地反映細(xì)胞的增殖活性及生長速度, 是評(píng)估患者預(yù)后的良好指標(biāo)。

Survivin在宮頸癌發(fā)生的早期或初始已過度表達(dá), 可以作為評(píng)判宮頸癌發(fā)生或復(fù)發(fā)的早期診斷指標(biāo)。在宮頸癌中Survivin與PTEN的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)性, 可能在宮頸癌細(xì)胞的增殖和凋亡中發(fā)揮協(xié)同作用, 兩者共同影響和參與了宮頸癌發(fā)生、增殖、惡變和復(fù)發(fā)。Survivin在宮頸癌組織中的高表達(dá)與PCNA的高表達(dá)具有一致性, 提示Survivin、PCNA在宮頸癌發(fā)生、浸潤及轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用。Survivin、PTEN和PCNA異常表達(dá)作為一種潛在的預(yù)測(cè)CIN轉(zhuǎn)歸的指標(biāo)起著重要意義。

［1］ 吳愛如. 婦科惡性腫瘤的流行病學(xué).中國腫瘤, 1997, 6(2):3-5.

［2］ Ai Z, Yin L, Zhou X, et al. Inhibition of survivin reduces cell proliferation and induces apoptosis in human endometrial cancer. Cancer, 2006, 107(4):746-756.

［3］ Kurose K, Zhou XP, Araki T, et al. Biallelic inactivating mutations and an occult germline mutation of PTEN in primary cervical carcinoma. Genes Chromosomes Cancer, 2000, 29(2):166.

［4］ Depwski PL, Rosenthal SI, Roes JS. Loss of expression of the PTEN gene protein product is associated with poor outcome in breast cancer. Mod Pathol, 2001, 14(7):672-676.

［5］ 馬玉芳, 劉銘球, 易建華, 等.腫瘤抑癌基因PTNE在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其與分化程度的關(guān)系.鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2003, 22(1):12.

［6］ Morawski K, Namyslowski G, Gabriel A, et al. Assessment of usefulness of PCNA and oncoprotein p53 staining in prediction of the recurrences in subjects operated on for laryngeal carcinoma. Otolaryngol Pol, 2000, 54(4):393-399.

2014-03-02］

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