樊寶娟，劉雪峰，曾愛(ài)國(guó)，常 春，傅 強(qiáng)*(.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 7006；2.陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，西安 70065)

金線(xiàn)草為民間草藥，始載于《本草拾遺》。其為蓼科金線(xiàn)草屬植物金線(xiàn)草Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier，以根或全草入藥，其味辛、苦，性涼[1]。又名毛蓼、山蓼、一串紅、鐵拳頭、紅花鐵菱角、蓼子七、雞心七、豬蓼七、海根[1-6]。該藥性淡、平，具有涼血止血、清熱利濕、散瘀止痛之功效，主治風(fēng)濕骨痛、胃痛、咳血、吐血、便血、血崩、經(jīng)期腹痛、產(chǎn)后血瘀腹痛、跌打損傷等癥[7]。文獻(xiàn)記載，同屬短毛金線(xiàn)草根莖含有沒(méi)食子酸(gallic acid)、左旋兒茶精(catechin)、左旋表兒茶精(epicatechin)、左旋表兒茶精-3-O-沒(méi)食子酸酯(epicatechin-3-O-gallate)、原矢車(chē)菊素B2(procyanidin B2)、原矢車(chē)菊素B2-3-O-沒(méi)食子酸酯(procyanidin B2-3-O-gallate)。趙友興等[8]從金線(xiàn)草的乙醇提取物中共分離鑒定了11個(gè)化合物：沒(méi)食子酸、腺苷、槲皮素等。其中沒(méi)食子酸是可水解鞣質(zhì)的單體，具有抗病毒作用。本文采用高效液相色譜法測(cè)定了金線(xiàn)草不用部位中沒(méi)食子酸的含量，進(jìn)一步為金線(xiàn)草的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters1525高效液相色譜儀，Waters717檢測(cè)器，Empower2487色譜工作站(美國(guó)沃特斯公司)；Sartorius BS224S電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)。

1.2試藥 金線(xiàn)草藥材，自采于陜西秦嶺和巴山地區(qū)，共8批，經(jīng)鑒定；對(duì)照品及對(duì)照藥材，均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；沒(méi)食子酸(批號(hào)：110831-200803)；甲醇為色譜純(美國(guó)天地公司)；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相[9]：甲醇-1 mL·L-1磷酸溶液(4∶96)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)272 nm。在上述條件下，供試品中沒(méi)食子酸色譜峰與其他雜質(zhì)峰可達(dá)到基線(xiàn)分離，分離度大于1.5。見(jiàn)圖1。

2.2溶液的配制

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品8.20 mg，加甲醇溶解并定容至100 mL，制成質(zhì)量濃度為82.0 μg·mL-1對(duì)照品溶液。

圖1 HPLC圖

2.2.2供試品溶液的制備 取本品適量，粉碎，取樣品約0.2 g，精密稱(chēng)定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)為50%甲醇溶液50 mL，密塞， 加熱回流3 h，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇溶液溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取樣品(批號(hào)1主根)共6份，精密稱(chēng)定，分別按2.2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，沒(méi)食子酸含量的RSD為1.98%，結(jié)果表明樣品重復(fù)性良好。

2.4線(xiàn)性關(guān)系考察 分別精密吸取質(zhì)量濃度為8.20，16.4，41.0，82.0，164.0，205.0和410.0 μg·mL-1沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液10 μL，在上述2.1色譜條件下測(cè)定峰面積，以峰面積(Y)對(duì)對(duì)照品進(jìn)樣量(X，μg)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程：Y=3 156.8X-5 364.1，r=1(n=7)，表明沒(méi)食子酸對(duì)照品的進(jìn)樣量在0.082～4.1 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.5精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，考察其峰面積，結(jié)果6 次沒(méi)食子酸峰面積的RSD為0.33%。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取樣品1-B的供試品溶液分別在0，4，8，12，16，20和24 h測(cè)定，其RSD為0.58%。

2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已測(cè)得含量的樣品(批號(hào)1主根)6份各0.1 g，分別精密加入質(zhì)量濃度為8.20 μg·mL-1的對(duì)照品溶液2 mL，揮干溶劑，再照供試品溶液同法制備，按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果6份的平均回收率為101.3%，RSD為1.7%。見(jiàn)表1。

表1 沒(méi)食子酸加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.8樣品含量測(cè)定 按上述色譜條件，測(cè)定8批樣品，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 金線(xiàn)草藥材中沒(méi)食子酸含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

含量測(cè)定提取方法的考察：分別以體積分?jǐn)?shù)50%乙醇、乙醇、甲醇、水作為提取溶劑，結(jié)果體積分?jǐn)?shù)50%甲醇效果最佳。分別采用加熱回流、索氏提取、超聲提取方法，結(jié)果加熱回流提取效果最佳。分別回流2，3和4 h，結(jié)果3和4 h測(cè)定結(jié)果相近，故提取時(shí)間定為回流3 h。

對(duì)金線(xiàn)草不同部位的沒(méi)食子酸含量做了初步研究，從測(cè)定結(jié)果看，其各部位沒(méi)食子酸含量：莖葉>主根>須根>果實(shí)，其中莖葉中沒(méi)食子酸含量最高，達(dá)到0.311 mg·g-1，而果實(shí)中則最低，只有0.021 mg·g-1。且不同批次金線(xiàn)草之間的沒(méi)食子酸含量也有差異，分析應(yīng)該與其生長(zhǎng)環(huán)境和采集時(shí)間等因素有關(guān)。由于金線(xiàn)草目前尚無(wú)栽培品，故對(duì)其不同部位的成分研究，有利于有效合理地利用其現(xiàn)有資源。

參考文獻(xiàn)：

[1] 湖北省衛(wèi)生局.湖北中草藥志(二)[M].武漢:湖北人民出版社，1982: 633

[2] 全國(guó)中草藥匯編組.全國(guó)中草藥匯編：上冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1975: 534.

[3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典：上冊(cè)[M].2版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006: 1957，1981.

[4] 崔同寅.全國(guó)重名易混中藥鑒別手冊(cè)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1992: 39.

[5] 李世全.秦嶺巴山天然藥物志[M].西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1987: 86.

[6] 陜西中藥普查辦公室.陜西中藥名錄[M].西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1988: 107.

[7] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：第25卷[M].北京：科學(xué)出版社，1988: 121.

[8] 趙友興，李紅芳，馬青云，等.金線(xiàn)草化學(xué)成分研究[J].中藥材，2011，34(5): 704-707.

[9] 侯鴻軍，王莉.HPLC法測(cè)定余甘降脂片中沒(méi)食子酸的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2014，29(1): 22-24.