李本長(zhǎng)，鄧 磊，周 寧

(江西省職業(yè)病防治研究院，南昌 330006)

噻唑膦原藥(Fosthiazate)[1-3]是一種新穎、高效、廣譜型非熏蒸型有機(jī)磷殺線蟲劑，其學(xué)名為 (R,S)-S-仲丁基-O-乙基-2-氧代-1,3-噻唑烷-3-基硫代磷酸酯，具有優(yōu)異的觸殺性和內(nèi)吸傳導(dǎo)性，其廣泛應(yīng)用于植物寄生線蟲的危害防治上，有效期可長(zhǎng)達(dá)2～3個(gè)月，且施用效果不受土壤條件的影響，尤其適用于防治蔬菜類等農(nóng)作物寄生線蟲的危害。為了明確長(zhǎng)期低劑量攝入噻唑膦原藥的毒性作用并確定其最大無作用劑量，我們依據(jù)GB 15670-1995《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》對(duì)烯草酮原藥進(jìn)行了大鼠經(jīng)口毒性試驗(yàn)，現(xiàn)分析討論如下，以供生產(chǎn)單位、使用者、同行及農(nóng)業(yè)衛(wèi)生監(jiān)督管理部門參考。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物、試劑與儀器設(shè)備

SPF級(jí)SD大鼠(90～120)g，80只，雌雄各半，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)為SCXK(湘)2009-0004；噻唑膦原藥，主要成分為≥96%噻唑膦，性狀為淺黃色至紅棕色油狀液體，由國(guó)內(nèi)某化工股份有限公司提供；全自動(dòng)生化分析儀(Toshiba TBA-40 FR,日本)、Clinitek STATUS拜施達(dá)尿分析儀(德國(guó)Bayer公司)和TLT l0SG干化學(xué)尿析試紙條。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒與處置

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)飼養(yǎng)觀察5 d后，動(dòng)物飼養(yǎng)于江西省職業(yè)病防治研究院屏障環(huán)境(使用許可證號(hào)：SYXK(贛)2008-0003)，依據(jù)噻唑膦原藥急性經(jīng)口LD50的1/125、1/25、1/5，將雌、雄大鼠隨機(jī)分成低、中、高3個(gè)實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組，每組20只，雌雄各半。低、中、高劑量組雌雄大鼠染毒劑量分別為0.8 mg/kg體重、4.0 mg/ kg體重、20.0 mg/ kg體重。將受試物混入飼料中連續(xù)喂飼90 d，動(dòng)物自由飲水進(jìn)食。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 日常觀察和體重：每天觀察并記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種狀態(tài)及異常表現(xiàn)。期間每周測(cè)動(dòng)物體重1次，并按本次各劑量組體重結(jié)果配制下周各組喂飼用粉料。在動(dòng)物染毒結(jié)束后稱取空腹體重，用于計(jì)算各劑量組臟器系數(shù)。

1.3.2 尿常規(guī)檢測(cè)：13周試驗(yàn)結(jié)束，隔夜禁食，股動(dòng)脈取血，測(cè)定pH值、亞硝酸鹽(NIT)、尿糖(GLU)、比重(SG)、隱血(BLD)、尿蛋白(PRO)、尿膽紅素(BIL)、尿膽元(URO)、酮體(KET)和白細(xì)胞(WBC)等指標(biāo)。

1.3.3 血清生化檢測(cè)：股動(dòng)脈取血5 mL以3 000 r/min離心10 min，分離出血清，測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性(ALT，酶動(dòng)力法)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性(AST，酶動(dòng)力法)、堿性磷酸酶活性(ALP，酶動(dòng)力法)、總蛋白含量(TP，終點(diǎn)法)、白蛋白含量(ALB，終點(diǎn)法)、總膽紅素含量(TBIL，兩點(diǎn)法)、尿素氮含量(BUN，兩點(diǎn)法)、肌酐含量(CREA，兩點(diǎn)法)、血糖含量(GLU，終點(diǎn)法)、膽固醇含量(CHOL，終點(diǎn)法)、甘油三脂含量(TG，終點(diǎn)法)、膽堿酯酶(CHE,酶動(dòng)力法)等指標(biāo)。

1.3.4 臟器檢查和臟器重量系數(shù)測(cè)定：13周試驗(yàn)結(jié)束，取腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、睪丸、卵巢(含子宮)測(cè)定其臟器重量系數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 噻唑膦原藥對(duì)大鼠日常狀態(tài)和體重的影響

試驗(yàn)期間各組動(dòng)物一般情況良好，無死亡、厭食和其它異常行為；高劑量組雄、雌性大鼠周平均體重分別從第2周和第1周開始至實(shí)驗(yàn)結(jié)束均明顯低于對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)，無毒理學(xué)意義，見表1、表2。

2.2 噻唑膦原藥對(duì)大鼠臟/體系數(shù)的影響

雄性大鼠高劑量組腦、肺、腎、腎上腺、睪丸的臟器重量系數(shù)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，雌性大鼠高劑量組腦、肺、腎的臟器重量系數(shù)明顯高于對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)，高劑量組的卵巢子宮的臟器重量系數(shù)明顯低于對(duì)照組(P<0.01)，見表3、表4。

表1 90 d喂養(yǎng)噻唑膦原藥對(duì)雄性大鼠體重的影響

表2 90 d喂養(yǎng)噻唑膦原藥對(duì)雌性大鼠體重的影響

表3 90 d喂養(yǎng)噻唑膦原藥對(duì)雄性大鼠臟器系數(shù)的影響

2.3 噻唑膦原藥對(duì)大鼠尿常規(guī)指標(biāo)的影響

雄、雌性大鼠BIL、SG、PRO的陽性率與對(duì)照組相比差異有顯著性，見表5、表6。

2.4 噻唑膦原藥對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響

雄性大鼠高劑量組TG、CHE明顯低于對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)，雌性大鼠高劑量組ALP明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，TP、ALB、TBIL、CREA、GLU、CHE明顯低于對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)，其它差異無顯著性，無毒理學(xué)意義，見表7、表8。

表4 90 d喂養(yǎng)噻唑膦原藥對(duì)雌性大鼠臟器系數(shù)的影響

表5 噻唑膦原藥90 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)雄性大鼠尿液檢查結(jié)果(陽性數(shù)/總份數(shù))

表6 噻唑膦原藥90 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)雌性大鼠尿液檢查結(jié)果(陽性數(shù)/總份數(shù))

表7 90 d喂養(yǎng)噻唑膦原藥對(duì)雄性大鼠血清生化指標(biāo)的影響

表8 90天喂養(yǎng)噻唑膦原藥對(duì)雄性大鼠血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

90 d喂養(yǎng)噻唑膦原藥的大鼠經(jīng)口毒性試驗(yàn)的結(jié)果表明：雄、雌性大鼠高劑量組體質(zhì)量增長(zhǎng)較對(duì)照組緩慢，而實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量的變化是反映動(dòng)物機(jī)體中毒效應(yīng)及毒物毒性的最基本指標(biāo)[4]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清生化、尿常規(guī)和臟器系數(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究的重要基礎(chǔ)指標(biāo)，是臨床醫(yī)療和科學(xué)研究的重要依據(jù)，是病理學(xué)、毒理學(xué)研究以及探討發(fā)病機(jī)理等研究中動(dòng)物選擇的根據(jù)。在本試驗(yàn)中，雄性大鼠高劑量組TG、CHE明顯低于對(duì)照組，雌性大鼠高劑量組ALP明顯高于對(duì)照組，雌性大鼠高劑量組TP、ALB、TBIL、CREA、GLU、CHE明顯低于對(duì)照組，提示受檢樣品對(duì)雄、雌性大鼠肝臟功能和糖類代謝及對(duì)雄、雌性大鼠肝功能有一定影響(P<0.05，P<0.01)；臟器重量系數(shù)是提供受試物靶器官的重要指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果表明，雄性大鼠高劑量組腦、肺、腎、腎上腺、睪丸的臟器重量系數(shù)明顯高于對(duì)照組，雌性大鼠高劑量組腦、肺、腎的臟器重量系數(shù)明顯高于對(duì)照組，高劑量組的卵巢子宮的臟器重量系數(shù)明顯低于對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)。本試驗(yàn)所測(cè)定的血清生化、尿常規(guī)及臟器系數(shù)等指標(biāo)，在受試雄性和雌性動(dòng)物的高劑量組中都呈現(xiàn)出明顯的毒理學(xué)變化，結(jié)合體質(zhì)量的檢測(cè)結(jié)果，能反映出高劑量喂飼噻唑膦原藥可以造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物亞慢性毒理學(xué)損傷，表明fosthiazate原藥有一定的毒性作用。

上述試驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量、生化指標(biāo)、尿常規(guī)指標(biāo)和臟器重量系數(shù)相互支持，具體協(xié)同作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。本次試驗(yàn)表明，噻唑膦原藥對(duì)雄、雌性大鼠染毒劑量為20.0 mg/kg體重及以上時(shí)，對(duì)大鼠有毒性效應(yīng)。因此，在本試驗(yàn)條件下，90 d喂養(yǎng)噻唑膦原藥對(duì)雄、雌性大鼠經(jīng)口毒性的最大無作用劑量均為4.0 mg/kg體重。

噻唑膦原藥在我國(guó)具有較大開發(fā)價(jià)值及較好的推廣使用前景,越來越多地受到生產(chǎn)廠家的重視。為此, 對(duì)其毒性的檢測(cè)監(jiān)控和毒性管理成為迫在眉睫的新的課題。本項(xiàng)目通過長(zhǎng)期低劑量攝入噻唑膦原藥的經(jīng)口毒性動(dòng)物試驗(yàn), 對(duì)其毒性作用特點(diǎn)進(jìn)行了觀察, 相關(guān)指標(biāo)表明,該藥對(duì)大鼠的生長(zhǎng)及大鼠的肝功能、糖類代謝、膽堿酯酶和體質(zhì)量等有一定影響, 在實(shí)際生產(chǎn)和應(yīng)用中應(yīng)予以注意。

參考文獻(xiàn)：

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