程鴻錕

(天津市紅橋區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300132)

HPLC法測定單硝酸異山梨酯滴丸含量的不確定度分析*

程鴻錕

(天津市紅橋區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300132)

目的：對HPLC法測定單硝酸異山梨酯滴丸含量的不確定度進行評定分析，找出影響不確定度的因素。方法：通過建立數(shù)學模型，對所得實驗數(shù)據(jù)進行分析和處理，確定并簡化不確定度來源，量化不確定度分量，計算相對標準不確定度擴展不確定度。結果：擴展不確定度為1.88%(K=2)，置信概率為95%。結論：本方法可用于該制劑含量的不確定度分析。

HPLC，不確定度分析，單硝酸異山梨酯滴丸

測量不確定度是一組與測量結果相關聯(lián)的參數(shù)， 檢測實驗室應建立測量不確定度的分析評定程序，并有能力對每一項有數(shù)值要求的測量結果進行測量不確定度的分析與評定。為了使測量數(shù)據(jù)更準確、客觀，根據(jù)中國實驗室國家認可委員會對認可實驗室在測量不確定度方面的要求，通過對高效液相法測定單硝酸異山梨酯滴丸含量的不確定度進行測量的分析與評估，進而找出影響不確定度的因素，為評價檢測報告提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC-2010C高效液相色譜儀； LC solution工作站；色譜柱:迪馬C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；賽多利斯BP211D電子天平(德國，十萬分之一)；單硝酸異山梨酯對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號100694-200401)；單硝酸異山梨酯滴丸(天津美倫醫(yī)藥集團，規(guī)格：5 mg，批號810040)；乙腈為色譜純，水為純化水,其他試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(18∶82)為流動相；檢測波長：230 nm；柱溫：40 ℃；流速：1.0 ml/min；進樣量：20 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液制備 精密稱取單硝酸異山梨酯對照品①10.92 mg、②12.00 mg，分別置于200 ml量瓶中，加流動相適量，超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2供試品溶液制備 取本品20丸，精密稱定，研細，精密稱取適量,分別置100 ml量瓶中，加流動相適量，超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻。

3 不確定度的分析與評定[1]

測量不確定度評定步驟：找出所有影響不確定度的影響因子；建立能夠滿足不確定度評定所需的數(shù)學模型；分析并計算各影響因子的標準不確定度分量；將各標準不確定度合成得到合成標準不確定度；計算擴展不確定度；給出測量不確定度報告。

3.1識別不確定度來源 主要包括供試品和對照品峰面積的響應值、對照品與供試品的稱量與稀釋、對照品純度、供試品含量均勻度的差異等。

3.2建立數(shù)學模型

3.3分析并計算不確定度分量

3.3.1由對照品引入的相對標準不確定度urel(S)

=3.1×10-2。

=9.5×10-2；

200 ml量瓶引入的相對標準不確定度為urel(SV)=9.5×10-2/200=4.8×10-4。

3.3.1.5對照品溶液峰面積引入的不確定度urel(SA) 該不確定度的產(chǎn)生主要由重復進樣所引起，由儀器給出的進樣峰面積標準偏差為隨機測量，屬于A類不確定度。2份對照品分別進樣5次和2次，用極差法分別計算其標準不確定度，重復測量的峰面積平均值R1為292 499和R2為321 287，極差R1為1 119，R2為29，當n=5時極差系數(shù)C1=2.33，則標準不確定度u(SA1)=R1/C1=1 119/2.33=480；當n=2時極差系數(shù)C2=1.13，則標準不確定度u(SA2)=R2/C2=29/1.13=26；則相對標準不確定度

=1.6×10-3。

合并以上各分量，則對照品引入的相對標準不確定度

3.3.2供試品引入的相對標準不確定度urel(T)

3.3.2.1供試品稱量引入的相對標準不確定度urel(Tm) 主要有供試品稱樣量和平均丸重。根據(jù)“3.3.1.1”所述um=3.1×10-2。供試品稱樣2份，分別為42.04和41.33 mg，則供試品稱樣的相對標準不確定度為

3.3.2.2供試品稀釋引入的相對標準不確定度urel(TV) 同“3.3.1.4”項下方法求得其標準不確定度為u(SV)=5.5×10-2，則100 ml量瓶引入的相對標準不確定度為urel(TV)=5.5×10-2/100=5.5×10-4。

3.3.3供試品含量均勻度引入的不確定度urel(t)

3.3.3.1供試品稀釋引入的相對標準不確定度urel(fV) 同“3.3.2.2”，則urel(fV)=5.5×10-4。

=8.1×10-3

3.4計算合成相對標準不確定度urel(P) 供試品含量測定結果P為101.64%，urel(P)由對照品引入的不確定度urel(S)和供試品引入的不確定度urel(T)以及供試品的含量均勻度引入的不確定度urel(f)所構成，故

3.5計算擴展不確定度(U) 按95%置信概率，取包含因子k=2，則U95=0.94%×2=1.88%。

3.6測量不確定度報告 本次實驗單硝酸異山梨酯滴丸的含量為：(101.64±1.88)%。

4 討論

從以上數(shù)據(jù)可以看出，供試品的含量均勻度產(chǎn)生的不確定度所占比重較大，其次為對照品稱量，在計算中加入含量均勻度系數(shù)f，其作用是將樣品本身含量的不均勻性所產(chǎn)生的不確定度帶入公式，而與計算結果無關，故設其值為1。因此，在實際操作中，我們應將供試品充分研勻，以保證取樣的均勻性，還可適當加大對照品的稱樣量來減少由此帶來的不確定度。本次實驗數(shù)學模型合理，結果可靠，可為同類方法測量不確定度評定提供一種參考思路和模式。

1 曹立全.注射用頭孢地嗪鈉含量測定的不確定度分析[J].天津藥學，2011，23(1)：9-10

2 中國合格評定國家認可委員會.CNASGL06化學分析中不確定度的評估指南[M].北京:中國計量出版社，2007：7-8

2013-12-24

R927.11

A

1006-5687(2014)04-0004-03