鄭 玲， 吳玉杰， 趙永鋒， 李麗華， 馬燕娟

(廣西出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣西南寧530021)

β-興奮劑(β-agonist)，俗稱瘦肉精，在化學(xué)上屬于苯乙胺類藥物，一般具有含苯乙醇胺的母體結(jié)構(gòu)。最早用于1988年，主要用于防治人、畜的支氣管哮喘和支氣管痙攣。這些藥物高劑量添加在飼料中，可以選擇性地作用于腎上腺素，導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)的脂肪分解代謝增強(qiáng)，增加蛋白質(zhì)的合成，顯著提高胴體瘦肉率。但如果長(zhǎng)期食用含有大量β-興奮劑殘留的動(dòng)物組織，會(huì)對(duì)人體健康造成很大傷害，包括中毒、引起惡性腫瘤，甚至致人死亡［1，2］等。農(nóng)業(yè)部于2002年2月發(fā)布的176號(hào)公告［3］《禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用的藥物品種目錄》，其中就將克侖特羅、萊克多巴胺、西馬特羅等列為違禁藥物。之后，β-興奮劑類藥物一直是國(guó)家相關(guān)監(jiān)管部門的重點(diǎn)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目之一。由于多年來對(duì)禁用藥物的嚴(yán)厲監(jiān)管，犯罪分子轉(zhuǎn)而添加同類替代藥物，比如:班布特羅、噴布特羅、苯乙醇胺A等。β-興奮劑的濫用嚴(yán)重威脅著人們的身體健康，農(nóng)業(yè)部于2010年12月再次發(fā)文(農(nóng)業(yè)部公告第1519號(hào)［4］)，禁止在飼料和動(dòng)物飲水中使用班布特羅、齊帕特羅、氯丙那林、馬布特羅、阿福特羅、溴布特羅、噴布特羅、苯乙醇胺A等物質(zhì)。因此，建立多組分的同時(shí)測(cè)定方法，在實(shí)際監(jiān)督和執(zhí)法工作中對(duì)飼料進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)具有重要的意義。

QuEChERS 方法［5，6］利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用吸附雜質(zhì)，從而達(dá)到除雜、凈化的目的。因具有快速(quick)、簡(jiǎn)單(easy)、廉價(jià)(cheap)、有效(effective)、可靠(rugged)和安全(safe)的特點(diǎn)而得名。此方法一經(jīng)問世就受到各國(guó)農(nóng)藥殘留分析者的普遍關(guān)注，發(fā)展十分迅速，現(xiàn)已成功地用于多種食品中多種農(nóng)藥殘留的分析［7-12］。QuEChERS方法很靈活，可根據(jù)分析物、基質(zhì)、儀器和分析者的偏好對(duì)凈化劑、鹽量、水含量和吸附劑等做改進(jìn)，改進(jìn)的方法也適用于含中等或高脂的食物。因此，近年來該技術(shù)也開始應(yīng)用于獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域［13-15］。

有關(guān)β-興奮劑的分析測(cè)定方法涉及液相色譜法［16］、(氣相、液相)色譜-質(zhì)譜法［17-19］、酶聯(lián)免疫吸附法［20］等。實(shí)際工作中，多采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行確證，因?yàn)榇朔梢酝瑫r(shí)滿足高靈敏度、高選擇性的定性定量要求。但在已報(bào)道的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法中，前處理方法多為固相萃取方法，鮮有QuEChERS方法在飼料中β-興奮劑類違禁藥物檢測(cè)中的應(yīng)用報(bào)道。目前已發(fā)布的飼料中β-興奮劑類違禁藥物的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)［21，22］及報(bào)道的測(cè)定方法［23］使用的也是固相萃取法。本文建立了QuEChERS結(jié)合HPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定飼料中18種β-興奮劑的方法，為飼料中β-興奮劑類違禁藥物的監(jiān)控提供了又一個(gè)快速、有效的方法，有利于提升對(duì)β-興奮劑類違禁藥物的監(jiān)控水平。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:Agilent 1200 RRLC+Agilent 6410B質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源(ESI)(美國(guó)安捷倫科技有限公司);高速離心機(jī):Sigma3-18k(德國(guó)Sigma公司);振蕩器:YAMATO SA300(日本Yamato Scientific Co.Ltd.);超純水器:Milli-Q Reference(美國(guó)Millipore公司)

克侖特羅(clenbuterol)、班布特羅(bambuterol)、馬布特羅(mabuterol)、克侖丙羅(clenproperol)等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度均大于98%，噴布特羅(penbutolol)純度96%，萊克多巴胺(ractopamine)純度97%，購(gòu)自 Dr.Ehrenstorfer GmbH;西馬特羅(cimaterol)、西布特羅(cimbuterol)、氯丙那林(clorprenaline)、溴布特羅(brombuterol)、馬賁特羅(mapenterol)、溴代克倫特羅(bromchlorbuterol)等純度均為99%，購(gòu)自WITEGA Laboratorien Berlin-Adlershof GmbH;苯乙醇胺A(phenylethanolamine A)、妥布特羅(tulobuterol)、利托君(ritodrine)等純度均為98%，齊帕特羅(zilpaterol)純度95%，購(gòu)自Toronto Research Chemicals Inc.;阿福特羅(arformoterol)純度99.9%，購(gòu)自International Laboratory USA;苯氧丙酚胺(isoxsuprine)純度99.5%，購(gòu)自U.S.Pharmacopeia。

C18、PSA 粉末(40 ～63 μm，CNW 公司);甲醇、乙腈、甲酸(色譜純);無水硫酸鈉、氯化鈉(分析純);水為Milli-Q超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取各標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，用甲醇溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，配成濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在-18℃保存。使用時(shí)根據(jù)需要用相應(yīng)的空白樣品基質(zhì)提取液配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 樣品處理

稱取樣品2 g(精確至0.01 g)，加水10 mL，渦旋30 s，超聲5 min。加入20 mL乙腈(含4%(v/v)氨水)、6 g無水硫酸鈉、2 g氯化鈉、渦旋混勻后振蕩20 min，于4 000 r/min下離心10 min，取2 mL上層清液于凈化管中(已加入25 mg C18和50 mg PSA)，渦旋2 min，于10 000 r/min下離心10 min，取1 mL凈化液于45℃氮?dú)獯蹈桑? mL流動(dòng)相(甲醇-0.1%甲酸水溶液(1∶9，v/v))溶解，LCMS/MS測(cè)定。

1.4 HPLC-MS/MS 條件

1.4.1 HPLC 條件

色譜柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(50 mm×4.6 mm，1.8 μm)。流動(dòng)相:A 為甲醇，B 為0.1%甲酸水溶液。梯度程序:0～1 min，10%A;1～3 min，10%A～40%A;3～5 min，40%A～70%A;5～7 min，70%A～90%A;7～10 min，90%A;10～11 min，90%A～10%A;11～15 min，10%A。流速:0.4 mL/min;柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子源:ESI;掃描方式:正離子掃描;檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);毛細(xì)管電壓:4 000 V;霧化氣溫度:350℃;霧化氣流速:12 L/min;霧化氣壓力:310.05 kPa(45 psi)。MRM監(jiān)測(cè)模式下的參數(shù)見表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取試劑的優(yōu)化

應(yīng)用QuEChERS方法進(jìn)行獸藥殘留測(cè)定時(shí)，乙腈或酸化乙腈是常用的提取溶劑。文獻(xiàn)［13］顯示，添加4%氨水的乙腈能提高β-興奮劑的提取率，因此，本實(shí)驗(yàn)比較了乙腈、2%(v/v)氨水乙腈、4%(v/v)氨水乙腈、2%(v/v)乙酸乙腈、5%(v/v)乙酸乙腈的提取效果。結(jié)果顯示，用4%(v/v)氨水乙腈提取，90%的目標(biāo)化合物回收率在85%～115%范圍內(nèi)，結(jié)果優(yōu)于其他的提取試劑。部分待測(cè)物，如克侖特羅、馬布特羅、溴代克侖特羅等，用以上幾種試劑提取，回收率無明顯差異;而西馬特羅、西布特羅、利托君等，在堿性條件下提取，回收率明顯高于中性及酸性條件。尤其是齊帕特羅，用4%氨水乙腈提取的回收率高于95%，而在中性和酸性條件下提取的回收率不足50%。原因可能是堿性條件能有效抑制這些化合物的離子化，從而增加其在有機(jī)相中的分配比例。因此本實(shí)驗(yàn)選擇4%氨水乙腈為提取溶劑。

表1 18種分析物的MRM參數(shù)Table 1 MRM parameters of the 18 analytes

2.2 凈化吸附劑的優(yōu)化

在QuEChERS凈化方法中，PSA、C18及石墨化炭黑(GCB)是常用的吸附劑。PSA可去除提取液中的脂類和糖類物質(zhì)，C18具有良好的除脂能力，GCB通常用于除去植物提取液中的色素成分，但對(duì)含苯環(huán)官能團(tuán)的化合物有較強(qiáng)的吸附作用［16］。飼料中含有脂類、蛋白(在乙腈提取時(shí)已被沉淀)、糖類等干擾組分，而β-興奮劑類一般具有苯乙醇胺的母體結(jié)構(gòu)，故本研究只選取PSA和C18作為凈化吸附劑進(jìn)行優(yōu)化。在同一加標(biāo)濃度的樣品提取液中，分別加入6個(gè)不同組合的PSA和C18(1:25 mg C18;2:50 mg C18;3:75 mg C18;4:25 mg C18+50 mg PSA;5:25 mg C18+100 mg PSA;6:50 mg C18+50 mg PSA)吸附劑凈化，結(jié)果如圖1所示。由圖1可以看出，各待測(cè)物在采用組合4(C1825 mg+PSA 50 mg)凈化時(shí)有較好的回收率，90%的目標(biāo)化合物回收率在90%～111%范圍內(nèi)。且實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，僅使用C18(組合1、2、3)凈化時(shí)，樣品溶液顏色仍較深，吹干后剩余殘?jiān)^多，進(jìn)樣檢測(cè)后，離子源污染較嚴(yán)重。而組合4、5、6的凈化效果均較好。其中采用組合4、6凈化時(shí)，絕大部分待測(cè)物的回收率相當(dāng)，但其中待測(cè)物噴布特羅在組合4的回收率明顯高于組合6。比較6個(gè)組合的回收率可以看出，PSA和C18使用量的增加都會(huì)引起噴布特羅的回收率下降，因此，選擇組合4(即25 mg C18+50 mg PSA)作為凈化劑。

圖1 不同凈化劑組合對(duì)18種待測(cè)物回收率的影響Fig.1 Effects of the usage amount of C18and PSA on recoveries of the 18 compounds

2.3 凈化方式及時(shí)間的選擇

凈化時(shí)采用的方式有兩種，渦旋或振蕩。實(shí)驗(yàn)比較了渦旋1、2 min和振蕩5、10、20 min的凈化效果。結(jié)果顯示，不同振蕩時(shí)間對(duì)回收率和凈化效果無明顯影響，且與渦旋2 min的結(jié)果相當(dāng)。而渦旋1 min的樣品，其響應(yīng)均有不同程度的降低，50%的待測(cè)物響應(yīng)降低20%以上。原因在于吸附時(shí)間過短，雜質(zhì)吸附不完全?？紤]到建立本實(shí)驗(yàn)方法是為了快速前處理，且在實(shí)驗(yàn)室也可實(shí)現(xiàn)批量樣品同時(shí)渦旋，因此選擇渦旋2 min為凈化條件。

2.4 基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)及消除

基質(zhì)效應(yīng)是指由于基質(zhì)成分和目標(biāo)化合物在電噴霧離子源進(jìn)行離子化時(shí)相互競(jìng)爭(zhēng)而導(dǎo)致目標(biāo)化合物的信號(hào)強(qiáng)度有不同程度的增強(qiáng)或減弱?；|(zhì)效應(yīng)包括基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)和基質(zhì)抑制效應(yīng)。盡管樣品經(jīng)過乙腈沉淀蛋白、分散固相萃取后取得了良好的凈化效果，但仍無法完全消除基質(zhì)效應(yīng)，而基質(zhì)效應(yīng)的存在會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。因此，在建立LC-MS/MS檢測(cè)方法時(shí)應(yīng)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并采取措施進(jìn)行消除，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠?；|(zhì)效應(yīng)可采用(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液所做曲線的斜率/無基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液所做曲線的斜率-1)×100%進(jìn)行評(píng)價(jià)［24］，負(fù)值表示存在基質(zhì)抑制效應(yīng)，正值表示存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，絕對(duì)值越大則基質(zhì)效應(yīng)越強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)18種待測(cè)物的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了評(píng)價(jià)(見表2)，可以看出，萊克多巴胺的測(cè)定基本不受基質(zhì)影響，基質(zhì)對(duì)班布特羅的測(cè)定有增強(qiáng)效應(yīng)，其余化合物均存在一定的抑制效應(yīng)。其中，除氯丙那林和妥布特羅的抑制效應(yīng)大于25%外，其余化合物的抑制效應(yīng)均小于15%。這也可在一定程度上說明本實(shí)驗(yàn)所建立的凈化方法具有較好的凈化效果。

可使用同位素內(nèi)標(biāo)［25，26］(理化性質(zhì)與目標(biāo)物幾乎一致)或配制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液(為標(biāo)準(zhǔn)溶液提供與樣品溶液相似的離子化環(huán)境)的方法消除基質(zhì)效應(yīng)的影響。同位素內(nèi)標(biāo)一般都很昂貴，且已經(jīng)商品化的同位素內(nèi)標(biāo)種類也非常有限，在已報(bào)道的使用 LC-MS/MS 的多組分殘留測(cè)定方法［14，15］中，大多采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量。本方法采用配制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法很好地消除了基質(zhì)影響，完全能滿足測(cè)定的要求。

表2 18種化合物的基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)Table 2 Evaluation of matrix effects of the 18 compounds

2.5 質(zhì)譜條件的優(yōu)化與質(zhì)譜定性

根據(jù)待測(cè)物的性質(zhì)，分別配制1 mg/L的各種標(biāo)準(zhǔn)溶液，在ESI正離子模式下分別進(jìn)行質(zhì)譜條件優(yōu)化。第一步進(jìn)行母離子掃描，確定母離子，并優(yōu)化得到源內(nèi)碎裂電壓，然后在選定的源內(nèi)碎裂電壓條件下，對(duì)選定的母離子進(jìn)行子離子掃描，選取豐度相對(duì)最強(qiáng)的子離子為定量離子，其次為定性離子，并分別對(duì)子離子的碰撞能進(jìn)行優(yōu)化。最后，在MRM模式下優(yōu)化了霧化氣溫度、霧化氣流速及壓力。優(yōu)化的質(zhì)譜參數(shù)見表1及1.4.2節(jié)。

2.6 線性范圍、檢出限、定量限、回收率與精密度

用空白樣品基質(zhì)提取液配制 5、10、20、50、100、200 μg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下分離檢測(cè)，以質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，以峰面積(y)為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得各目標(biāo)化合物的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)(r2)(見表3)。結(jié)果顯示，18種待測(cè)物的r2為0.991 2～0.999 5，表明各目標(biāo)化合物在5～200 μg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

在陰性飼料樣品中添加不同濃度的待測(cè)物，按本研究建立的方法進(jìn)行檢測(cè)，以信噪比≥10確定各化合物的定量限均為0.05 mg/kg，以信噪比≥3確定各化合物的檢出限均為0.015 mg/kg。陰性飼料樣品添加0.05 mg/kg待測(cè)物的譜圖略。

取陰性飼料樣品，分別添加3個(gè)濃度水平的18種待測(cè)化合物，每個(gè)水平測(cè)定6份平行樣品，考察方法的回收率和精密度。結(jié)果見表4?？梢钥闯?，各化合物在3個(gè)加標(biāo)水平的平均回收率為78.4%～107.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.5% ～12.3%。將該方法用于豬配合飼料、雞預(yù)混料、雞濃縮料等不同飼料樣品的檢測(cè)，加標(biāo)回收率結(jié)果均一致。

表3 各化合物的線性方程和相關(guān)系數(shù)Table 3 Regression equations and correlation coefficients(r2)of the 18 compounds

表4 陰性飼料樣品中18種β-興奮劑的加標(biāo)回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 4 Recoveries and relative standard deviations(RSDs)of the 18 β-agonists spiked in a blank sample(n=6)

2.7 實(shí)際樣品測(cè)定

應(yīng)用本研究建立的方法對(duì)30個(gè)不同廠家的雞、豬飼料樣品進(jìn)行了18種β-興奮劑的檢測(cè)，結(jié)果表明，所有飼料樣品中均未發(fā)現(xiàn)這18種β-興奮劑。

3 結(jié)論

本文將QuEChERS前處理方法應(yīng)用于飼料中18種β-興奮劑的檢測(cè)，通過對(duì)QuEChERS前處理方法及儀器條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了定性、定量測(cè)定飼料中18種β-興奮劑的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。該方法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，對(duì)飼料基質(zhì)凈化效果好，可用于飼料中多種β-興奮劑類藥物的快速篩查和確證。

［1］ Guo W，Yang L J，Shi W C，et al.Chinese Journal of Analysis Laboratory(郭偉，楊麗君，時(shí)文春，等.分析試驗(yàn)室)，2010，29(4):92

［2］ Teng N Y，Liu X H，He S H，et al.Chinese Journal of Health Laboratory Technology(滕南雁，劉向紅，何頌華，等.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志)，2011，21(7):1617

［3］ Ministry of Agriculture.No.176 Bulletin of the Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China(農(nóng)業(yè)部. 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第176號(hào)).［2002-02-09］.http://www.moa.gov.cn/zwllm/tzgg/gg/201104/t20110422_1976307.htm

［4］ Ministry of Agriculture.No.1519 Bulletin of the Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China(農(nóng)業(yè)部. 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第1519號(hào)).［2010-12-27］.http://www.moa.gov.cn/zwllm/tzgg/gg/201104/t20110422_1976294.htm

［5］ Liu X G，Xu J，Dong F S，et al.Anal Bioanal Chem，2011，401(3):1051

［6］ Wang J，Chow W，Cheung W.J Agric Food Chem，2011，59:8589

［7］ Xu J，Chen J，Ye H Y，et al.Journal of Instrumental Analysis(徐娟，陳捷，葉弘毅，等.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2011，30(9):990

［8］ Xu J，Chen J，Wang L，et al.Journal of Instrumental Analysis(徐娟，陳捷，王嵐，等.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2013，32(3):293

［9］ Zhang Z Y，Gong Y，Shan W L，et al.Chinese Journal of Chromatography(張志勇，龔勇，單煒力，等.色譜)，2012，30(1):91

［10］ Wang L Z，Zhou Y，Chen Y，et al.Chinese Journal of Chromatography(王連珠，周昱，陳泳，等.色譜)，2012，30(2):146

［11］ Sung W L，Jeong H C，Soon K C，et al.J Chromatogr A，2011，1218:4366

［12］ Ondrej L，Jana U，Jan P，et al.J Chromatogr A，2010，1217:648

［13］ Lan F，Zhang Y，Yue Z F，et al.Journal of Instrumental Analysis(藍(lán)方，張毅，岳振峰，等.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2012，31(12):1471

［14］ Luo H T，Huang X L，Wu H Q，et al.Journal of Instrumental Analysis(羅輝泰，黃曉蘭，吳惠勤，等.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2011，30(12):1329

［15］ Bu M N，Shi Z H，Kang J，et al.Journal of Instrumental Analysis(卜明楠，石志紅，康健，等.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2012，31(5):552

［16］ Wang L，Li Y Q，Zhou Y K.Chinese Journal of Analysis Laboratory(王煉，黎源倩，周運(yùn)柯.分析試驗(yàn)室)，2009，28(3):78

［17］ Wang P L，F(xiàn)an L，Su X O，et al.Chinese Journal of Analytical Chemistry(王培龍，范理，蘇曉鷗，等.分析化學(xué))，2012，40(3):470

［18］ Lu Y F，Xu L J，Wang H，et al.Journal of Chinese Mass Spectrometry Society(盧艷芬，徐麗君，王輝，等.質(zhì)譜學(xué)報(bào))，2012，33(5):280

［19］ Cai Q R，Wu J S，Qian Z J，et al.Chinese Journal of Chromatography(蔡勤仁，吳潔珊，錢振杰，等.色譜)，2013，31(3):200

［20］ Wan Y P，Liu N，Tao G C，et al.Journal of Henan Agricultural Science(萬宇平，劉寧，陶光燦，等.河南農(nóng)業(yè)科學(xué))，2013，42(2):132

［21］ No.1029-1-2011 Bulletin of the Ministry of Agriculture，National Standards of the People’s Republic of China(農(nóng)業(yè)部1029號(hào)公告-1-2011，中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn))

［22］ No.1486-1-2010 Bulletin of the Ministry of Agriculture，National Standards of the People’s Republic of China(農(nóng)業(yè)部1486號(hào)公告-1-2010，中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn))

［23］ Li D N，Yan F，Zhang W G，et al.Feed Research(李丹妮，嚴(yán)鳳，張文剛，等.飼料研究)，2011(12):43

［24］ Tso J，Aga D S.J Chromatogr A，2010，1217:4784

［25］ Liu Y T，Ai X H，Yang H.Journal of Instrumental Analysis(劉永濤，艾曉輝，楊紅.分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2011，30(6):640

［26］ Zheng L，Wu Y J，Li Y，et al.Chinese Journal of Chromatography(鄭玲，吳玉杰，李湧，等.色譜)，2012，30(7):660