張泳 王建華 李迎春

PTTG和VEGF在肺癌組織中的表達(dá)及其意義

張泳 王建華 李迎春

目的 探討垂體瘤轉(zhuǎn)化基因（pituitary tumor transforming gene,PTTG）與血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在肺癌組織中的表達(dá)及其意義。方法 采用免疫組化SP法檢測PTTG與VEGF在人肺癌組織中表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果 PTTG與VEGF在人肺癌組織中的表達(dá)率分別為76.67%(46/60)和91.67%(55/60)明顯高于其在癌旁組織中的表達(dá),且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PTTG與VEGF在肺癌組織中的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)，與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PTTG與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論P(yáng)TTG在肺癌組織中的表達(dá)可能與血管生成相關(guān)，有望成為新的肺癌標(biāo)志物

肺癌；PTTG；VEGF；分子標(biāo)志物

肺癌是當(dāng)今世界上對(duì)人類健康與生命危害最大的惡性腫瘤之一,許多國家和地區(qū)肺癌的發(fā)病率和死亡率居高不下,今后30年也將成為中國居民的主要死亡原因[1]。目前,肺癌患者的5年生存率為10%[2],非小細(xì)胞肺癌早期確診手術(shù)切除率低,對(duì)放化療均不太敏感,因此針對(duì)該腫瘤的生物學(xué)和基因療法尤為重要。研究PTTG和VEGF在肺癌中的表達(dá)對(duì)于進(jìn)一步了解非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移機(jī)制,探討新的有效治療方法具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年1月～2012 年12月陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的行手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌患者60例（男47例,女13例）,年齡39～76歲,平均（58.9±3.1）歲。術(shù)前均未作化療,放療或其他免疫治療。另取同期手術(shù)切除的距離病灶3cm的正常肺組織36例作為對(duì)照。按照AJCC和UICC分期委員會(huì)1997年公布修訂的分期標(biāo)準(zhǔn),Ⅰ期20例,Ⅱ期17例,Ⅲ期15例,Ⅳ期8 例；鱗癌33例,腺癌22例,大細(xì)胞癌5例；根據(jù)有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組35例,陰性組25例。

1.2 方法與材料 采用免疫組化SP法,嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。以PBS替代一抗作陰性對(duì)照。枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）微波抗原修復(fù)。PTTG抗體稀釋度1∶200,VEGF抗體稀釋度1∶100,4℃冰箱過夜。DAB 室溫下顯色1 min。蘇木素復(fù)染1min。進(jìn)而脫水、透明、封片。

1.3 結(jié)果判定 根據(jù)半定量積分方法每張切片在高倍顯微鏡下選定5個(gè)視野,每個(gè)視野不小于1000個(gè)細(xì)胞,首先計(jì)算陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù),＜5%記為0分,5%～24%為1分,25%～49%為2分,50%～74%為3分,75%～100%為4分；以染色強(qiáng)度進(jìn)行打分,無黃色記為0分,黃色為1分,黃褐色記為2分,將2次打分相乘,記為總分,為便于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,0～3分為陰性,4～8分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理,組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法,相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTTG與VEGF在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá) PTTG與VEGF均以散在或密集方式集中在細(xì)胞質(zhì),PTTG在60例非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)率為76.67%(46/60),而VEGF的陽性表達(dá)為91.67%(55/60),而PTTG與VEGF在癌旁組織中的表達(dá)分別為27.7%(10/36)和36.1%(13/36)明顯高于其在癌旁組織中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05,見表1、圖1）。

圖1 A：PTTG在肺癌組織中的表達(dá)；B：VEGF在肺癌組織中的表達(dá)；C：陰性對(duì)照

表1 PTTG與VEGF在人非小細(xì)胞肺癌組織以及癌旁組織中的表達(dá)[n(%)]

2.2 PTTG與VEGF的表達(dá)與臨床病例參數(shù)間的關(guān)系PTTG和VEGF蛋白表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤大小及分化程度無關(guān)；與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05,見表2）。

2.3 PTTG與VEGF蛋白表達(dá)相關(guān)性研究 60例非小細(xì)胞肺癌組織中PTTG與VEGF表達(dá)同時(shí)升高的有44例, Spearman相關(guān)分析顯示兩者表達(dá)呈正顯著相關(guān)（r=-5.337, P=0.036）。

3 討論

PTTG是由LinPei[3]等從鼠垂體腺瘤中克隆出的一個(gè)新的癌基因,在大多數(shù)惡性腫瘤中有高表達(dá),與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。人垂體瘤轉(zhuǎn)化基因至少有3個(gè)亞型,hPTTG 1定位于5號(hào)染色體長臂5q 33區(qū),有4個(gè)內(nèi)含子,5個(gè)外顯子,基因全長10 kb以上[5]。hPTTG 2定位于染色體長臂4q 12,與hPTTG 1的核苷酸有94%的同源性,兩者均在正常人體組織中有表達(dá),但腫瘤中主要表達(dá)為hPTTG 1,hPTTG 3尚無明確定位[6]。由于PTTG表達(dá)蛋白與其他蛋白缺乏同源性,PTTG作用的具體機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。現(xiàn)有研究表明PTTG可以通過以下途徑起作用：誘發(fā)P 53依賴性細(xì)胞凋亡,在P 53缺失的情況下,抑制細(xì)胞的凋亡,并誘導(dǎo)非整倍體細(xì)胞的產(chǎn)生[7]；PTTG可編碼安全子蛋白EAPI/PTTG,安全子蛋白EAPI/PTTG與ESPI結(jié)合,從而抑制正常姐妹染色單體的分離,形成非整倍體；PTTG與bFGF存在相互的正反饋調(diào)節(jié),PTTG編碼蛋白有兩個(gè)PXXP區(qū),能與SH 3結(jié)合,從而激活一系列的信號(hào)傳導(dǎo)。有文獻(xiàn)表明PTTG同垂體瘤[8]、結(jié)直腸癌[9]、甲狀腺癌[10]、胃癌[11],食管鱗癌[12]的浸潤與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在肺癌中的研究國內(nèi)較少見。區(qū)近年來國內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)提示PTTG在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào),它具有抑制染色體分離和體外快速成瘤作用。PTTG基因上調(diào)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。已有研究證實(shí)肺癌中PTTG基因高表達(dá)[13],與肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

表2 PTTG與VEGF的表達(dá)與臨床病例參數(shù)之間的關(guān)系

VEGF是由Ferrara等[14]首先從牛垂體濾泡星狀細(xì)胞體外培養(yǎng)液中純化出來的,VEGF是迄今發(fā)現(xiàn)最重要的血管生成因子之一。人體細(xì)胞分泌4種VEGF,分別由206、189、165或121個(gè)氨基酸殘基組成,其中VEGF 121和VEGF 165以可溶性方式分泌,另外兩種VEGF 是以與細(xì)胞表達(dá)的蛋白多糖結(jié)合的形式存在。內(nèi)皮細(xì)胞膜上可以檢出兩種VEGF高親和力的酪氨酸激酶受體,即VEGFR 1/flt 1和VEG 2FR 2/KDR/flk 1,這兩種受體主要分布在內(nèi)皮細(xì)胞上,其它少數(shù)細(xì)胞如造血細(xì)胞、單核細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞也有少量表達(dá),但只有內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)VEGF有應(yīng)答反應(yīng)。VEGF與其受體結(jié)合后,可特異性促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、參與血管形成、增加血管通透性及保護(hù)受損神經(jīng)元等,不僅在胚胎發(fā)育、傷口愈合、炎癥、腫瘤等多種生理及病理過程中發(fā)揮重要作用,而且參與缺血性腦血管病的損傷及抗損傷過程。VEGF具有增加微血管通透性、促進(jìn)不同來源的內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖和血管構(gòu)建、促使內(nèi)皮細(xì)胞遷移等多種作用。大多數(shù)腫瘤細(xì)胞表達(dá)高水平的VEGF,且其表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)[15]。近年研究發(fā)現(xiàn)在體外培養(yǎng)的肺癌細(xì)胞及人體肺癌組織中均有VEGF的高表達(dá)。其可能在促進(jìn)新生血管的形成并促進(jìn)肺癌早期的浸潤和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

目前,對(duì)于腫瘤中表達(dá)PTTG和VEGF之間的相關(guān)性仍存在爭議。Hunter等[16]研究認(rèn)為,盡管PTTG確實(shí)存在誘導(dǎo)血管生成的作用,但未必是通過VEGF通路的上調(diào)來實(shí)現(xiàn)的,兩種基因表達(dá)不存在關(guān)聯(lián)性。而Kim DS等[17]研究發(fā)現(xiàn),PTTG可通過上調(diào)VEGF和KDR的表達(dá),從而對(duì)于甲狀腺癌的進(jìn)展起關(guān)鍵作用。

綜上所述,人非小細(xì)胞肺癌組織中PTTG與VEGF的表達(dá)明顯高于其癌旁組織,且與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否,以及TNM分期密切相關(guān),提示VEGF在肺癌的進(jìn)展與血管生成中可能發(fā)揮著重要的作用,但其具體機(jī)制,還有待進(jìn)一步探討。

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Objective To explorer PTTG and VEGF expression in lung cancer tissue and its significance. Methods Using immunohistochemical SP method to detect the PTTG and VEGF expression in human lung cancer tissues and the relationship between the clinical pathological parameters. Results The Expression of PTTG and VEGF in human lung cancer rates were 76.67% (46/60) and 91.67% (55/60) respectively and signif i cantly higher than noncancerous tissue, (P＜0.05) and the difference is statistically signif i cant; PTTG and VEGF expression in lung cancer tissue has nothing to do with the patient's gender, age, tumor size,and is closely related to the TNM stages and lymph node metastasis, (P＜0.05)and the difference is statistically signif i cant; The expression of PTTG and VEGF were positively correlated. Conclusion PTTG expression may be associated with angiogenesis in lung cancer tissue and it is expected to become the new lung cancer markers.

Lung cancer; PTTG; VEGF; Molecular markers

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.24.003

陜西省教育廳項(xiàng)科研項(xiàng)目（2010JK505）

陜西 712000 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院外三科 （張泳 王建華）710054 解放軍第323醫(yī)院護(hù)理部 （李迎春）