陳基耘

(廣東省珠海市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣州珠海 519002)

離子色譜法測(cè)定乳品中硫氰酸鈉含量

陳基耘

(廣東省珠海市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣州珠海 519002)

采用離子色譜法測(cè)定乳品中硫氰酸鈉的含量。樣品用5 mL乙腈沉淀蛋白質(zhì)，上清液過(guò)C18柱凈化，所得的產(chǎn)物采用離子色譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，通過(guò)流動(dòng)相以及前處理方法的改進(jìn)，硫氰酸鈉質(zhì)量濃度在0.10～4.00 mg／L范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性，相關(guān)系數(shù)r2=1，方法的檢出限為0.01 mg／L。在牛奶樣品中加入硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收試驗(yàn)，測(cè)得回收率為95.0%～101.0%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)偏差為1.8%～2.8%(n=7)。該方法操作簡(jiǎn)便，能有效避免假陽(yáng)性的發(fā)生，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，適合于乳品中硫氰酸鈉的檢測(cè)。

離子色譜；乳品；硫氰酸鈉

在GB 2760-2007 《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》出臺(tái)前，硫氰酸鈉(Sodium Thiocyanat)一直被我國(guó)作為生鮮牛乳的保鮮劑，它在牛奶中的主要作用是抑菌，從而達(dá)到保鮮的目的。然而硫氰酸鈉是一種具有毒性的化學(xué)物質(zhì)，即使少量攝入也可能會(huì)對(duì)人體尤其是胎兒、嬰兒的神經(jīng)和智力發(fā)育產(chǎn)生危害［1］。隨著我國(guó)在儲(chǔ)運(yùn)鮮乳技術(shù)方面的發(fā)展以及對(duì)食品安全方面工作力度的加大，保鮮技術(shù)逐步完善，因此GB 2760-2007中硫氰酸鈉作為生鮮牛乳保鮮劑的內(nèi)容已被刪除。另外，2008年衛(wèi)生部發(fā)布了《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單(第一批)》，明確規(guī)定硫氰酸鈉屬于違法添加的非食用物質(zhì)。2009年，衛(wèi)生部發(fā)布《全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項(xiàng)整治抽檢工作指導(dǎo)原則和方案的通知》(以下簡(jiǎn)稱“通知”)，其中推薦了牛奶中硫氰酸鈉的檢測(cè)方法，指定檢驗(yàn)方法1：離子色譜法測(cè)定牛奶中硫氰酸根。

近年來(lái)，文獻(xiàn)報(bào)道的乳品中硫氰酸鈉的檢測(cè)方法主要有分光光度法［2-3］、離子色譜法［4-5］以及液相色譜法［6］，但到目前為止尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)方法。筆者在“通知”指定的檢驗(yàn)方法1的基礎(chǔ)上，改用AS19陰離子交換柱進(jìn)行離子色譜分離，并調(diào)整了流動(dòng)相比例，得到的色譜圖可將復(fù)雜樣品中的干擾離子更有效地分開(kāi)。另外，針對(duì)用乙腈作為沉淀劑凈化部分牛乳樣品時(shí)出現(xiàn)蛋白質(zhì)沉淀不完全的情況，采用了滴加少量乙酸溶液或冷藏試樣溶液的方法進(jìn)行改善，這樣得到的試樣溶液更澄清，更適合于離子色譜進(jìn)樣分析。通過(guò)比較方法調(diào)整前后的離子色譜圖發(fā)現(xiàn)，方法改進(jìn)后簡(jiǎn)便易行，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

離子色譜儀：ICS-1500型，配電導(dǎo)檢測(cè)器，陰離子抑制器，KOH自動(dòng)淋洗液系統(tǒng)，戴安中國(guó)有限公司；

分析天平：HA202M型，0.01 mg，日本A＆D公司；

水相濾膜：0.22 μm，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；

超聲波儀：KJ-50型，無(wú)錫市科潔超聲電子設(shè)備有限公司；

甲醇、乙腈、乙酸乙脂：色譜純，廣州化學(xué)試劑廠；冰乙酸：分析純，廣州化學(xué)試劑廠；

硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品：純度不低于99.99%，美國(guó)Aldrich化學(xué)試劑公司；

乙酸溶液：體積分?jǐn)?shù)1%，吸取冰乙酸1 mL，加水溶解，稀釋至100 mL；

硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：100 mg／L，準(zhǔn)確稱取硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.0100 g，用超純水溶解并定容至100 mL；

實(shí)驗(yàn)用水為超純水(電阻率為18.2 MΩ·cm)。

1.2 離子色譜條件

分析柱：AS19陰離子交換柱(4.0 mm×250 mm)；保護(hù)柱：IonPac AS19柱(4.0 mm×50 mm)；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：25 μL；淋洗系統(tǒng)：KOH溶液自動(dòng)淋洗，流速為1.0 mL／min；抑制器電流：200 mA；外標(biāo)法定量；KOH溶液梯度程序1(“通知”中指定檢測(cè)方法1中KOH溶液梯度程序)：45 mmol／L (0～13 min)→70 mmol／L (13.1～18 min)→45 mmol／L (18.1～23 min)；KOH溶液梯度程序2(本方法KOH溶液梯度程序)：35 mmol／L (0～23 min)→70 mmol／L (23.1～32 min)→35 mmol／L(32.1～40 min)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

計(jì)算機(jī)教學(xué)中多媒體電子教室教學(xué)軟件應(yīng)用尤為重要，對(duì)于學(xué)生更好的了解計(jì)算機(jī)知識(shí)學(xué)習(xí)概念具有一定的實(shí)際幫助，同時(shí)使學(xué)生計(jì)算機(jī)知識(shí)教學(xué)更為有效，提高學(xué)生總體知識(shí)學(xué)習(xí)效益。計(jì)算機(jī)教學(xué)的多媒體電子教室軟件應(yīng)用主體應(yīng)用知識(shí)涵蓋內(nèi)容更為廣泛，使學(xué)生計(jì)算機(jī)知識(shí)體系結(jié)構(gòu)更為完善，幫助學(xué)生實(shí)現(xiàn)對(duì)計(jì)算機(jī)知識(shí)的合理化應(yīng)用，提高學(xué)生計(jì)算機(jī)知識(shí)的實(shí)際操作能力，通過(guò)多媒體電子教室的軟件應(yīng)用，使教師的計(jì)算機(jī)知識(shí)教學(xué)不僅停留在理論知識(shí)方面，在綜合實(shí)踐方面也能夠有效的發(fā)揮出良好的教學(xué)效益

1.3.1 硫氰酸鈉的提取

稱取4 mL液體乳品試樣(固體乳粉試樣稱取1 g，加水稀釋振搖均勻形成4 mL乳品試樣)，加入5 mL乙腈沉淀蛋白，過(guò)濾后取5 mL上清溶液置于50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，得到樣品溶液，備用。

1.3.2 硫氰酸鈉的凈化

將1.3.1中得到的樣品溶液注入C18小柱(使用前用5 mL甲醇和10 mL水活化30 min)，以小于3 mL／min的流速通過(guò)C18小柱，棄去前2 mL濾液，收集10 mL濾液，待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 蛋白質(zhì)沉淀溶液的選擇

牛奶樣品不但成分復(fù)雜，其蛋白質(zhì)和脂肪含量均較高，因此在硫氰酸鈉的檢測(cè)過(guò)程中，樣品的凈化是難點(diǎn)。試驗(yàn)比較了加入乙醇、丙酮、乙腈作為沉淀劑時(shí)對(duì)乳品試樣的沉淀效果。結(jié)果表明，加入乙腈時(shí)沉淀效果較好。另外，部分牛乳樣品在加入5 mL乙腈沉淀蛋白后得到的上清液還有輕微白色，置于4℃冰箱中冷藏1 h或者加入1 mL1%乙酸溶液后得到了更好的沉淀效果。加入1 mL 1%乙酸溶液前后的色譜圖，分別見(jiàn)圖1、圖2。由圖1、圖2可知，乙酸的出峰時(shí)間靠前，少量乙酸的加入，不會(huì)影響硫氰酸根的出峰及計(jì)算。

圖1 未加入乙酸溶液時(shí)的色譜圖

圖2 加入乙酸溶液時(shí)的色譜圖

2.2 淋洗液比例的選擇

由實(shí)驗(yàn)可知，硫氰酸根在AS19柱中的保留時(shí)間較長(zhǎng)，即出峰時(shí)間較晚。淋洗液中KOH濃度的選擇，不僅要調(diào)高濃度使非測(cè)定離子在硫氰酸根出峰前迅速洗脫出來(lái)，又要控制濃度使硫氰酸根和其它離子的出峰時(shí)間有更長(zhǎng)的時(shí)間差，避免其它離子的干擾。

按照1.2中洗脫程序1得到的圖譜見(jiàn)圖3，按照洗脫程序2得到的色譜圖見(jiàn)圖4。比較圖3、圖4可知，洗脫程序1由于洗脫濃度較高，有部分干擾離子和硫氰酸根一起洗脫出來(lái)，造成了檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性；程序2洗脫濃度合適，硫氰酸跟和干擾離子能很好分開(kāi)。

圖3 KOH濃度梯度洗脫程序1得到的色譜圖

圖4 KOH濃度梯度洗脫程序2得到的色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及檢出限

用超純水將硫氰酸鈉逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度為0.10，0.50，1.00，2.00，4.00 mg／L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，依次進(jìn)樣分析。以色譜峰面積(y)為縱坐標(biāo)，以硫氰酸根的質(zhì)量濃度c(mg／L)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為y=1.228 1c-0.005，線性相關(guān)系數(shù)r2=1，線性范圍為0.10～4.00 mg／L。

向空白樣品中添加硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)儀器給出的信噪比參數(shù)，以3倍信噪比(S／N=3)確定方法的檢出限，硫氰酸根的檢出限為0.01 mg／L。

2.4 精密度及回收試驗(yàn)

在同一純牛奶樣品中加入硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，加標(biāo)濃度分別為0.20，0.50，2.00 mg／L，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，回收率在95.0%～101.0%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～2.8%。由此可見(jiàn)，該法的精密度和準(zhǔn)確度較高，能有效地對(duì)牛乳中硫氰酸鈉含量進(jìn)行監(jiān)督檢測(cè)。

2.5 樣品測(cè)定

采用所建方法對(duì)珠海市售的5款牛奶樣品進(jìn)行硫氰酸鈉含量的檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，硫氰酸鈉含量分布在3.5～6.2 mg／L之間。根據(jù)研究表明，牛奶中硫氰酸鈉的濃度要達(dá)到15 mg／kg才能有效殺菌［7］。表2中檢測(cè)數(shù)據(jù)均明顯小于該值，所以可以排除人為添加的可能。由于硫氰酸鹽廣泛存在于動(dòng)物組織和分泌物中(如乳腺、腎臟等)，因此所測(cè)得的微量硫氰酸鈉，可能是在自然條件下存在的結(jié)果［7］。

表1 回收試驗(yàn)結(jié)果(n=7)

表2 牛乳樣品中硫氰酸鈉含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

利用離子色譜法對(duì)硫氰酸鈉進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)樣品前處理方法的改善，降低了復(fù)雜樣品中其它離子對(duì)待測(cè)離子的干擾，從而降低了硫氰酸鈉檢測(cè)中假陽(yáng)性情況的發(fā)生，可以有效地對(duì)牛乳中硫氰酸鈉含量進(jìn)行監(jiān)督檢測(cè)。

［1］顧欣，黃士新，李丹妮，等.乳中硫氰酸鹽對(duì)人類健康的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估［J］.中國(guó)獸藥雜志，2010，44(9): 45-49.

［2］蘇婷婷，續(xù)鶯，顧洪濤.乳制品中硫氰酸鈉含量的測(cè)定——分光光度法［J］.中國(guó)乳業(yè)，2013，134(2): 48-49.

［3］張遴，王文瑞，蔡硯，等.分光光度法測(cè)定嬰幼兒食品中硫氰酸鈉［J］.理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè)，2013，49(6): 717-719.

［4］楊一剛.離子色譜測(cè)定乳制品中硫氰酸鈉含量［J］.食品工程，2012，123(2): 55-57.

［5］李瀅倩，王瀟，王巖，等.離子色譜法測(cè)定液體乳中硫氰酸根［J］.輕工科技，2014，182(1): 3-4.

［6］董云香.牛奶中硫氰酸鈉的檢測(cè)方法研究［J］.輕工科技，2012，160(3): 9-21.

［7］李晰暉，趙越，任國(guó)譜.原料乳中硫氰酸鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)的調(diào)查與分析［J］.食品工業(yè)，2013，34(11): 248-251.

Determination of Sodium Thiocyanate Content in Milk by Ion Chromatography

Chen Jiyun
(Guangdong Zhuhai Supervision Testing Institute of Quality and Metrology， Zhuhai 519002， China)

Ion chromatography was applied to the determination of sodium thiocyanate content in milk. The sample was purified by protein precipitation and the C18extraction column. Then the product was tested by ion chromatography and the concentration was quantified by external standard method. Through the improment of mobile phase and pretreatment method，the concentration of sodium thiocyanate was linear with peak area in the range of 0.10-4.00 mg／L， and the correlation coefficient was r2=1. The detection limit determination of the method was 0.01 mg／L. Test recovery experiment was made by standard addition method，and the recovery was 95.0%-101.0%. The relative standard deviation of the determination results was 1.8%-2.8% (n=7). This method has the advantages of simple operation， it can effectively avoid the occurrence of false positive so it is suitable for detection of sodium thiocyanate in milk.

ion chromatography; milk; sodium thiocyanat

O657.3

A

1008-6145(2014)04-0042-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2014.04.012

聯(lián)系人：陳基耘；E-mail: jacquichen@126.com

2014-04-29