熱比姑麗·伊斯拉木，尤力都孜·買買提，伊力亞爾·斯瑪依，斯拉甫·艾白

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，新疆，烏魯木齊 830054；2. 新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)實驗室，新疆，烏魯木齊 830049；3.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆，烏魯木齊 830049)

研究報告

異常黏液質(zhì)成熟劑(Munziq Balgam)對銀屑病小鼠模型的作用

熱比姑麗·伊斯拉木1,2,3，尤力都孜·買買提2,3，伊力亞爾·斯瑪依2,3，斯拉甫·艾白1,2,3

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，新疆，烏魯木齊 830054；2. 新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)實驗室，新疆，烏魯木齊 830049；3.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆，烏魯木齊 830049)

目的 觀測維吾爾醫(yī)經(jīng)典方劑異常黏液質(zhì)成熟劑(Munziq Balgam)對銀屑病小鼠模型的作用。方法 用鹽酸普萘洛爾建立小鼠耳部皮膚銀屑病樣模型，觀察異常黏液質(zhì)成熟劑對小鼠模型體重、脾臟和胸腺指數(shù)、以及該模型病理狀態(tài)影響； ELISA法檢查各組小鼠血清IL-10、IL-17、IL-23水平；同時，觀察對小鼠模型的療效。結(jié)果 異常黏液質(zhì)成熟劑(2、4、8 g/kg劑量)對實驗小鼠一般狀況、體重變化無明顯影響(P>0.05)；8 g/kg劑量能降低小鼠胸腺指數(shù)(P<0.05)；2、4、8 g/kg各劑量組對小鼠血清IL-10、IL-17、IL-23水平無明顯影響(P>0.05)，但促進(jìn)小鼠鼠尾表皮顆粒層細(xì)胞的形成、改善鹽酸普萘洛爾致小鼠耳部皮膚銀屑病樣組織病理變化。結(jié)論 異常黏液質(zhì)成熟劑對實驗性銀屑病有一定的治療作用。

異常黏液質(zhì)成熟劑；實驗性銀屑病；藥效作用；模型，小鼠

維吾爾醫(yī)學(xué)是以實踐經(jīng)驗為主體，以整體治療為特征的醫(yī)學(xué)體系[1，2]，具有良好的臨床療效和獨特的理論內(nèi)涵。維吾爾醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)理論中獨具特色的體液理論認(rèn)為，體液是在肝臟中形成，能被機體所轉(zhuǎn)化，為生命活力給予力量，并適于人體本性的復(fù)雜物質(zhì)的總成。體液不斷生成，又不斷被利用，是人類生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)。機體健康與否，與體液的正常與平衡密切相關(guān)。維吾爾醫(yī)學(xué)認(rèn)為[3]，同一疾病可由不同異常體液導(dǎo)致，但各種異常體液的分布有差異。據(jù)我區(qū)3196例患者異常體液分型及各種疾病的分布情況調(diào)查，異常黏液質(zhì)型(白里海密 海日 臺比依，漢文直譯為非自然黏液質(zhì))銀屑病患病率15.47%。維吾爾醫(yī)學(xué)實踐中對異常體液性疾病的治療，經(jīng)常采用獨具特色的成熟療法和清除療法。維吾爾醫(yī)療方劑異常黏液質(zhì)成熟劑(木尼孜其 白里海密，Munziq Balgam)是成熟療法的經(jīng)典方劑。本文利用實驗性銀屑病小鼠模型，探討維吾爾醫(yī)經(jīng)典方劑異常黏液質(zhì)成熟劑的作用，揭示其科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及實驗環(huán)境

昆明小鼠130只，♀♂各半，SPF級，體質(zhì)量(18～22)g，由新疆實驗動物研究中心提供。實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(新)2011-0001。實驗動物使用許可證號：SYXK(新)2011-0006。

1.2 藥品與試劑

本實驗所用的藥物制劑異常黏液質(zhì)成熟劑(木尼孜其 白里海密，維吾爾語命名為Munziq Balgam)由新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院制劑室(GMP認(rèn)證)提供。陽性對照藥甲氨蝶呤片，由上海信宜藥廠有限公司提供，國藥準(zhǔn)字H31020644，批號：20130403。鹽酸普萘洛爾片(心得安)常州康普藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H32021276，批號：1203004。小鼠白介素-10(IL-10)，國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2009第3400951號；小鼠白介素-17(IL-17)，國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字 2012第3401164號；小鼠白介素-23(IL-23)試劑盒，國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2012第3401163；批號均為：201310，由烏魯木齊西域醫(yī)鳴商貿(mào)有限公司提供。

1.3 主要儀器

TGL-5-A低速大容量離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；Anthos 2010酶標(biāo)儀、Anthos iWO洗板機，鄭州安圖實驗儀器有限公司；DM2500生物顯微鏡，德國萊卡公司；RM2235切片機，德國萊卡公司； KD-BM生物組織自動包埋機，浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司；KD-TS3D生物組織自動脫水機，浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司；KZPG-1A攤片烤片機，天津天利航空機電有限公司。

1.4 小鼠模型的建立和實驗方法

1.4.1 小鼠鼠尾鱗片表皮模型和實驗[4，5]：因小鼠尾部表皮天然缺少顆粒層細(xì)胞，類似銀屑病表皮角化不全病理改變，因而可作為銀屑病角化異常的傳統(tǒng)天然模型。取60只小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d后，小鼠♀♂分別按體重隨機分為5組，即溶媒對照組、陽性對照藥甲氨蝶呤組(1.5 mg/kg劑量)、Munziq Balgam(2、4、8 g/kg劑量)，每組10只，♀♂各半。以0.2 mL/10 g體積，1次/d，灌胃給予相應(yīng)藥物連續(xù)20 d。給藥第21天脫頸法處死小鼠，取鼠尾距離根部3 cm皮膚標(biāo)本，用15%甲醛固定、脫水、石蠟包埋并HE染色后在光鏡下觀察。

1.4.2 對鹽酸普萘洛爾致小鼠耳部皮膚銀屑病樣模型的建立和實驗[6，7]：取70只小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d后，小鼠♀♂分別按體重隨機分為6組，即溶媒對照組、模型組、陽性對照藥甲氨蝶呤組(1.5 mg/kg劑量)、Munziq Balgam(2、4、8 g/kg劑量)，每組10只，♀♂各半。除溶媒對照組外，其余各組用5%心得安乳劑(取鹽酸普蔡洛爾5 g用50%乙醇溶解, 加入月桂氮卓酮作為透皮吸收促進(jìn)劑，加入聚乙烯毗咯烷酮5 g為成膜材料，再加50%乙醇至100 mL，即得)，均勻涂抹于小鼠雙耳背部皮膚，每耳涂抹0.1 mL，早晚各1次，連續(xù)涂抹20 d。造模第21天開始，除模型組小鼠涂抹造模劑外，其余各給藥組小鼠上午涂抹造模劑，下午灌胃給予相應(yīng)藥物，以0.2 mL/10 g體積，1次/d，連續(xù)20 d。給藥第21天，末次給藥2 h后，摘眼球法取血，隨后取脾臟、胸腺及雙側(cè)耳廓。先稱脾臟、胸腺，后與右側(cè)耳廓一起迅速放入低溫冰箱(-80℃)，待測相關(guān)指標(biāo)。左側(cè)耳廓皮膚標(biāo)本，用15%甲醛固定、脫水、石蠟包埋并HE染色后在光鏡下觀察。分離血清，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測小鼠血清IL-10、IL-17、IL-23水平，操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS 17.0統(tǒng)計軟進(jìn)行分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05

2 結(jié)果

2.1 對鹽酸普萘洛爾致小鼠耳部皮膚銀屑病樣模型的作用

2.1.1 一般情況：與溶媒對照組比較，模型組、甲氨蝶呤組、Munziq Balgam(2、4、8 g/kg劑量)小鼠在實驗期間，行為活動、皮毛、糞便、飲食等未見異常。

2.1.2 體重：與溶媒對照組比較，模型組、甲氨蝶呤組、Munziq Balgam(2、4、8 g/kg劑量)小鼠在實驗期間，體重變化沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。(表1，2)。

2.1.3 胸腺、脾臟指數(shù)：與溶媒對照組比較，模型組小鼠胸腺指數(shù)升高(P<0.05)；與模型組比較，甲氨蝶呤組、Munziq Balgam(8 g/kg劑量)組能降低小鼠胸腺指數(shù)(P<0.05)；對脾臟指數(shù)的影響沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(表3)

2.1.4 小鼠血清IL-17、IL-23、IL-10水平：與溶媒對照組比較，模型組小鼠血清IL-10降低，IL-17、IL-23略升高(P>0.05)。與模型組比較，甲氨蝶呤組、Munziq Balgam(2、4、8 g/kg劑量)對小鼠血清IL-10、IL-17、 IL-23水平無明顯影響(P>0.05)(表4)。

表1 造模期間小鼠體重變化Tab.

表2 給藥期間小鼠體重變化Tab.2 Changes of body weight of the mice during the drug ±s，n=10)

注：與溶媒對照組比較，P>0.05 Note. vs. solvent control group,P>0.05

表3 小鼠胸腺、脾臟指數(shù)Tab.

注：與溶媒對照組比較，﹡P<0.05，與模型組比較，▲P<0.05。

Note: vs. solvent control group,﹡P<0.05; vs. model group,▲P<0.05.

表4 小鼠血清IL-17、IL-23、IL-10水平Tab.

注：分別與溶媒對照組、模型組比較，P>0.05。

Note. vs. solvent control group and model group,P>0.05.

2.2 小鼠皮膚組織病理學(xué)變化[8]

2.2.1 銀屑病樣模型小鼠耳朵皮膚組織病理學(xué)變化：溶媒對照組，角質(zhì)層為不全角化，上皮變薄。有顆粒細(xì)胞層，但顆粒不明顯。真皮內(nèi)無炎細(xì)胞浸潤。皮脂腺、毛囊結(jié)構(gòu)清晰。

與溶媒對照組比較，模型組角質(zhì)層增厚，角質(zhì)層內(nèi)有角栓和微小膿腫形成。有顆粒細(xì)胞層，且顆粒明顯。棘層增厚。真皮內(nèi)血管擴張充血，大量炎細(xì)胞浸潤。說明模型成立。與模型組比較，甲氨蝶呤組角質(zhì)層變薄、均勻，角質(zhì)層內(nèi)角栓和微小膿腫明顯減少。有1～2層顆粒細(xì)胞層，且顆粒明顯。棘層變薄3～4層。真皮內(nèi)炎癥明顯減輕。Munziq Balgam(2、4、8 g/kg劑量)能使角質(zhì)層漸變薄，角質(zhì)層內(nèi)微小膿腫逐漸減少；有1～2層顆粒細(xì)胞層，且細(xì)胞內(nèi)顆粒明顯；棘細(xì)胞層變??；真皮層內(nèi)炎細(xì)胞逐漸減少(圖1,見封三)。無明顯劑量規(guī)律性

2.2.2 鼠尾鱗片表皮模型小鼠的組織病理學(xué)變化: 溶媒對照組，無顆粒細(xì)胞層。與溶媒對照組比較，甲氨蝶呤組個別區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)1～2層顆粒細(xì)胞層，但細(xì)胞內(nèi)顆粒不明顯。Munziq Balgam(2、4、8 g/kg劑量)部分區(qū)域出現(xiàn)1～2層顆粒細(xì)胞層，且細(xì)胞內(nèi)顆粒明顯(圖2見封底)。無明顯劑量規(guī)律性。

3 討論

維吾爾醫(yī)學(xué)認(rèn)為，正常黏液質(zhì)體液(白里海密 臺比依)[1-3]是進(jìn)入人體的營養(yǎng)物質(zhì)和體液經(jīng)肝臟吸收改變之后形成的，儲存于人體各個器官中最小部位的白色濃液體，屬性濕寒。由于各種內(nèi)外因素的影響，使黏液質(zhì)發(fā)生變化，就會為相應(yīng)的各種疾病的產(chǎn)生形成內(nèi)部條件。異常黏液質(zhì)(白里海密 海日 臺比依)，系指失去變?yōu)檠汗δ艿酿ひ嘿|(zhì)或黏液質(zhì)成分中未成熟的異常部分。這種異常黏液質(zhì)的增多不但產(chǎn)生一系列疾病，影響血液的補充，而且可引起貧血、慢性炎腫、皮膚疾病等。在維吾爾醫(yī)學(xué)臨床實踐中[1-3]，對異常體液性疾病的治療經(jīng)常采用維吾爾醫(yī)獨具特色的成熟和清除療法，首先給予該體液的成熟劑(木尼孜其，Munziq)，待物質(zhì)成熟的特征出現(xiàn)后，再給予清除異常體液的該類體液的清除劑(木斯黑力，Mushil)，待全身被清理后，再根據(jù)失調(diào)氣質(zhì)引起的疾病癥狀給予專門的治療藥物或補益藥。

本文使用的異常黏液質(zhì)成熟劑(木尼孜其 白里海密，Munziq Balgam)[3]由鐵線蕨、玫瑰花、地錦草等組成，屬性濕熱。按照維吾爾醫(yī)學(xué)臨床治療疾病方法，通過動物實驗的途徑和方法，探討該異常黏液質(zhì)成熟劑的藥效和藥理作用。實驗結(jié)果表明，Munziq Balgam能促進(jìn)小鼠鼠尾表皮顆粒層細(xì)胞的形成；能改善鹽酸普萘洛爾致小鼠耳部皮膚銀屑病樣織病理學(xué)變化，但對小鼠的血液指標(biāo)變化不明顯，結(jié)果提示單獨使用Munziq Balgam 對實驗性銀屑病小鼠模型有一定的改善作用，依據(jù)維吾爾醫(yī)學(xué)的黏液質(zhì)體液理論的臨床實踐，其治療疾病步驟方法包括成熟療法、清除療法，最后給予專門的治療藥物或補益藥療法。本實驗初步證明異常黏液質(zhì)成熟劑對實驗性銀屑病模型小鼠的皮膚組織結(jié)構(gòu)和病理有作用，提示可利用異常黏液質(zhì)成熟劑治療銀屑病，具有應(yīng)用前景。

近幾年維吾爾醫(yī)學(xué)藥學(xué)的基礎(chǔ)理論研究已有了一定的突破，但很多方面尚難以用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的觀點來闡明，如果不從現(xiàn)在給予足夠重視，維吾爾醫(yī)學(xué)藥學(xué)事業(yè)的繼續(xù)發(fā)展將是極為困難的。因此，應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)對維吾爾醫(yī)學(xué)體液理論進(jìn)行研究，揭示其科學(xué)內(nèi)涵具有非常迫切的現(xiàn)實意義。本文的工作為利用現(xiàn)代藥效和藥理研究的方法闡明維吾爾藥學(xué)方劑Munziq Balgam的機理做了有益的嘗試，也為維吾爾醫(yī)學(xué)的黏液質(zhì)體液理論提供了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的參考價值。

[1] 伊沙克江·馬合穆德. 中國醫(yī)學(xué)百科全書-維吾爾醫(yī)學(xué) [M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005:26-28.

[2] 阿不都熱依木·卡德爾·阿塔哥. 中國新疆維吾爾醫(yī)藥學(xué) [M]. 烏魯木齊：新疆人民衛(wèi)生出版社，2013: 100-104.

[3] 哈木拉提·吾甫爾，阿不都熱依木·玉素甫. 維吾爾醫(yī)氣質(zhì)、體液論及其現(xiàn)代研究 [M].烏魯木齊：新疆科學(xué)技術(shù)出版社，2003:75-77.

[4] 孫健, 李東寧, 閻鐵夫, 等. 丹參注射液對對小鼠鼠尾表皮細(xì)胞分化及Th1/ Th2細(xì)胞因子的影響 [J].中國皮膚性病學(xué)雜志, 2013, 27(8):775-777.

[5] 李鵬英，劉紅霞. 健脾解毒湯對小鼠表皮細(xì)胞分化的是研究 [J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志, 2010, 9(1):33-34.

[6] 艾克拜爾·安扎爾, 夏木西努爾·肖蓋提, 熱比姑麗·伊斯拉木, 等. 土大黃對實驗性銀屑病的作用 [J].中藥藥理與臨床, 2012, 28(1):109-111.

[7] 余清宏, 趙瑞芝, 盧傳堅. 銀屑靈優(yōu)化方對銀屑病豚鼠及炎性刺激角質(zhì)形成細(xì)胞增值的影響 [J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2013, 25(5):1531-1533.

[8] 孫建方, 高天文. 皮膚組織病理學(xué) [M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社, 2013. 53-55.

Therapeutic action of a Uyghur medicine Munziq Balgam on the mouse model of psoriasis

Rabigul·Islam1,2,3, Yultuz Mamat2,3, Ilyar.Ismayil2,3, Sirapil Abay1,2,3

(1. Department of Pharmacology, Basic Medical College of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China;2. Laboratory of Traditional Uyghur Medicine Prescription of Xinjiang, Urumqi 830049;3. Institute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine, Urumqi 830049)

Objective To observe the effect of a Uyghur medicine Munziq Balgam on the mouse model of psoriasis. Methods 130 healthy Kunming mice were used in this study. The mouse model of psoriasis was established by applying 5% propranol hydrochloride emulsion to the mouse ear. The tail and ear skin histology was examined using HE staining, and the serum levels of IL-10, IL-17, IL-23 were measured with ELISA. Results The mice of Munziq Balgam treated groups (2, 4, 8 g/kg) did not show obvious abnormalities of general condition and body weight changes (P>0.05). The 8 g/kg Munziq Balgam treated group showed decreased thymus index (P<0.05). The 2, 4, and 8 g/kg Munziq Balgam treated groups showed no significant changes of the serum levels of IL-10, IL-17, and IL-23 (P>0.05). The 2, 4, and 8 g/kg Munziq Balgam treated groups showed promoted formation of epidermis granular layer in the mouse tail skin and improved histology of the ear skin. Conclusions The Uygur medicine Munziq Balgam shows therapeutic effect on experimental mouse models of psoriasis.

Munziq Balgam; Psoriasis; Therapeutic action; Model, mouse

新疆維吾爾自治區(qū)公益性科研院所項目(編號：KY201302)，自治區(qū)衛(wèi)生廳(編號：2007ZMY14)。

熱比姑麗·伊斯拉木(1970-)，女，博士研究生，研究方向：維藥藥理學(xué)。E-mail: rabiya272@126.com。

斯拉甫·艾白(1960-)，男，博士生導(dǎo)師，研究方向：維藥藥理學(xué)。E-mail: aibai@263.net。

R33

A

1671-7856(2014) 08-0024-04

10.3969.j.issn.1671.7856. 2014.008.006

2014-06-30