石磊嶺， 魏鴻雁， 徐曉琴， 夏提古麗·阿不利孜， 賈曉光， 張小龍

(1新疆中藥民族藥研究所， 烏魯木齊 830002； 2新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)院， 烏魯木齊 830000)

駱駝刺(Alhagisparsifoliashap.)為豆科駱駝刺屬(Alhagi)植物，生長(zhǎng)地區(qū)集中，主要分布于北非、地中海、西亞地區(qū)。在我國(guó)主要分布于新疆、內(nèi)蒙古、甘肅、青海等省區(qū)[1-2]。

黃酮類化合物是藥用植物中的主要活性成分之一，其結(jié)構(gòu)類型的多樣性決定了其生物活性的多樣化。研究表明，黃酮類化合物具有抗氧化、抗病毒、抗過(guò)敏、抗菌、抗突變、抗腫瘤、保肝、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、鎮(zhèn)痛、瀉下、保護(hù)心腦血管系統(tǒng)以及殺蟲(chóng)等多種生物活性，且毒副作用較低[3-5]。生長(zhǎng)在不同地域的駱駝刺由于受自身遺傳因素、溫度、土壤等環(huán)境因素的影響，使藥材中有效成分的差異很大。為了能了解新疆不同產(chǎn)地駱駝刺中總黃酮的含量，充分發(fā)揮該物種的藥用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定新疆不同產(chǎn)地駱駝刺地上部位總黃酮的含量，為新藥研究和充分利用駱駝刺藥材資源提供一定的參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1試驗(yàn)儀器BECKMAN DU-7 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司)，EYELA OSB-2100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛(ài)朗儀器有限公司)，Mettler Toledo AB265-S分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，9FZ-25多用粉碎機(jī)(四川簡(jiǎn)陽(yáng)市大地機(jī)械廠)。

1.2材料駱駝刺經(jīng)新疆中藥民族藥研究所王國(guó)平副研究員鑒定為豆科駱駝刺屬(Alhagi)植物駱駝刺(Alhagisparsifoliashap)。將駱駝刺陰干粉碎，在真空干燥器中以60℃干燥至恒重，備用。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 (批號(hào)100080-200707中國(guó)藥品生物制品檢定所) ;無(wú)水乙醇、 石油醚、氫氧化鈉、亞硝酸鈉和硝酸鋁均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1總黃酮的測(cè)定

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)液的配制 精密稱取 120℃干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 7.23 mg，置 50 mL容量瓶中，用 60%乙醇溶解并定容得到濃度為 0.133 8 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、 4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL置于25 mL容量瓶中，分別加60%乙醇溶液至10 mL，依次加入1 mL 5%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置6 min后，加入1 mL 10%硝酸鋁溶液，搖勻，放置6 min后，再加入4%氫氧化鈉溶液4 mL，再加 60%乙醇定容，搖勻，放置15 min后在510 nm處測(cè)定吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度 (mg/mL )為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程Y=12.374X-0.036，結(jié)果蘆丁在0.27～42.81 mg/L范圍內(nèi)呈良好的線形關(guān)系，r2=0.999 7。

2.2方法學(xué)考察

2.2.1 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下方法處理并顯色后，重復(fù)測(cè)定吸光度6次，結(jié)果RSD為1.18%，表明精密度良好。

2.2.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下方法處理并顯色后，重復(fù)測(cè)定吸光度6次，結(jié)果RSD為1.24%，表明重現(xiàn)性良好。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品溶液，照樣品測(cè)定方法操作，每隔10 min測(cè)定吸光度值，連續(xù)60 min，結(jié)果吸光度值基本無(wú)變化，表明樣品在60 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知總黃酮含量的駱駝刺樣品粉末5份，每份1 g，精密稱定，分別加入“2.1.1”項(xiàng)下蘆丁對(duì)照品溶液2、3、4、5、6 mL(每毫升含蘆丁0.133 8 mg)，按“2.1.2”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為100.2%，RSD為1.92%，見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率測(cè)定(n=5)

2.3樣品含量測(cè)定準(zhǔn)確稱取8個(gè)采集地陰干粉碎的駱駝刺莖葉各10 g，用100 mL石油醚連續(xù)回流提取，脫脂除雜，藥渣用100 mL甲醇連續(xù)回流提取，回收溶劑，再用60%乙醇定容至250 mL容量瓶中，依照“2.1.2” 項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，代入回歸方程中計(jì)算總黃酮的含量，并計(jì)算總黃酮的得率,結(jié)果鄯善縣、莎車縣及烏魯木齊縣的駱駝刺中總黃酮含量較高，分別為18.2、16.8、16.6 mg/mL，奇臺(tái)縣最低，為7.3 mg/mL,見(jiàn)表2。

總黃酮含量/%=CVD/W×100%

[式中：C 為總黃酮顯色稀釋后的濃度(mg/mL)，V 為稀釋后的體積，D為樣品的稀釋倍數(shù)，W 為樣品的質(zhì)量。]

3 討論

通過(guò)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定藥材中總黃酮含量常見(jiàn)報(bào)道[6-10]，該方法具有簡(jiǎn)單可靠、重現(xiàn)性好、方法成熟等特點(diǎn)，故本實(shí)驗(yàn)采用該方法測(cè)定總黃酮的含量。

表2 不同產(chǎn)地駱駝刺樣品中總黃酮的含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)收集到的8批不同產(chǎn)地的駱駝刺總黃酮含量測(cè)定結(jié)果得知，鄯善縣、莎車縣、烏魯木齊縣3個(gè)產(chǎn)地駱駝刺總黃酮的含量較高，駱駝刺中總黃酮的含量分別為18.2、16.8 、16.6 mg/g，奇臺(tái)縣駱駝刺中總黃酮含量最低，為7.3 mg/g，可見(jiàn)不同產(chǎn)地的駱駝刺藥材中總黃酮含量相差比較大，因此在用藥時(shí)應(yīng)注意產(chǎn)地與藥材質(zhì)量的關(guān)系。

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