韓 榮， 田 蘭， 吳 迪， 吳桂榮

(新疆醫(yī)科大學， 烏魯木齊 830011)

亞油酸和α-亞麻酸都是營養(yǎng)學明確確定的人體必需脂肪酸，其對人體的健康都有著極其重要的意義。α-亞麻酸具有增強免疫力、抗凝血、抗炎、降血脂、延緩腦細胞衰老等藥理作用[1-4]。亞油酸具有降低血脂、預防心腦血管疾病、抗腫瘤、抗氧化、降低動物和人體膽固醇與甘油三酯、抗動脈粥樣硬化、提高骨骼密度、防治糖尿病等多種重要生理功能的活性[5-7]。隨著生活水平提高，人們開始注重食用油的營養(yǎng)，而亞油酸和α-亞麻酸是食用油中的重要營養(yǎng)成分，是評價食用油營養(yǎng)價值的關鍵指標。本研究以α-亞麻酸甲酯和亞油酸甲酯為指標性成分，采用氣相色譜法[8]測定食用調和油中亞油酸及α-亞麻酸含量,為食用調和油質量控制和評價提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器氮氫空一體機(NHA-500)(北京中惠普技術分析研究所)，氣相色譜儀(GC2010，日本島津)，磁力攪拌油浴鍋(PS-1000，Tokyo，Japan)。

1.2試劑食用植物調和油(新疆烏魯木齊札郎孜生物科技有限公司)，α-亞麻酸甲酯(111624-200602)及亞油酸甲酯(111625-200301)(中國藥品生物制品檢定所)，BF3-CH3OH購自上海阿拉丁公司，氫氧化鈉(西安化學試劑廠)，甲醇(天津市康科德科技有限公司)，正己烷(長沙唐華化工貿易有限公司)，以上試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件[1-2]色譜柱：島津RTX-WAX彈性石英毛細管柱(聚乙二醇涂層)，長度30.0 m，膜厚0.25 μm，內徑0.25 mm。進樣口溫度250℃，檢測器溫度250℃，柱溫控制采用程序升溫，以200℃為起始柱溫，保持4 min，以4℃/min升溫至230℃，保持3 min；控制方法為：線速率，載氣為N2，尾吹流量30 mL/min，氫氣流量40 mL/min，空氣流量400 L/min。采用手動分流進樣，進樣量為1 μL，分流比為90∶1。

2.2溶液的配制

2.2.1 標準儲備液的配制 亞油酸甲酯標準溶液的制備：精密稱量亞油酸甲酯標準品184.5 mg，定容至10 mL，配制成濃度為18.45 mg/mL亞油酸甲酯標準品儲備液。α-亞麻酸甲酯溶液的制備：精密稱量α-亞麻酸甲酯標準品183.8 mg，定容至10 mL，得濃度為18.38 mg/mL的標準品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的配制 精密稱量樣品400 mg，加入0.5 mol/L氫氧化鈉甲醇溶液6 mL, 置入65℃水浴鍋中皂化，同時充入氮氣，8 min后加入15%的BF3-CH3OH溶液7 mL，在65℃水浴中2 min，使其進行甲酯化，再加入正己烷3 mL，煮沸1 min，然后冷卻至室溫，轉移至試管中，加入的飽和NaCl溶液，靜置并定容上層有機層至5 mL，加入無水Na2SO4干燥，取干燥后樣品200 μL，定容至10 mL，進樣1 μL進行氣相色譜分析[7]。

2.3標準曲線的繪制分別準確吸取0.10、0.20、0.40、0.50、1.00、2.00 mL的α-亞麻酸甲酯和亞油酸甲酯儲備液,置于10 mL容量瓶中，以正己烷定容，得到濃度分別為0.183 8、0.367 6、0.735 0、0.919 0、1.838 0、3.676 0 mg/mL的α-亞麻酸甲酯標準工作液。分別準確吸取0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL的亞油酸甲酯儲備液置于10 mL容量瓶中，以正己烷定容，得到濃度分別為0.199 7、0.359 8、0.899 5、1.799 0、3.589 0 mg/mL的亞油酸甲酯標準工作液，在“2.1”項下分析條件下，各濃度進樣1 μL，以各組分保留時間定性，峰面積定量，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，見圖1、2。

圖1 α-亞麻酸甲酯對照品氣相色譜圖

圖2 亞油酸甲酯對照品氣相色譜圖

2.4線性關系考察α-亞麻酸甲酯標準品濃度在0.183 8～3.676 0 mg/mL范圍內，峰面積(Y)與濃度(X)線性關系良好，Y=1.183 7×105X+6.885 0×104(r=0.999 9，n=6)；亞油酸甲酯標準品濃度在0.199 7～3.598 0 mg/mL范圍內，峰面積(Y)與濃度(X)線性關系良好，Y=1.462 7×105X-2.524 5×103(r=0.999 8，n=6)。

2.5檢測限和定量限α-亞麻酸甲酯的檢測限為0.017 1 mg/mL，定量限為0.063 6 mg/mL。亞油酸甲酯檢測限為0.033 3 mg/mL，定量限為0.101 6 mg/mL。

2.6精密度試驗將1份樣品按供試品溶液配制方法處理后連續(xù)進樣5次，每次進樣1 μL, 并計算峰面積的相對標準偏差 , α-亞麻酸甲酯及亞油酸甲酯的計算結果分別為1.85%和1.75%，說明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗將1份樣品按供試品溶液配制方法處理后，于常溫下密封儲存，按以上色譜條件連續(xù)測定7 d，并計算峰面積的相對標準偏差 ,α-亞麻酸甲酯及亞油酸甲酯的計算結果分別為1.84%和1.98%，說明方法穩(wěn)定性良好。

2.8重現(xiàn)性試驗取同一批號的食用調和油樣品5份，按供試品溶液配制方法制備成供試品溶液，再按 以上色譜條件測定，并計算5份樣品峰面積的相對標準偏差，α-亞麻酸甲酯及亞油酸甲酯的計算結果為分別為3.97%和3.81%，說明本品重現(xiàn)性良好。

2.9加樣回收率試驗將亞油酸甲酯標準儲備液和α-亞麻酸甲酯標準儲備液混合，制成亞油酸含量為12.030 1 mg/mL、α-亞麻酸含量為8.882 7 mg/mL的混合標準品溶液。精密稱取同一批次樣品 9份，分別加入一定量的α-亞麻酸甲酯和亞油酸甲酯混合標準溶液，按供試品溶液配制方法處理，再按以上色譜條件進樣測定，計算回收率，結果亞油酸平均回收率為99.59%，RSD為2.66%；α-亞麻酸平均回收率為100.73%，RSD為1.29%,見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.10樣品測定結果分別準確稱取不同調和比例的食用調和油400 mg，制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1 μL，注入氣相色譜儀進行測定。紅花油與胡麻油的比例為1∶1時，亞油酸和α-亞麻酸的含量分別是39.28%和43.48%；紅花油與胡麻油比例為1∶3時，亞油酸和α-亞麻酸的含量分別是17.76%和71.55%；紅花油與胡麻油比例為7∶1時，亞油酸和α-亞麻酸的含量分別是76.55%和8.93%。從測定結果看出，氣相色譜法的測定結果與實際油料配比相符,見圖3、表2。

圖3 調和油樣品氣相色譜圖

配比(體積比)亞油酸含量/%RSD/%α-亞麻酸含量/%RSD/%紅花油∶胡麻油(1∶1)39.282.2043.814.40 紅花油∶胡麻油(1∶3)17.760.9571.551.43 紅花油∶胡麻油(7∶1)76.551.378.931.44

3 討論

本實驗研究的食用調和油是由紅花籽油和胡麻油按一定配比組成。紅花籽油的主要成分是亞油酸，胡麻油的主要成分是α-亞麻酸，亞油酸和α-亞麻酸具有調節(jié)心血管系統(tǒng)的作用[3-8]，其為該食用油中的重要營養(yǎng)成分，所以將亞油酸和α-亞麻酸作為調和油質量控制的指標。

在酯化過程中,比較了通入氮氣和不通氮氣2種情況，通入氮氣生成的甲酯化產物產量有所提高。

本實驗建立了用氣相色譜法同時測定食用調和油中亞油酸甲酯及α-亞麻酸甲酯的方法 ,進而計算其中亞油酸和α-亞麻酸的含量。實驗結果說明氣相色譜法方法快速、準確 ,重復性好 ,可以有效控制食用調和油的質量。該方法也可以作為生產原料紅花油及胡麻油質量控制的方法或是其他類型食用調和油中亞油酸和α-亞麻酸含量的測定方法。該方法的建立對于食用調和油的生產全程質量控制具有積極的意義。

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