侯煥效

【摘要】 目的：觀察不同分期過(guò)敏性紫癜性腎炎（Henoch-Schonlein purpura nephritis，HSPN）患者和健康人血清中金屬蛋白酶組織抑制物-1（tissue inhibitors of metalloproteinase-1，TIMP-1）水平的變化，初步探討TIMP-1在HSPN不同階段中的作用及其與腎損害程度的關(guān)系，通過(guò)相關(guān)藥物阻斷TIMP-1的表達(dá)或抑制其活性，可能為預(yù)防、治療腎臟纖維化提供一個(gè)新方法，以期達(dá)到理想治療效果。方法：將過(guò)敏性紫癜性腎炎患者42例（試驗(yàn)組）按病理類型分組，并設(shè)立健康對(duì)照組。抽取兩組的外周靜脈血5 mL，分離血清，應(yīng)用ELISA雙抗體夾心法分別對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，觀察各組TIMP-1水平的表達(dá)情況。結(jié)果：試驗(yàn)組Ⅱ～Ⅵ級(jí)組血清中TIMP-1水平較健康對(duì)照組顯著增高（P<0.05），Ⅲ～Ⅵ級(jí)組血清中TIMP-1水平較Ⅱ級(jí)組顯著增高（P<0.01），Ⅰ級(jí)組血清中TIMP-1水平與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：通過(guò)檢測(cè)TIMP-1水平，再結(jié)合其他化驗(yàn)指標(biāo)和臨床表現(xiàn)，有助于對(duì)該疾病的治療效果或者預(yù)后給予判斷，對(duì)減少腎功能衰竭發(fā)生率具有指導(dǎo)意義。

【關(guān)鍵詞】 過(guò)敏性紫癜性腎炎； 金屬蛋白酶組織抑制物-1； ELISA雙抗體夾心法； 腎損害

【Abstract】 Objective： To study the changes of serum tissue inhibitors of metalloproteinase-1（TIMP-1） in different stages of patients with Henoch-Schonlein purpura nephritis （HSPN），to discuss the role of TIMP - 1 in HSPN and its relationship with renal damage. By blocking the expression of TIMP - 1 or inhibit its activity， to provide a new method for the treatment of renal fibrosis. Method： 42 patients with HSPN （experimental group） were divided into six groups according to the pathological types， and normal control group was set up. 5 mL peripheral vein blood from all of the research object were extracted and separated its serum. Double antibody sandwich ELISA method was used to detect the expression of IMP-1 in each group. Result： The levels of serum TIMP-1 in II – VI grade HSPN were significantly higher than those in the normal control group （P<0.05）， and its levels in Ⅲ -Ⅳgrade HSPN were significantly higher than those in theⅡgrade （P<0.01）. But compared with the normal control group， the levels of TIMP-1 in I grade HSPN had no statistical significance （P>0.05）. Conclusion： By detecting TIMP - 1 level， in combination with other test indicators and clinical symptoms， can help the treatment of the disease or to judge prognosis， it has the instruction significance to reduce the incidence of renal failure.

【Key words】 Henoch-Schonlein purpura nephritis； Tissue inhibitor of metalloproteinase -1； Double antibody sandwich ELISA method； Renal damage

過(guò)敏性紫癜性腎炎（Henoch-Schonlein purpura nephritis，HSPN）是繼發(fā)于過(guò)敏性紫癜的腎臟損害，是造成兒童慢性腎損害的常見原因之一。病理改變以全身性小血管損害及腎小球系膜病變?yōu)橹?，?guó)際兒科腎臟病學(xué)會(huì)（ISKDC）推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)因更適用于臨床而被廣泛應(yīng)用，臨床常見急進(jìn)性腎炎及腎病綜合癥，以血尿、蛋白尿?yàn)橹饕憩F(xiàn)，可伴高血壓和腎衰竭。目前國(guó)內(nèi)外臨床深入研究紫癜性腎炎的發(fā)病機(jī)理，預(yù)防慢性腎功能衰竭的發(fā)生，已取得一定成果，前瞻性看好。研究發(fā)現(xiàn)：HSPN患者腎小球細(xì)胞外基質(zhì)（extracelluar matrix，ECM）的質(zhì)和量的變化，在腎臟纖維化過(guò)程中起了非常重要的作用。而金屬蛋白酶組織抑制物（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）是其特異的抑制劑；其中廣泛存在于組織和體液中的TIMP-1，在腎臟纖維化中，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)及腎臟細(xì)胞凋亡有控制作用[1]。目前腎小球疾病臨床多采用抗凝、促纖溶、免疫等方法治療，療效并不十分滿意。多項(xiàng)研究表明通過(guò)阻斷TIMP-1的表達(dá)或抑制其活性，抑制系膜細(xì)胞增殖和ECM合成，防止腎小球纖維化，可能為防止或減緩腎功能減退提供一個(gè)新手段。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取符合HSPN診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者42例為試驗(yàn)組，其中男25例，女17例；年齡6～55歲，平均（24.50±13.59）歲；病程6個(gè)月～10年。經(jīng)腎穿刺活組織病理檢查，其中：Ⅰ級(jí)7例，男5例，女2例，年齡6～16歲，平均10.4歲；Ⅱ級(jí)11例，男7例，女4例，年齡16～32歲，平均21.3歲；Ⅲ級(jí)5例，男2例，女3例，年齡19～39歲，平均24.6歲；Ⅳ級(jí)6例，男4例，女2例，年齡24～42歲，平均32.1歲；Ⅴ級(jí)5例，男2例，女3例，年齡28～46歲，平均34.3歲；Ⅵ級(jí)8例，男5例，女3例，年齡32～55歲，平均38.5歲。健康對(duì)照組14例，男8例，女6例，年齡16～38歲，平均32.5歲，均為健康志愿者。各組研究對(duì)象的年齡、性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 有過(guò)敏性紫癜病史，或有典型的紫癜，雙下肢外側(cè)及臀部對(duì)稱分布的出血性皮疹伴蕁麻疹，伴或不伴有關(guān)節(jié)疼痛；病程在6個(gè)月內(nèi)，有輕重不等的血尿或蛋白尿；排除IgA腎病和其他繼發(fā)性腎臟疾病。

1.3 腎臟病理診斷 在超聲科協(xié)助下超聲引導(dǎo)定位，采用經(jīng)皮腎穿刺活檢術(shù)，應(yīng)用16 G活檢針經(jīng)皮穿刺獲得腎組織，送病理檢查。病理分類按ISKDC推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。Ⅰ級(jí)：無(wú)異常；Ⅱ級(jí)：?jiǎn)渭冃韵的ぴ錾琣：局限性，b：彌漫性；Ⅲ級(jí)：系膜增生伴新月體形成<50%，a：局限性，b：彌漫性；Ⅳ級(jí)：系膜增生伴新月體形成50%～75%；Ⅴ級(jí)：系膜增生伴新月體形成>75%，a：局限性，b：彌漫性；Ⅵ級(jí)：系膜毛細(xì)血管性腎炎。

1.4 檢測(cè)方法 （1）實(shí)驗(yàn)方法采用ELISA雙抗體夾心法（檢驗(yàn)室采用試劑由英國(guó)Biotra公司提供的TIMP-1、human、ELISA系統(tǒng)；試劑緩沖液選用磷酸鹽緩沖液濃縮物）。實(shí)驗(yàn)室人員采取患者和健康自愿者空腹血（外周血5 mL）置于實(shí)驗(yàn)試管內(nèi)，室溫自然凝固10～20 min后，離心20 min，收集上清液，按要求分別放置在-20 ℃冰箱中備用。然后將已溶解的各組血清，嚴(yán)格參照有關(guān)文獻(xiàn)[3-4]及試劑說(shuō)明書執(zhí)行有關(guān)操作。（2）采用ELISA雙抗體夾心法反應(yīng)，獲取在標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照范圍內(nèi)的OD值，并由OD值和標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)用計(jì)算機(jī)計(jì)算出相應(yīng)的TIMP-1值。健康人TIMP-1含量正常值按平均1206 ng/mL參考。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，比較采用單因素方差分析和q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

試驗(yàn)組Ⅱ～Ⅵ級(jí)血清中TIMP-1水平較對(duì)照組顯著增高（P<0.05），Ⅲ～Ⅵ級(jí)血清中TIMP-1水平較Ⅱ級(jí)組顯著增高（P<0.01），而Ⅰ級(jí)血清中TIMP-1水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

3 討論

本文旨在探討HSPN患者血清中TIMP-1水平變化與腎小球細(xì)胞間質(zhì)纖維化嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)，意在提醒臨床醫(yī)生在治療HSPN患者時(shí)應(yīng)注意到相關(guān)因素，采取相應(yīng)治療新措施，以減少終末腎病的發(fā)生幾率。研究表明TIMP-1廣泛分布于組織和體液中，它是一種多功能的細(xì)胞因子，不僅能通過(guò)抑制MMP而ECM的降解，其活性的變化在一定程度上決定著ECM的積聚[5]。而且對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及多種細(xì)胞的凋亡有重要作用。另外，TIMP-1還是一種能刺激各種細(xì)胞生長(zhǎng)的因子，許多腎外疾病的研究發(fā)現(xiàn)，它還與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)密切相關(guān)[6-8]。TIMP-1的生成與活性發(fā)揮亦受多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，在原發(fā)和繼發(fā)性腎臟疾病中TIMP-1表達(dá)明顯增加，提示TIMP-1在腎臟纖維化發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮了重要的刺激作用。

研究證明，正常的ECM主要位于腎小球毛細(xì)血管袢基膜和系膜區(qū)，腎小球毛細(xì)血管袢基膜區(qū)含有豐富的IV型膠原，基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)（MMPs）表達(dá)異常致IV型膠原合成和降解失衡，腎小球基膜損傷，致使ECM大量堆積[9]。而ECM的大量積聚引起的腎小球硬化與間質(zhì)纖維化是多種腎病發(fā)展至終末期腎功能衰竭的共同病理表現(xiàn)，這一致病過(guò)程的生理變化尚在研究之中。研究發(fā)現(xiàn)腎間質(zhì)纖維化對(duì)腎功能的影響較腎小球病變更為重要，因而被用做衡量慢性腎臟疾病進(jìn)展的重要指標(biāo)之一。而腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的增殖活化是腎間質(zhì)纖維化發(fā)生和維持的主要因素之一[10-11]。以往對(duì)ECM堆積的原因研究主要集中于ECM如何合成增加方面，而忽視了ECM降解酶系統(tǒng)異常在此生理過(guò)程中有同樣重要的作用。近年來(lái)研究ECM降解在腎臟硬化中的作用及其調(diào)控機(jī)制已成為重點(diǎn)課題。

MMPs是參與腎臟細(xì)胞外基質(zhì)降解的主要酶類，TIMP-1是其抑制劑。正常狀態(tài)下，TIMP-1與MMP-9在血清或組織液中的比例是平衡的，筆者用ELISA雙抗體夾心法發(fā)現(xiàn)TIMP-1在Ⅲ～Ⅵ級(jí)HSPN患者血清中水平顯著增高，提示隨著系膜細(xì)胞、系膜基質(zhì)的增加及纖維化的加重，腎臟固有細(xì)胞分泌MMP-9和TIMP-1水平失衡，導(dǎo)致ECM異常堆積，基底膜Ⅳ型膠原降解減少，基底膜網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)破壞重塑，腎小球結(jié)構(gòu)重疊，蛋白尿形成等病理變化，直至腎功能損害。

本文初步探討TIMP-1在HSPN中的水平變化及其與腎功能損害的關(guān)聯(lián)。通過(guò)對(duì)HSPN不同病理分級(jí)中TIMP-1的表達(dá)與活性變化的檢測(cè)，筆者發(fā)現(xiàn)HSPN Ⅱ～Ⅵ級(jí)患者血清中TIMP-1水平較對(duì)照組顯著增高，Ⅲ～Ⅵ級(jí)較Ⅱ級(jí)組顯著增高，Ⅰ級(jí)與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。目前已經(jīng)認(rèn)識(shí)到治療腎小球疾病除常規(guī)治療外，抑制系膜細(xì)胞ECM合成和阻斷TIMP-1的表達(dá)或抑制其活性，是將來(lái)治療腎臟纖維化的一個(gè)新手段。有研究者發(fā)現(xiàn)某些西藥與中藥具有一定的調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)降解酶系統(tǒng)的作用，如鱉甲煎丸及纈沙坦藥物血清具有抑制正常培養(yǎng)條件及脂多糖刺激條件下TIMP-1表達(dá)的作用，這可能是其延緩腎小球硬化的部分作用機(jī)制[12]。更多研究發(fā)現(xiàn)肽類或核酸藥物對(duì)干預(yù)細(xì)胞外基質(zhì)降解酶的活性和表達(dá)有其特異性，可能為今后治療腎臟疾病減輕腎臟纖維化開辟一條新的途徑。endprint

綜上所述，通過(guò)檢測(cè)TIMP-1水平，再結(jié)合其他化驗(yàn)指標(biāo)和臨床表現(xiàn)，有助于對(duì)該疾病的治療效果或者預(yù)后給予判斷，對(duì)減少腎功能衰竭發(fā)生率具有指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)

[1]孫艷玲，林洪麗，吳泰華，等.ERK1/2MAPK通路在TIMP-1抑制高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞凋亡中的作用[J].中華腎臟病雜志，2006，22（2）：554-558.

[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)腎臟病學(xué)組.紫癜性腎炎的診斷與治療（草案）[J].中華兒科雜志，2001，39（12）：748.

[3] Knowlden J，Martin J，Davies M，et al.Metalloproteinase generation by human glomerular epithelial cells[J].Kidney Int，1995，47（3）：1682-1689.

[4] Koide H，Nakamura T，Ebihara I，et al.Increased mRNA expression of metalloproteinase-9 in peripheral blood monocytes from patients with immunoglobulin a nephropathy[J].AMJ Kidney Dis，1996，28（5）：32.

[5] Tang W W，F(xiàn)ang L，Loskutoff D J，et al.Glomcrular extracellular matrix accumulation in experimental anti-GBM Ab glomer alonephritis[J].Nephoron，2000，84（1）：40.

[6] Maraganore J M，Chao B，Joseph M L，et al.Anticoagulant activity of synthetic hirudin fragment[J].J Biol Chem，1989，264（12）：8692-8698.

[7] KossaKowska A E，Urbanski S J，Edwards D.Tissue in hibitor of metalloproteinases-1（TIMP-I）Mrna is expressed at elevated levds in malignant Non-Hodgkins lgmphomal[J]. Blood，1991，77（12）：2475.

[8] Stetler-Stevenson M，Mansoor A Lim M S，et al.Expression of matrix metalloproteinases and tissue inhibitions of metalloproteinase in reactive and neoplastic lymphomas[J].Blood，1997，89（1）：17087.

[9] Klahr S，Morrissey J，Hruska K，et al.New approaches to delay the progression of chronic renal failure[J].Kidney Int Suppl，2002，80（12）：23-26.

[10] Zeisberg M，Strutz F，Muller G A.Role of fibroblast activation in inducing interstitial fibrosis[J].J Nephrol，2000，13（2）：111-120.

[11] Heidland A，Sebekova K，Paczek L，et al.Renal fibrosis： role of impaired proteolysis and potential therapeutic strategies[J].Kidney Int Suppl，1997，62（12）：s32-39.

[12]胡智星，李浙成，沈金雄，等.鱉甲煎丸對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制因子表達(dá)的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，9（10）：673-675.

（收稿日期：2014-03-07） （本文編輯：蔡元元）endprint

綜上所述，通過(guò)檢測(cè)TIMP-1水平，再結(jié)合其他化驗(yàn)指標(biāo)和臨床表現(xiàn)，有助于對(duì)該疾病的治療效果或者預(yù)后給予判斷，對(duì)減少腎功能衰竭發(fā)生率具有指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)

[1]孫艷玲，林洪麗，吳泰華，等.ERK1/2MAPK通路在TIMP-1抑制高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞凋亡中的作用[J].中華腎臟病雜志，2006，22（2）：554-558.

[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)腎臟病學(xué)組.紫癜性腎炎的診斷與治療（草案）[J].中華兒科雜志，2001，39（12）：748.

[3] Knowlden J，Martin J，Davies M，et al.Metalloproteinase generation by human glomerular epithelial cells[J].Kidney Int，1995，47（3）：1682-1689.

[4] Koide H，Nakamura T，Ebihara I，et al.Increased mRNA expression of metalloproteinase-9 in peripheral blood monocytes from patients with immunoglobulin a nephropathy[J].AMJ Kidney Dis，1996，28（5）：32.

[5] Tang W W，F(xiàn)ang L，Loskutoff D J，et al.Glomcrular extracellular matrix accumulation in experimental anti-GBM Ab glomer alonephritis[J].Nephoron，2000，84（1）：40.

[6] Maraganore J M，Chao B，Joseph M L，et al.Anticoagulant activity of synthetic hirudin fragment[J].J Biol Chem，1989，264（12）：8692-8698.

[7] KossaKowska A E，Urbanski S J，Edwards D.Tissue in hibitor of metalloproteinases-1（TIMP-I）Mrna is expressed at elevated levds in malignant Non-Hodgkins lgmphomal[J]. Blood，1991，77（12）：2475.

[8] Stetler-Stevenson M，Mansoor A Lim M S，et al.Expression of matrix metalloproteinases and tissue inhibitions of metalloproteinase in reactive and neoplastic lymphomas[J].Blood，1997，89（1）：17087.

[9] Klahr S，Morrissey J，Hruska K，et al.New approaches to delay the progression of chronic renal failure[J].Kidney Int Suppl，2002，80（12）：23-26.

[10] Zeisberg M，Strutz F，Muller G A.Role of fibroblast activation in inducing interstitial fibrosis[J].J Nephrol，2000，13（2）：111-120.

[11] Heidland A，Sebekova K，Paczek L，et al.Renal fibrosis： role of impaired proteolysis and potential therapeutic strategies[J].Kidney Int Suppl，1997，62（12）：s32-39.

[12]胡智星，李浙成，沈金雄，等.鱉甲煎丸對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制因子表達(dá)的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，9（10）：673-675.

（收稿日期：2014-03-07） （本文編輯：蔡元元）endprint

綜上所述，通過(guò)檢測(cè)TIMP-1水平，再結(jié)合其他化驗(yàn)指標(biāo)和臨床表現(xiàn)，有助于對(duì)該疾病的治療效果或者預(yù)后給予判斷，對(duì)減少腎功能衰竭發(fā)生率具有指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)

[1]孫艷玲，林洪麗，吳泰華，等.ERK1/2MAPK通路在TIMP-1抑制高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞凋亡中的作用[J].中華腎臟病雜志，2006，22（2）：554-558.

[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)腎臟病學(xué)組.紫癜性腎炎的診斷與治療（草案）[J].中華兒科雜志，2001，39（12）：748.

[3] Knowlden J，Martin J，Davies M，et al.Metalloproteinase generation by human glomerular epithelial cells[J].Kidney Int，1995，47（3）：1682-1689.

[4] Koide H，Nakamura T，Ebihara I，et al.Increased mRNA expression of metalloproteinase-9 in peripheral blood monocytes from patients with immunoglobulin a nephropathy[J].AMJ Kidney Dis，1996，28（5）：32.

[5] Tang W W，F(xiàn)ang L，Loskutoff D J，et al.Glomcrular extracellular matrix accumulation in experimental anti-GBM Ab glomer alonephritis[J].Nephoron，2000，84（1）：40.

[6] Maraganore J M，Chao B，Joseph M L，et al.Anticoagulant activity of synthetic hirudin fragment[J].J Biol Chem，1989，264（12）：8692-8698.

[7] KossaKowska A E，Urbanski S J，Edwards D.Tissue in hibitor of metalloproteinases-1（TIMP-I）Mrna is expressed at elevated levds in malignant Non-Hodgkins lgmphomal[J]. Blood，1991，77（12）：2475.

[8] Stetler-Stevenson M，Mansoor A Lim M S，et al.Expression of matrix metalloproteinases and tissue inhibitions of metalloproteinase in reactive and neoplastic lymphomas[J].Blood，1997，89（1）：17087.

[9] Klahr S，Morrissey J，Hruska K，et al.New approaches to delay the progression of chronic renal failure[J].Kidney Int Suppl，2002，80（12）：23-26.

[10] Zeisberg M，Strutz F，Muller G A.Role of fibroblast activation in inducing interstitial fibrosis[J].J Nephrol，2000，13（2）：111-120.

[11] Heidland A，Sebekova K，Paczek L，et al.Renal fibrosis： role of impaired proteolysis and potential therapeutic strategies[J].Kidney Int Suppl，1997，62（12）：s32-39.

[12]胡智星，李浙成，沈金雄，等.鱉甲煎丸對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制因子表達(dá)的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，9（10）：673-675.

（收稿日期：2014-03-07） （本文編輯：蔡元元）endprint