張罡 齊喜紅 王慶

寧夏食品藥品檢驗(yàn)所 寧夏銀川 750004

一測多評法測定人參健脾片中3種成分

張罡 齊喜紅 王慶

寧夏食品藥品檢驗(yàn)所 寧夏銀川 750004

目的:建立在同一色譜條件下測定枳殼、陳皮和青皮中的活性成分柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量的方法。方法:采用Phenomenex Gemini C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以乙腈－水(17:83)(用磷酸調(diào)pH至3.0)為流動相，檢測波長283nm。結(jié)果:柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷的線性范圍分別為0.0999～1.249μg(r=0.9996)，0.08172～1.0215μg(r=0.9999)，0.0816～1.02μg(r=0.9996)。結(jié)論:該法簡便，分離效果好，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確，可用于人參健脾片的質(zhì)量控制。

HPLC;人參健脾片;柚皮苷;橙皮苷;新橙皮苷

人參健脾片是由人參、當(dāng)歸、草豆蔻等17味中藥制成的片劑，具有補(bǔ)氣健脾，開胃消食的作用［1］。臨床用于脾虛濕困所致的食少便溏，或吐或?yàn)a，脘腹脹滿，四肢乏力，面色萎黃等癥。為了更好的控制藥品質(zhì)量，保證臨床用藥的安全性和有效性，我們建立了同一色譜條件下同時測定人參健脾片中枳殼有效成分柚皮苷、新橙皮苷［2］、陳皮和青皮有效成分橙皮苷的高效液相色譜法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent1260高效液相色譜儀，Agilent1260色譜數(shù)據(jù)工作站。梅特勒－托利多XS205電子天平。

1.2 試藥橙皮苷對照品(批號:110721－201014)純度為95.1%;柚皮苷對照品(批號:110722－200610);新橙皮苷對照品(批號:111857－201102)純度為99.6%，均由中國藥品生物制品檢驗(yàn)所提供。人參健脾片樣品為河北百善制藥有限公司生產(chǎn)，批號為120211、1202132、11101151;浙江維康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號:20100809、20120212、20120213、20120214。乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件Phenomenex Gemini C18(250mm×4.6mm，5μm);以乙腈－水(17:83)(用磷酸調(diào)pH至3.0)為流動相，檢測波長283nm。在上述條件下，樣品峰達(dá)到基線分離，與相鄰的色譜峰分離度大于1.5。各對照品峰理論塔板數(shù)不小于3000.結(jié)果見圖1.

圖1 高效液相色譜圖

2.2 混合對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷對照品，柚皮苷對照品，新橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)研究

2.4.1 測定波長的選擇根據(jù)《中國藥典》2010年版，設(shè)定波長為283nm。

2.4.2 線性關(guān)系考察精密吸取混合對照品溶液(柚皮苷對照品溶液(0.2498mg/ml)，橙皮苷對照品溶液(0.2043mg/ml)，新橙皮苷對照品溶液(0.204mg/ml))0.4ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分別吸取10μl注入液相色譜儀測定。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程?；貧w方程分別為Y=1433.2X－2.4036，r=0.9996;Y=1614.9X－1.3078，r= 0.9999;Y=1696.2X+5.4345，r=0.9996。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批供試品(批號批號120211)，按2.3項(xiàng)供試品溶液制備方法制備，分別于配制后0、4、8、12、16、20小時，依法測定，柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.42%、0.94%和0.99%。結(jié)果表明，在20小時內(nèi)樣品溶液基本穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批供試品(批號批號120211)6份，按2.3項(xiàng)制備成供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件測定。結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.16%，2.30%，2.07%。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn)精密稱取已知含量同一批號(批號120211，柚皮苷含量0.29mg/片，橙皮苷含量0.44mg/片，新橙皮苷含量0.23mg/片)的供試品6份，每份取樣量為供試品取量(1g)的50%(0.5g)，以當(dāng)前取樣含量的1:1，分別精密加入柚皮苷對照品溶液(0.2498mg/ml)、橙皮苷對照品溶液(0.2043mg/ml)、新橙皮苷對照品溶液(0.2040mg/ ml)2ml，按2.3項(xiàng)制備成供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件測定，計(jì)算柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的回收率，結(jié)果平均回收率分別為100.7%，98.3%，100.3%;RSD分別為1.41%，2.96%，2.44%。結(jié)果見表1，表2，表3。

表1 柚皮苷的確度試驗(yàn)結(jié)果

表2 橙皮苷的確度試驗(yàn)結(jié)果

表3 新橙皮苷的確度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品測定結(jié)果取7批樣品(批號:120211、1202132、11101151、0100809、20120212、20120213、20120214。)。每批各6份，按2.3項(xiàng)制備成供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件測定。結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 采用HPLC法測定了人參健脾片中有效成分的量。參考相關(guān)文獻(xiàn)［3－7］，對甲醇－水，乙腈－磷酸水及甲醇－冰醋酸－水流動相系統(tǒng)進(jìn)行了考察，最終采用了乙睛－水(17:83)(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)為流動相系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，同時測定處方中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷三種成分，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，結(jié)果表明該方法簡便快速，精密度、重復(fù)性、回收率良好，可作為人參健脾片的質(zhì)量控制方法。

3.2 本實(shí)驗(yàn)所用的色譜條件可使人參健脾片中的各主要色譜峰得到良好的分離，分析結(jié)果表明，經(jīng)對峰的純度光譜檢驗(yàn)，各主要成分色譜峰純度均大于95%。

3.3 中藥復(fù)方制劑廣泛用于臨床，其療效與藥材飲片的質(zhì)量及制備工藝密切相關(guān)，因此，本實(shí)驗(yàn)建立的質(zhì)量控制方法能夠更好的控制其質(zhì)量，保證人民的用藥安全。

［1］國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)［M］.中藥成方制劑第十冊

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［3］于敏，彌宏，焦連慶.HPLC法測定人參健脾丸中橙皮苷的含量［J］.特產(chǎn)研究，2005(04):47－48.

［4］尚遠(yuǎn)宏，劉圓，田金鳳.反相高效液相色譜法測定人參健脾片中橙皮苷的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2007，(05):781－782.

［5］尚遠(yuǎn)宏，劉圓，石圣洪.高效液相法測定人參健脾片中柚皮苷的含量［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，(10):12－13.

［6］康四和，周銳，聶晶.HPLC測定小兒消積止咳口服液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量［J］.中成藥，2010(12):2088－2091.

［7］宋劍鋒，馮敬騫，胡建華，等.HPLC法同時測定常山胡柚花中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的量［J］.中草藥，2014(06):854－856.

R285.5

B

1009－6019(2014)10－0324－02