楊 平，曾蔚欣，孫路路

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院，北京100038)

雙波長(zhǎng)分光光度法用于氯霉素并水楊酸體系的含量測(cè)定研究*

楊 平，曾蔚欣，孫路路

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院，北京100038)

目的:改進(jìn)復(fù)方氯霉素洗劑中氯霉素的含量測(cè)定方法。方法:采用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定氯霉素的含量，且不需進(jìn)行額外的樣品處理過程。結(jié)果:氯霉素測(cè)定的線性范圍為2.5～20 μg/ml(r=0.999 9);低、中、高濃度的回收率分別為99.25%、100.87%和98.81%。結(jié)論:雙波長(zhǎng)紫外分光光度法用于測(cè)定復(fù)方氯霉素洗劑中氯霉素的含量，與現(xiàn)行的重氮滴定法比較，方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便易行，適用于醫(yī)院制劑的快檢要求。

雙波長(zhǎng)紫外分光光度法，氯霉素，含量測(cè)定

復(fù)方氯霉素洗劑是醫(yī)院制劑品種，可止癢、殺菌、消炎，用于治療脂溢性伴毛囊型皮炎，其中氯霉素的含量測(cè)定方法在《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》［1］中規(guī)定為重氮滴定法，其樣品的處理需煮沸15 min，過濾，過程煩瑣，且使用淀粉碘化鉀試紙指示滴定終點(diǎn)，結(jié)果受人為因素及試紙質(zhì)量的影響較大，終點(diǎn)不易掌握。由于處方中還含有水楊酸，具有紫外吸收，影響氯霉素的測(cè)定，故有文獻(xiàn)報(bào)道用HPLC法進(jìn)行測(cè)定［2，3］。由于醫(yī)院制劑的檢驗(yàn)需要快速、準(zhǔn)確，本文經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證，采用雙波長(zhǎng)分光光度法，消除水楊酸對(duì)氯霉素測(cè)定的干擾，且不需額外的樣品處理過程，快速簡(jiǎn)便，質(zhì)量可控。

1 儀器與試藥

1.1 儀器HP8453型紫外可見分光光度計(jì)，惠普公司;GB 630型分析天平。

1.2 試藥氯霉素(梯希愛化成工業(yè)發(fā)展有限公司，批號(hào)Q2X7D－GE);水楊酸(分析純);復(fù)方氯霉素洗劑(本院自制，批號(hào)20120826、20121106、20121207、20120709、20130106);水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的制備氯霉素儲(chǔ)備液:精密稱取氯霉素0.25 g于100 ml量瓶中，加乙醇20 ml溶解，加水至刻度，搖勻，得到濃度為2.5 mg/ml的溶液，再取該溶液10 ml于100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，得到濃度為0.25 mg/ml的儲(chǔ)備液。水楊酸儲(chǔ)備液:精密稱取水楊酸0.5 g于100 ml量瓶中，加乙醇20 ml溶解，加水至刻度，搖勻，得到濃度為5.0 mg/ml的溶液，再取該溶液10 ml于100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，得到濃度為0.5 mg/ml的儲(chǔ)備液。

2.2 對(duì)照品溶液的制備精密量取各2 ml儲(chǔ)備溶液，置50 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。氯霉素及水楊酸濃度分別為10 μg/ml和20 μg/ml。

2.3 陰性對(duì)照液的配制取處方量的其他成分(含薄荷腦、甘油)，制成100 ml的溶液，備用。

2.4 測(cè)定條件的確定取陰性對(duì)照液1 ml，置100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液，在200～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示其在此波長(zhǎng)范圍內(nèi)無吸收。分別取氯霉素對(duì)照品溶液(含氯霉素10 μg/ml)及水楊酸對(duì)照品溶液(含水楊酸20 μg/ml)，在200～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果氯霉素在278 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇278 nm為氯霉素的測(cè)定波長(zhǎng)。水楊酸對(duì)照品溶液在278 nm處的吸收度為0.226 1，依據(jù)水楊酸的紫外吸收曲線，尋找與278 nm處吸收度最接近的波長(zhǎng)為312 nm處，其吸收值為0.229 9，故選擇312 nm為測(cè)定氯霉素的參比波長(zhǎng)，見圖1。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取5份水楊酸儲(chǔ)備液2 ml，分別置于50 ml的量瓶中，再依次精密加入氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.5、1、2、3和4 ml，加純化水至刻度，搖勻。分別在278 nm及312 nm處測(cè)定A1及A2，以ΔA= A1－A2對(duì)濃度(C)作線性回歸，得到回歸方程為:ΔA= 0.019 2 C－0.012 5(R2=0.999 8)，線性范圍為2.5～20 μg/ml。

圖1 氯霉素及水楊酸的紫外吸收?qǐng)D

2.6 回收率試驗(yàn)精密量取9份水楊酸儲(chǔ)備液2 ml，分別置于50 ml的量瓶中，再依次精密加入氯霉素儲(chǔ)備液1.6、2和2.4 ml，加純化水至刻度，搖勻，每一濃度進(jìn)行3樣本分析。分別在278 nm及312 nm處測(cè)定A1、A2，計(jì)算ΔA，按“2.5”項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算氯霉素的含量。結(jié)果平均回收率為99.64%，RSD為1.27%，見表1。

表1 氯霉素回收率測(cè)定結(jié)果

2.7 兩種方法測(cè)定氯霉素含量的比較按“2.2”項(xiàng)下方法準(zhǔn)確量取5個(gè)批號(hào)的樣品，按照重氮滴定法及雙波長(zhǎng)法分別進(jìn)行含量測(cè)定，兩種方法測(cè)得結(jié)果間無顯著性差異，見表2。

表2 兩種方法樣品含量測(cè)定結(jié)果比較

3 討論

目前復(fù)方氯霉素洗劑中氯霉素的含量測(cè)定方法是《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》收載的重氮滴定法。操作比較煩瑣費(fèi)時(shí)，其樣品的處理需煮沸15 min，過濾;且用碘化鉀淀粉試紙劃痕判斷終點(diǎn)受試紙質(zhì)量及環(huán)境溫度的影響較大;同時(shí)終點(diǎn)的判斷更與操作人員的視覺及經(jīng)驗(yàn)有關(guān)，容易產(chǎn)生較大誤差。應(yīng)用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法可消除水楊酸對(duì)氯霉素測(cè)定的干擾［4］，本文的改進(jìn)之處在于水楊酸的測(cè)定仍采用中和滴定法，經(jīng)典，準(zhǔn)確，快速;氯霉素的測(cè)定采用雙波長(zhǎng)法，方法學(xué)研究結(jié)果符合含量測(cè)定的要求，其在更廣的范圍內(nèi)(2.5～20 g/ml)具有較好的線性。在具體測(cè)定中僅需精密量取5 ml復(fù)方氯霉素洗劑，置100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，再取該溶液1 ml，置50 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。以水為空白，在278 nm及312 nm處測(cè)定A1及A2，ΔA=A1－A2計(jì)算，將結(jié)果代入回歸方程，計(jì)算即得氯霉素的濃度。該方法的最大優(yōu)點(diǎn)在于大大節(jié)省了測(cè)定的時(shí)間成本，結(jié)果受人為及環(huán)境因素影響很小。本文通過測(cè)定5批樣品將雙波長(zhǎng)法與滴定法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行了比較及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示，兩種方法測(cè)得的結(jié)果間無顯著性差異。可見雙波長(zhǎng)法不但快速，并且準(zhǔn)確，結(jié)果重現(xiàn)性好，適合醫(yī)院制劑的快檢要求。

1中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局.中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范(二版)［Z］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1996:103

2楊輝，崔愛瑛.HPLC法測(cè)定復(fù)方氯霉素洗劑中氯霉素和水楊酸的含量［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23(6):470－472

3馮碧敏，陳麗娟，張昊.HPLC法測(cè)定復(fù)方氯霉素洗劑中氯霉素和水楊酸的含量［J］.瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，28(4):363－364

4管玫，李開蘭，謝智遠(yuǎn).雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定復(fù)方氯霉素洗劑中氯霉素及水楊酸的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，1992，7(2):116－118

Determination of chloramphenicol in compound chloramphenicol lotion by dual wavelength UV spectrophotometry

Yang Ping，Zeng Weixin，Sun Lulu
(Beijing Tiantan Hospital Affiliated to Capital Medical University，Beijing 100038)

Objective:To Improve the method of determination of chloramphenicol in compound chloramphenicol lotion.Methods:Dual wavelength UV spectrophotometry was used to directly determine the chloramphenicol without any additional processing.Results:The linear range is 2.5～20 μg/ml(r=0.999 9)，the recovery of chloramphenicol from the high，medium and low levels of chloramphenicol solution was 99.25%，100.87%and 98.81%，respectively.Conclusions:The method of dual wavelength UV spectrophotometry for the determination of chloramphenicol in compound chloramphenicol lotion is accurate，simple and suitable for hospital preparations.

dual wavelength UV spectrophotometry，chloramphenicol，content determination

R927.11

A

1006-5687(2014)01-0022-03

2013-11-20

首都衛(wèi)生發(fā)展科研專項(xiàng)(No.2011－2008－01)