江杰，黃新顏，王利紅，李麗，孫文錦

HBV感染者病毒基因型分布特點(diǎn)及其與干擾素療效的關(guān)系

江杰，黃新顏，王利紅，李麗，孫文錦

目的研究HBV感染者病毒基因型分布特點(diǎn)及其與干擾素療效之間的關(guān)系。方法選取急性乙型肝炎（Acute hepatitis B ）8例，慢性乙型肝炎（CHB）120例，乙型肝炎肝硬化60例，肝細(xì)胞癌患者32例。提取血清HBV DNA，PCR擴(kuò)增S區(qū)序列，對(duì)產(chǎn)物直接測(cè)序并上傳至斯坦福大學(xué)HBV數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行基因型分析；選取78例CHB患者（B基因型38例，C基因型40例），經(jīng)干擾素-α治療48周，分析干擾素治療不同基因型病毒感染者的療效。結(jié)果HBV A、B、C、D基因型感染者分別為7.7%、35.9%、51.4%和5.0%，肝硬化和肝細(xì)胞癌患者B和C基因型感染者分別為95%和93.7%，顯著高于A和D基因型感染的5%和6.3%（x2=11.364，P＜0.01）；在干擾素治療48周后，B基因型感染者HBV DNA轉(zhuǎn)陰率為60.5%，顯著高于C基因型感染者的32.5%（x2=6.014，P＜0.05）；B基因型感染者HBeAg/HBeAb血清轉(zhuǎn)換率為65.8%，顯著高于C基因型感染者的27.5%（x2=10.564，P＜0.01）；B基因型感染者血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶復(fù)常率為97.6%，顯著高于C基因型感染者的67.5%（x2=5.387，P＜0.05）。結(jié)論HBV基因型以B和C基因型為主，C基因型感染預(yù)示著不良的疾病預(yù)后和較差的干擾素治療療效。

慢性乙型肝炎；HBV 基因型；干擾素-α；療效

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是導(dǎo)致人類急性和慢性肝臟疾病的重要病原體。全球約20億人曾感染過(guò)HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染者，每年約有100萬(wàn)人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝癌（Primary liver cancer，PLC）[1]。CHB可向肝硬化發(fā)展，抗病毒治療已成為治療CHB的共識(shí)[2]。目前，根據(jù)HBV全基因核苷酸序列異源性＞8%或者S基因區(qū)核苷酸序列異源性＞4%，將不同病毒株分為8個(gè)基因型[3]。近兩年又發(fā)現(xiàn)了新的I基因型[4]。大量研究表明，HBV 基因型、基因亞型分布具有明顯的地域性，不同的基因型和基因亞型具有其獨(dú)特的流行病學(xué)特點(diǎn)和分子生物學(xué)特征，與乙型肝炎病毒復(fù)制、致病性、宿主免疫應(yīng)答及臨床表現(xiàn)、治療與預(yù)后等都有一定的相關(guān)性[5]。本研究利用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法對(duì)CHB患者HBV基因型分布及其與干擾素治療效果的關(guān)系進(jìn)行了分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選擇2008年1月至2012年10月在我科門診和住院的HBV感染者220例，男140例，女80例；平均年齡（52.1±15.8）歲。根據(jù)2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》標(biāo)準(zhǔn)[6，7]，其中診斷為急性乙型肝炎（A-cute hepatitis B）8例，男5例，女3例；平均年齡（31.6±11.4）歲。診斷為CHB 120例，男76例，女44例；平均年齡（47.4± 13.6）歲。診斷為肝硬化60例，男39例，女21例；平均年齡（55.2±17.8）歲。診斷為肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）32例，男20例，女12例；平均年齡（56.7±18.4）歲。

1.2 治療方法本研究對(duì)78例CHB患者給予重組人干擾素α-1b（運(yùn)德素，北京三元基因工程有限公司）治療，50 μg皮下注射，隔日1次，療程48周。

1.3 臨床檢測(cè)采用ELISA法檢測(cè)HBeAg/抗-HBe（英可創(chuàng)新廈門科技有限公司）；采用PCR法檢測(cè)HBV DNA（上?？迫A生物工程股份有限公司，檢測(cè)靈敏度為100IU/ml）。

1.4 血清HBV DNA分型檢測(cè)Taq酶（大連寶生物生物技術(shù)有限公司）；提取血清病毒DNA（德國(guó)Qiagen公司），PCR引物（上海生工生物技術(shù)公司合成）。按照文獻(xiàn)報(bào)道設(shè)計(jì)[8]——外側(cè)引物：5’-CCTCCTGCTGGTGGCTCCAGTTC-3’（nt22-77）；5’-GGCGGCAAACCCCAAAAGACCC-3’（nt1004-1025）。內(nèi)側(cè)引物:5’-CTAGGACCCCTGCTCGTGTTACA-3’（nt181-203）；5’-ATTACATATCCCATGAAGTTAAG-3’（nt870-892）。擴(kuò)增條件:94℃5 min，94℃30 s，55℃30 s，72℃60 s，共35個(gè)循環(huán)，72℃5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，由北京博邁德生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果經(jīng)BioEdit軟件進(jìn)行序列長(zhǎng)度編輯及格式轉(zhuǎn)換后，上傳至斯坦福大學(xué)HBV數(shù)據(jù)庫(kù)（http://hivdb.stanford.edu/HBV/HBVseq），進(jìn)行序列比對(duì)和基因型分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，使用SPSS 17.0軟件包，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV基因型的分布情況在220例HBV感染者中，檢測(cè)出A型、B型、C型和D型分別為17例（7.7%）、79例（35.9%）、113例（51.4%）和11例（5%），即B、C基因型共192例（87.3%），顯著高于A、D基因型28例（12.7%）（x2=16.365，P＜0.01）；HBV基因型在不同疾病狀態(tài)的感染者中分布有顯著性差異（x2=7.414，P＜0.05或P＜0.01），其中B、C基因型在肝硬化和HCC中分別為57例（95%）及30例（93.7%），顯著高于A、D基因型的3例（5%）及2例（6.3%）（x2=11.364，P＜0.01，表1）。

表1 不同HBV感染者HBV基因型(%）的分布

2.2 不同HBV基因型感染的CHB患者對(duì)干擾素治療的療效比較在78例接受干擾素治療的CHB患者中，B基因型感染者38例，C基因型感染者40例。在干擾素治療48周后，B基因型感染者HBV DNA轉(zhuǎn)陰率為60.5%，顯著高于C基因型感染者的32.5%（x2=6.014，P＜0.05）；B基因型感染者HBeAg/HBeAb血清轉(zhuǎn)換率為65.8%，顯著高于C基因型感染者的27.5%（x2=10.564，P＜0.01）；B基因型感染者ALT復(fù)常率為97.6%，顯著高于C基因型感染者的67.5%（x2=5.387，P＜0.05），說(shuō)明干擾素治療后，B基因型感染者療效顯著好于C基因型感染者。

3 討論

HBV存在多種不同的基因型，而這些基因型與病毒變異和慢性肝病患者的病情嚴(yán)重程度有著十分緊密的關(guān)系[9]。HBV基因型的分布有高度的地區(qū)分布[10]。國(guó)內(nèi)學(xué)者報(bào)道流行于我國(guó)的HBV 基因型主要為B 型和C 型，占總感染人群的95%以上，北方地區(qū)以C 基因型為主，南方地區(qū)以B 基因型較為常見(jiàn)[11]。C基因型與較重的病變有關(guān)，發(fā)生肝炎肝硬化、肝細(xì)胞癌較為多見(jiàn)[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)常見(jiàn)的A、B、C、D四個(gè)HBV基因型在本地區(qū)均有感染，B和C基因型占總感染人群的絕大部分，C基因型在急性肝炎、慢性肝炎、肝炎肝硬化和肝細(xì)胞癌患者中的比例分別為37.5%、47.5%，、53.3%和65.6%，與國(guó)內(nèi)的報(bào)道基本一致。

核苷類似物和α-干擾素等抗病毒藥物已廣泛應(yīng)用于慢性乙型肝炎的治療，并有一定的療效[13]。IFN-α是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的治療病毒性肝炎的首選藥物之一[14,15]，因此本研究選取78例CHB患者，經(jīng)IFN-α抗病毒治療48周，評(píng)價(jià)B和C基因型感染者對(duì)干擾素療效的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，B基因型感染者無(wú)論是HBV DNA轉(zhuǎn)陰率、HBeAg/抗-HBe血清轉(zhuǎn)換，還是血清ALT復(fù)常率，均顯著優(yōu)于C基因型感染者。

通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，HBV感染仍以B和C基因型為主，而C基因型與不良的預(yù)后和較差的治療療效有關(guān)。因此，對(duì)于該類患者必須嚴(yán)密隨訪，合理地制定個(gè)體化治療方案，以延緩和減少肝硬化及肝癌的發(fā)生。

致謝本文承蒙首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院柳雅立博士審閱和寫作指導(dǎo)，特此致謝。

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（收稿：2013-12-27）（校對(duì)：陳宗炳）

Hepatitis B virus genotypes and its correlation to interferon-α therapy in patients with hepatitis B

Jiang Jie，Huang Xinyan，Wang Lihong，et al.Department of Infectious Diseases，Central hospital，Ezhou 436099，Hubei Province

Hepatitis B；Hepatitis B viral genotypes；Interferon-α；Therapy

10.3969/j.issn.1672-5069.2014.03.021

436099 湖北省鄂州市中心醫(yī)院感染病科

江杰，男，43歲，醫(yī)學(xué)學(xué)士，副主任醫(yī)師。從事病毒性肝炎的臨床診治工作。E-mail:ezzxyy@vip.163.com

黃新顏，E-mail:67284839@qq.com