朱曉雯，李 偉，文紅梅，張 路，單晨嘯，柴 川，范乃兵

（南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023）

liguzinediol是一種毒性較?。?］，具有心臟安全性，可用于治療急性心衰的化合物。它通過(guò)影響肌漿網(wǎng)鈣釋放，增加大鼠在體和離體的心臟收縮力［2－3］，對(duì)正常大鼠及其離體心臟起到較好的正性肌力作用［4－5］。

前期對(duì)liguzinediol在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)、♀♂差異及藥物代謝進(jìn)行了研究報(bào)道［6－8］。根據(jù)一類新藥研制的要求，比格犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究對(duì)指導(dǎo)臨床具有更為重要的意義［9－10］，本文首次研究了比格犬靜注 liguzinediol后的血漿藥代動(dòng)力學(xué)，為liguzinediol的進(jìn)一步開發(fā)和臨床研究提供了必要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑 liguzinediol對(duì)照品（自制，HPLC測(cè)定純度 ＞98% ）；咖啡因（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：171215－200507）；甲醇、甲酸為色譜純；水為質(zhì)譜純。

1.2 儀器 AB Sciex QTRAP 5500質(zhì)譜儀（美國(guó)AB公司）；LC 20A快速液相色譜儀 （日本Shimadzu公司）；VortexGenius 3渦旋混合儀（德國(guó)IKA公司）；TGL 16G離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.3 比格犬藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn) 健康比格犬，每組6只，♀♂各半，體質(zhì)量6～8 kg，由上海交通大學(xué)農(nóng)學(xué)院教學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)場(chǎng)提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（滬20120005）。給藥前禁食12 h，并空腹抽血2 ml，動(dòng)物隨機(jī)編號(hào)并稱重，按 1.6、3.2、6.4 mg·kg－1劑量給藥，不同時(shí)間點(diǎn) 0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.75、2、3、4、5、6、8、12 h于股靜脈取血約 2 ml，肝素抗凝，離心分取血漿，冷凍保存。

1.4 色譜與質(zhì)譜條件 色譜條件：Shim-pack GVP-ODS保護(hù)柱（5.0 mm×2.0 mm，4.6μm）；Shim-pack XR-ODS色譜柱50 mm×2.0 mm，2.2μm）；柱溫40℃；流動(dòng)相為甲醇（A）－0.1% 甲酸（B），梯度洗脫：0～1 min，5%A；1～2 min，5%～75%A；2～3 min，75%A；3～3.1 min，75% ～5%A；3.1～5 min，5%A。流速0.4 ml·min－1，進(jìn)樣量 2μl。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI）；采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）進(jìn)行正離子檢測(cè)；離子源噴霧電壓5500 V；離子源溫度 500℃；氣簾氣 40 psi；霧化氣60 psi；輔助加熱氣 60 psi；經(jīng)優(yōu)化后，liguzinediol和咖啡因的參數(shù)：DP、EP、CE、CXP分別為51、10、27、14 V和 146、10、31、12 V。liguzinediol和咖啡因的檢測(cè)離子分別為 m／z 169.2→122.2和 m／z 195.2→110.2。

1.5 對(duì)照品溶液的配制 取 liguzinediol對(duì)照品10 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每ml含liguzinediol為1 mg的儲(chǔ)備液。取咖啡因?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加甲醇制成每ml含10μg的咖啡因內(nèi)標(biāo)溶液。

1.6 血漿樣品處理 取血漿100μl，加入內(nèi)標(biāo)（咖啡因10 mg·L－1）100μl，混勻，再加入甲醇 1.8 ml，渦旋震蕩 3 min，12 000 r·min－1離心 5 min。吸取上清液 1 ml，過(guò) 0.22μm微孔濾膜，濾液進(jìn)樣。

1.7 方法學(xué)考察 按藥代動(dòng)力學(xué)研究的相關(guān)要求，考察專屬性、線性范圍、檢測(cè)限、提取回收率和方法回收率、日內(nèi)精密度和日間精密度、樣品穩(wěn)定性、基質(zhì)效應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察 在上述條件下進(jìn)行檢測(cè)，liguzinediol和咖啡因的保留時(shí)間分別為2.29和2.78 min左右，峰形對(duì)稱，達(dá)基線分離，空白血漿中無(wú)內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，專屬性好。

liguzinediol在 5～1×104μg·L－1濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為0.02μg·L－1。

配制質(zhì)量濃度為5、50、500及 5 000μg·L－1的血漿質(zhì)控樣品，按“血漿樣品處理”項(xiàng)下方法操作，進(jìn)行提取回收率、方法回收率、日內(nèi)精密度、日間精密度以及基質(zhì)效應(yīng)等試驗(yàn)，結(jié)果見Tab 1，均符合生物樣品的檢測(cè)要求。

取上述4種濃度的質(zhì)控樣品，分別考察反復(fù)凍融3次，室溫保存24 h，以及冷凍保存1個(gè)月的樣品穩(wěn)定性，其RSD不超過(guò)8.0%，表明liguzinediol血漿樣品穩(wěn)定。

2.2 比格犬靜注藥代動(dòng)力學(xué)測(cè)定 采用上述LC-MS／MS方法測(cè)定靜脈注射給予低、中、高3個(gè)劑量（1.6、3.2、6.4 mg·kg－1）liguzinediol后的犬血漿樣品。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)用DAS 2.0軟件進(jìn)行計(jì)算和處理，主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見Tab 2。

Tab 1 Precision，accuracy and measured effect of the assay for liguzinediol in beagle dog plasma（ˉx±s，n＝5）

Tab 2 Pharmacokinetic parameters of liguzinediol in beagle dogs after intravenous administration of 1．6，3．2，6．4 mg·kg－1 liguzinediol（ˉx±s，n＝6）

3 討論

由靜脈注射liguzinediol后比格犬的血漿藥代動(dòng)力學(xué)可見，liguzinediol在比格犬體內(nèi)的清除速度較快，半衰期T12約為0.5 h，♀♂犬的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)明顯差異。而前期研究［6－7］的大鼠血漿藥代動(dòng)力學(xué)，♀♂大鼠的T12差異明顯，♂鼠的半衰期為0.3～0.5 h，而♀鼠的半衰期為1.5～2 h，♂鼠的清除速率（CL）也是♀鼠的4～5倍，是由于♀♂大鼠代謝酶差異所引起的。

分別單次靜脈給予比格犬低、中、高 （1.6、3.2、6.4 mg·kg－1）3個(gè)劑量的liguzinediol后，其在動(dòng)物體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)行為具有線性特征，在實(shí)驗(yàn)的劑量范圍內(nèi)Cmax和AUC0－t均呈現(xiàn)劑量依賴式的增長(zhǎng)趨勢(shì)。各劑量組間的T12經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無(wú)顯著性，說(shuō)明在實(shí)驗(yàn)的劑量范圍內(nèi)藥物可以在動(dòng)物體內(nèi)正常代謝并順利消除，未發(fā)現(xiàn)明顯的蓄積和飽和現(xiàn)象。

藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)研究表明，liguzinediol作為正性肌力藥，靜脈注射于動(dòng)物體內(nèi)起效快，作用迅速，清除完全，可為急性心衰的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］聞 侃，劉 崢，李 偉，等.Liguzinediol的急性毒性 ［J］.中國(guó)新藥與臨床雜志，2011，30（3）：234－5.

［1］Wen K，Liu Z，Li W，et al.Acute toxicity of liguzinediol［J］.Chin J New Drugs Clin Rem，2011，30（3）：234－5.

［2］徐 毅，羅卓卡，陳 龍，等.Liguzinediol的正性肌力作用機(jī)制及心臟安全性 ［J］.中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2012，26（2）：151－6.

［2］Xu Y，Luo Z K，Chen L，et al.Positive inotropic mechanism of liguzinediol and heart safety evaluation［J］.Chin J Pharmacol Toxicol，2012，26（2）：151－6.

［3］Chen L，Xu Y，Li W，et al.The novel compound liguzinediol exerts positive inotropic effects in isolated rat heart via sarcoplasmic reticulum Ca2＋ATPase-dependent mechanism ［J］.Life Sci，2012，91（11）：402－9.

［4］劉 崢，周淑媛，李 偉，等.Liguzinediol對(duì)正常大鼠離體心臟的正性肌力作用 ［J］.中國(guó)新藥與臨床雜志，2009，28（4）：293－6.

［4］Liu Z，Zhou SY，Li W，et al.Liguzinediol induced positive inotropic effect in normal isolated rat hearts［J］.Chin J New Drugs Clin Rem，2009，28（4）：293－6.

［5］劉 崢，卞慧敏，李 偉，等.Liguzinediol對(duì)正常大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué)的影響 ［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，15（44）：1155－8.

［5］Liu Z，Bian H M，Li W，et al.Effect of liguzinediol on cardiac hemodynamics in healthy rats［J］.Chin Pharm J，2009，15（44）：1155－8.

［6］張 路，李 偉，文紅梅，等.LC-MS／MS測(cè)定大鼠血漿中l(wèi)iguzinediol濃度及藥動(dòng)學(xué)［J］.中國(guó)新藥雜志，2013，09：1024－8，1046.

［6］Zhang L，Li W，Wen H M，et al.An LC-MS／MSmethod for determining liguzinediol in rat plasma and studying its pharmacokinetics［J］.Chin J New Drugs，2013，09：1024－8，1046.

［7］單晨嘯，李 偉，文紅梅，等.Liguzinediol大鼠灌胃給藥的絕對(duì)生物利用度［J］.中國(guó)新藥與臨床雜志，2012，11：668－71.

［7］Shan C X，Li W，Wen H M，et al.Study on absolute bioavailability of liguzinediol in rats［J］.Chin J New Drugs Clin Rem，2012，11：668－71.

［8］Shan C X，Li W，Wen H M，et al.Identification of liguzinediol metabolites in rats by ultra performance liquid chromatography／quadrupole-time-of-flight mass spectrometry［J］.J Pharm Biomed Anal，2012，62（3）：187－90.

［9］彭真珍，原 梅，溫 泉，等.四氫小檗紅堿及其前藥的比格犬藥代動(dòng)力學(xué)研究［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（7）：1010－4.

［9］Peng Z Z，Yuan M，Wen Q，et al.Pharmacokinetic study of tetrahydroberberrabine and its prodrug in Beagle dogs［J］.Chin Pharmacol Bull，2012，28（7）：1010－4.

［10］胡會(huì)青，王永利，繩晶偉，等.鹽酸雙苯氟嗪在Beagle犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2009，25（8）：1107－10.

［10］Hu H Q，Wang Y L，Sheng J W，et al.Pharmacokinetics of dipfluzine hydrochloride in Beagle dogs after single intravenous dose［J］.Chin Pharmacol Bull，2009，25（8）：1107－10.