劉 劍 閆建坤

1.內(nèi)蒙古自治區(qū)紅十字會(huì)包頭朝聚眼科醫(yī)院藥械科，包頭 014060；2.包頭市衛(wèi)生學(xué)?；A(chǔ)科，包頭 014030

天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

劉 劍1閆建坤2

1.內(nèi)蒙古自治區(qū)紅十字會(huì)包頭朝聚眼科醫(yī)院藥械科，包頭 014060；2.包頭市衛(wèi)生學(xué)校基礎(chǔ)科，包頭 014030

目的 建立天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 方法 采用紫外-可見分光光度法測(cè)定處方中天麻素的含量。 結(jié)果 由紫外掃描可知天麻素在220 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而氯化鈉及其他輔料在220 nm處幾乎無(wú)吸收，不干擾本試驗(yàn)。 結(jié)論 采用紫外-可見分光光度法，方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量控制方法。

天麻素氯化鈉注射液；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；紫外-可見分光光度法

天麻素注射液［1-5］主要成分為名貴藥材天麻［6-9］的有效單體天麻素，具有鎮(zhèn)靜，抗驚厥，抗癲癇，鎮(zhèn)痛，增加腦血流量，改善椎-基底動(dòng)脈、小腦前下動(dòng)脈、小腦后下動(dòng)脈、密路動(dòng)脈及內(nèi)耳供血不足，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，促進(jìn)心肌細(xì)胞能量代謝的功能，臨床上被廣泛應(yīng)用于眩暈［10-15］（梅尼埃病、藥毒性眩暈、前庭神經(jīng)元炎、椎-基底動(dòng)脈供血不足等）、神經(jīng)痛（三叉神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛、枕大神經(jīng)痛等）、頭痛（神經(jīng)衰弱及神經(jīng)衰弱綜合征、血管性頭痛、緊張性頭痛、腦外傷綜合征、偏頭痛等）及癲癇的輔助治療。本試驗(yàn)采用紫外-可見分光光度法對(duì)制劑中所含的天麻素進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

UV-754紫外分光光度計(jì)（上海電子光學(xué)技術(shù)研究所）；天麻素氯化鈉注射液供試品由內(nèi)蒙古自治區(qū)紅十字會(huì)包頭朝聚眼科醫(yī)院制劑室生產(chǎn)：規(guī)格100 ml，天麻素0.2 g與氯化鈉0.9 g（批號(hào)為110106、110107、110108）；對(duì)照品天麻素由中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供：規(guī)格20 mg，批號(hào)110807-201104。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

取本品目檢，結(jié)果3批樣品性狀均為無(wú)色澄明液體。

2.2 鑒別

①本品為以氯化鈉為溶劑的注射液，參照氯化鈉注射液項(xiàng)下的鑒別操作如下：取本品適量，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加稀硝酸酸化后,沉淀復(fù)生成。取處方中除氯化鈉外的樣品適量，同法操作，溶液澄清無(wú)沉淀。取本品適量，置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤(rùn)，緩緩加熱，即發(fā)生氯氣，能使用水濕潤(rùn)的碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色。3批樣品均呈正反應(yīng)。取處方中除氯化鈉外的樣品適量，同法操作，無(wú)氣體產(chǎn)生。

②參照天麻素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，取本品適量(相當(dāng)于天麻素10 mg)，加熱揮至快干，加硫酸 2 ml，溶液呈櫻桃紅色。取氯化鈉溶液及輔料適量，同法操作，結(jié)果可見3批樣品的鑒別1及鑒別2均呈正反應(yīng)（表1）。

表1 天麻素氯化鈉注射液的鑒別

③天麻素注射液采用紅外鑒別，考慮到本品為注射劑，紅外鑒別易受輔料的干擾，而天麻素的分子結(jié)構(gòu)中有特殊的紫外發(fā)色團(tuán)-苯環(huán)，故考慮將其特征紫外吸收作為一項(xiàng)鑒別，具體操作如下：取含量測(cè)定項(xiàng)下的溶液，照紫外-可見分光光度法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅣA）測(cè)定3批樣品及對(duì)照品的最大吸收波長(zhǎng)。3批樣品均為λmax1=220 nm，λmax2=269 nm，在220、269 nm波長(zhǎng)處有最大吸收（表1）。

2.3 檢查

參照中國(guó)藥典2010年版二部的有關(guān)規(guī)定，對(duì)本品進(jìn)行pH值、溶液的澄清度與顏色、可見異物、不溶性微粒、裝量、細(xì)菌內(nèi)毒素、無(wú)菌等項(xiàng)目的檢查。

2.3.1 pH值

取本品，依法測(cè)定pH值（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅥH），結(jié)果3批樣品pH值為5.7、5.8、5.7。本品pH值均在5.0～6.0范圍內(nèi)，考慮到人體的耐受性和生產(chǎn)的可控性，將本品的pH值定為：5.0～7.0。

2.3.2 不溶性微粒

取本品，依法檢查（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅨC），結(jié)果3批樣品不溶性微粒檢查均符合規(guī)定。

2.3.3 可見異物

取本品，依法檢查（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅨH），結(jié)果3批樣品可見異物檢查均符合規(guī)定。

2.3.4 裝量

取本品，依法檢查（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅩF），結(jié)果3批樣品裝量檢查均符合規(guī)定。

2.3.5 重金屬

取本品20 ml，加醋酸鹽緩沖液（pH值3.5）2 ml與水使成25 ml，依法檢查（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅧH第一法），結(jié)果三批樣品重金屬檢查均＜10/ 1000萬(wàn)。

2.3.6 細(xì)菌內(nèi)毒素

2.3.6.1 限值確定 參考中國(guó)藥典2010年版二部氯化鈉注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的限值規(guī)定為0.5 EU/ml，因此本品的限值定為0.5 EU/ml。

2.3.6.2 干擾試驗(yàn) 取供試品，用上述兩個(gè)廠家的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)（照中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅪE項(xiàng)下方法進(jìn)行），結(jié)果天麻素氯化鈉注射液對(duì)鱟試劑的凝集反應(yīng)無(wú)增強(qiáng)或抑制作用，不干擾測(cè)定。

2.3.6.3 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 供試品溶液的制備：取本品，照細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅪE）進(jìn)行測(cè)定，3批樣品細(xì)菌內(nèi)毒素均＜0.5 EU/ml，訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.3.7 無(wú)菌

取本品，照薄膜過濾法，依法檢查（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅪH），結(jié)果3批樣品無(wú)菌檢查均符合規(guī)定。

2.4 含量測(cè)定

參考國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)天麻素注射液（WS1-XG-023-2001）和中國(guó)藥典2010年版二部“氯化鈉注射液”，對(duì)本品中的天麻素和氯化鈉進(jìn)行含量測(cè)定。

2.4.1 天麻素含量測(cè)定方法

照天麻素注射液（WS1-XG-023-2001），用紫外-可見分光光度法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅣA）測(cè)定。

2.4.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取天麻素原料適量，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至16 μg/ml，照紫外-可見分光光度法 （中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅣA）測(cè)定。由紫外掃描圖可知，本品在220 nm與269 nm波長(zhǎng)處有最大吸收波長(zhǎng)。參照天麻素注射液（WS1-XG-023-2001），將本試驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)定為220 nm。

2.4.1.2 氯化鈉及其他輔料的干擾 取處方中除天麻素外的等比例的輔料適量，照紫外-可見分光光度法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅣA）測(cè)定。由紫外掃描圖可知，氯化鈉及其他輔料在220 nm處幾乎無(wú)吸收，不干擾本試驗(yàn)。

2.4.1.3 線性關(guān)系試驗(yàn) 取天麻素對(duì)照品16.2 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1、2、4、5、8 ml，分置100 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，取上述5種溶液照分光光度法（中國(guó)藥典2005年版藥典二部附錄ⅣA），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以其吸收度（A）為縱坐標(biāo)，其濃度（C）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程A=1868.2C+1049.9，結(jié)果表明r為0.9998，天麻素在3.24～25.92 μg/ml濃度范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品適量 （約相當(dāng)于天麻素200 mg），置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。于室溫下放置8 h，分別于0、1、2、4、6、8h測(cè)定，取供試品溶液照分光光度法（中國(guó)藥典2010年版藥典二部附錄ⅣA），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，考察樣品含量穩(wěn)定性，結(jié)果表明8 h內(nèi)測(cè)定方法穩(wěn)定。

2.4.1.5 精密度試驗(yàn) 取110106批樣品適量 （約相當(dāng)于天麻素200 mg），置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取供試品溶液照分光光度法 （中國(guó)藥典2010年版藥典二部附錄ⅣA），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果表明本法精密度良好，天麻素的RSD為0.16%。

2.4.1.6 回收率試驗(yàn) 精密稱取天麻素約為12、16、19 mg（每組稱取3個(gè)平行樣），分置100 ml量瓶中，按處方量加入輔料，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，各精密移取2 ml分置25 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取經(jīng)105℃減壓干燥3 h的天麻素對(duì)照品適量，按同法制成每毫升中含16 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液，取供試品溶液及對(duì)照品溶液，照分光光度法（中國(guó)藥典2010年版藥典二部附錄ⅣA），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，結(jié)果表明本品天麻素含量測(cè)定回收率良好（表2）。

表2 本品天麻素含量回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.1.7 含量測(cè)定 精密量取本品20 ml，置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，即制得供試品溶液。另精密稱取經(jīng)105℃減壓干燥3 h的天麻素對(duì)照品適量，加0.9%的氯化鈉溶液制得每毫升中含16 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液，取上述兩種溶液照分光光度法 （中國(guó)藥典2010年版藥典二部附錄ⅣA），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算本品中天麻素的含量，結(jié)果3批樣品天麻素含量為101.47%、100.26%、102.01%。以上數(shù)據(jù)表明，3批樣品天麻素含量均在 90.0%～110.0%范圍內(nèi)，訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.4.2 氯化鈉

取本品，照中國(guó)藥典2010年版“氯化鈉注射液”含量測(cè)定方法對(duì)本品的氯化鈉進(jìn)行含量測(cè)定。

2.4.2.1 測(cè)定方法 精密量取本品10 ml，置100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。每毫升的硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于5.844 mg的氯化鈉。

2.4.2.2 天麻素及輔料的干擾試驗(yàn) 取處方中除氯化鈉外的其他組分10 ml，加水40 ml溶解并稀釋至刻度，2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。所耗硝酸銀滴定液的量為0.01 ml，表明天麻素及輔料在此試驗(yàn)中幾乎無(wú)干擾。

2.4.2.3 線性關(guān)系試驗(yàn) 取氯化鈉約1.4023 g，置100 ml的潔凈量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1、2、4、5、8 ml，置不同的100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，精密量取上述溶液10 ml，置不同的100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定?？鄢瞻?，以滴定體積為縱坐標(biāo)，氯化鈉濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果r為0.9999，表明氯化鈉在70.4～105.6 mg范圍內(nèi)與滴定體積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品（批號(hào)：110106），照上述方法重復(fù)測(cè)定6次含量，結(jié)果表明，本法重復(fù)性較好，氯化鈉的RSD=0.10%。

2.4.2.5 回收率試驗(yàn) 取氯化鈉為72、90、108 mg（每組稱取3個(gè)平行樣），分置100 ml錐形瓶中，按處方量加入天麻素及輔料，加水20 ml溶解，再加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定?？鄢瞻祝?jì)算回收率。結(jié)果可見氯化鈉回收率良好（表3）。

表3 本品氯化鈉含量測(cè)定回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.2.6樣品測(cè)定 精密量取本品10 ml，置100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定，計(jì)算氯化鈉的含量。每毫升硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于5.844 mg的氯化鈉。結(jié)果3批樣品氯化鈉含量為101.25%、102.00%、100.41%，表明3批樣品氯化鈉含量均在90.0%～110.0%范圍內(nèi)，訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

參照“天麻素注射液”國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（WS1-XG-023-2001）中含量測(cè)定項(xiàng)，對(duì)天麻素的含量測(cè)定方法進(jìn)行設(shè)計(jì)并經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證可行；參照中國(guó)藥典2010年版氯化鈉注射液標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)本品的氯化鈉進(jìn)行含量測(cè)定方法設(shè)計(jì)，并經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證可行，方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量控制方法。

［1］WS1-XG-023-2001.天麻素注射液［S］.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2009.

［3］李捷偉，劉吉祥.常用藥物輔料手冊(cè)［M］.上海：第二軍醫(yī)大學(xué)出版社，2000.

［4］畢殿洲.藥劑學(xué)［M］.4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.

［5］呂國(guó)平，王春芹，蔡中琴.天麻素注射液的藥理及臨床研究［J］.中草藥，2002，33（5）：附3～附5.

［6］張淑芹，朱虹，張永會(huì).天麻的藥理作用及臨床應(yīng)用［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，1995，（S1）：79.

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［8］金文姍，田德薔.天麻的化學(xué)和藥理研究概況［J］.中藥研究與信息，2000，2（6）：21-23.

［9］范玉奇，李文蘭，王艷萍，等.天麻化學(xué)成分及藥理性質(zhì)研究的進(jìn)展［J］.藥品評(píng)價(jià)，2005，2（4）：309-312.

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Quality standard study of gastrodin sodium chloride injection

LIU Jian1YAN Jian-kun2
1.Department of Drug and Equipment,Baotou Chaoju Ophthalmic Hospital of Red Cross in Inner Mongolia Autonomous Region,Baotou 014060,China;2.Basic Science,Health School of Baotou City,Baotou 014030,China

ObjectiveTo establish the quality standard of gastrodin sodium chloride injection.MethodsGastrodin content in the formulation was quantitatively determined by ultraviolet-visible spectrophotometry.ResultsThe gastrodin had maximum absorbance at 220 nm by ultraviolet-visible scanning,while the sodium chloride and other auxiliary material had no obvious absorbance and no interference for this research.ConclusionUltraviolet-visible spectrophotometry is a easy,precise and repeatable method.It can used as a quality control method for the gastrodin sodium chloride injection.

Gastrodin sodium chloride injection;Quality standard;Ultraviolet-visible spectrophotometry

R927.11

A

1674-4721（2014）10（c）-0008-04

2014-08-11本文編輯：李亞聰）