嚴(yán)君潔

血脂檢驗(yàn)對于臨床高脂血癥和異常脂蛋白血癥的診斷及動脈粥樣硬化﹙AS﹚性心血管﹙如冠心病﹚的危險(xiǎn)評估和防治具有重要意義，并已經(jīng)滲透應(yīng)用于其它諸多臨床相關(guān)專業(yè)疾病的研究。我國血脂、脂蛋白及其與AS關(guān)系的研究雖然起步較晚，但改革開放的20多年以來，在血脂的基礎(chǔ)與臨床研究等方面發(fā)展迅速。血脂檢驗(yàn)及其臨床應(yīng)用已越來越受到臨床各學(xué)科的重視。本文旨在探討血脂檢驗(yàn)的方法學(xué)，試劑的選擇原則與血脂測定的技術(shù)指標(biāo)，分析前的變異對血脂檢驗(yàn)結(jié)果的影響進(jìn)行淺析。

1 血脂檢驗(yàn)的方法學(xué)

臨床血脂檢驗(yàn)主要包括血清總膽固醇﹙TC﹚、甘油三酯﹙TG﹚、高密度脂蛋白膽固醇﹙HDL-C﹚、低密度脂蛋白膽固醇﹙LDL-C﹚、載脂蛋白A1、載脂蛋白B、脂蛋白﹙a﹚測定。

1.1血清TC測定 血清TC測定一般可分為化學(xué)法和酶法兩大類。目前國內(nèi)建議酶法如膽固醇氧化酶-過氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法作為臨床實(shí)驗(yàn)室測定TC的常規(guī)方法。

1.2血清TG測定 二氯甲烷-硅酸-變色酸法是美國疾病預(yù)防與疾控中心﹙CDC﹚測定TG采用的參考方法。建議酶法〔如甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶-4氨基安替比林和酚法〕作為臨床實(shí)驗(yàn)室血清TG的常規(guī)方法。

1.3血清 HDL-C測定 超速離心結(jié)合ALBK法為HDL-C測定的參考方法。建議勻相測定法作為臨床實(shí)驗(yàn)室測定血清HDL-C的常規(guī)方法。

1.4血清HDL-C測定 超速離心結(jié)合ALBK法為LDL-C測定的參考方法。建議勻相測定法作為臨床實(shí)驗(yàn)室測定血清LDL-C的常規(guī)方法。

1.5血清apoA1和apoB測定 目前尚無公認(rèn)的血清apoA1和apoB測定的參考方法。建議免疫濁度法作為臨床實(shí)驗(yàn)室測定血清的常規(guī)方法。

1.6血清Lp﹙a﹚測定 目前尚無公認(rèn)的血清Lp﹙a﹚測定的參考方法。建議免疫濁度法作為臨床實(shí)驗(yàn)室測定血清Lp﹙a﹚的常規(guī)方法。

2 血脂檢驗(yàn)試劑的選擇原則與測定的技術(shù)指標(biāo)

2.1不精密度與不準(zhǔn)確度 各實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血脂檢驗(yàn)并非要求統(tǒng)一的測定方法，而是要求對同一批標(biāo)本血脂測定值取得基本一致，衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心及各省檢驗(yàn)中心均要求各縣級醫(yī)療單位實(shí)驗(yàn)室參加其組織的室間質(zhì)評活動。要求測定值在可允許的"不精密度"﹙用變異系數(shù)CV表示﹚及不準(zhǔn)確度﹙用偏差表示﹚范圍內(nèi)。對于TC、TG、HDC-C和LDCL-C 4項(xiàng)，建議不精密度應(yīng)分別不大于3%、5%、4%、4%，不準(zhǔn)確度應(yīng)盡量分別不大于±3%、±5%?！?%、±4%。對于apoA1、apoB和Lp﹙a﹚3項(xiàng)，建議不精密度應(yīng)分別不大于3%、3%和4%，不準(zhǔn)確度應(yīng)分別不大于±5%、±5%和±10%。

2.2靈敏度 酶法測定血清TC顯色劑用酚時(shí)，TC5.17mmoL∕L時(shí)的吸光度約0.30～0.35，故A500nm=0.005時(shí)的TC濃度約0.08nmol/L.酶法測定TG靈敏度為2mmol/LTG的吸光度A500nm≧0.2.勻相測定法測定HDL-C、LDL-C時(shí)，最小檢測水平至少為0.01mmol/L。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB檢測下限至少為0.5g/L，Lp﹙a﹚至少為5mg/L。

2.3可檢測上線 酶法測定血清TC血清與酶試劑用量之比為1：100時(shí)，測定上線為13mmol/L。酶法測定TG線性至少應(yīng)達(dá)11.3mmol/L。勻相測定法測定HDL-C、LDL-C時(shí)線性至少分別應(yīng)達(dá)2.59mm/L和7.77mmol/L。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB線性至少不低于2.0g/L，Lp﹙a﹚至少應(yīng)達(dá)800mg/L。

2.4干擾因素 酶法測定TC時(shí)，血紅蛋白高于2g/L會引起正干擾，膽紅素﹥0.1g/L時(shí)有明顯負(fù)干擾。酶法測定TG干擾因素與膽固醇測定類同。膽紅素﹥100umol/L時(shí)出現(xiàn)負(fù)干擾。血紅蛋白的干擾是復(fù)雜的。它本身的紅色會引起正干擾，溶血后，紅細(xì)胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油產(chǎn)生負(fù)干擾。當(dāng)Hb﹤1g/L時(shí)反映為負(fù)干擾，Hb﹥1g/L時(shí)反映出正干擾，但Hb≤2g/L時(shí)干擾不顯著。明顯溶血標(biāo)本不宜作TG測定。TG﹤5.65mmol/L、膽紅素﹤513umol/L、Hb﹤5g/L時(shí)，對勻相測定法測定HDL-C、LDL-C，免疫濁度法測定血清apoA1、apoB和Lp﹙a﹚測定結(jié)果基本無干擾。

2.5試劑穩(wěn)定性 干粉試劑未開瓶2～8℃應(yīng)至少穩(wěn)定1年。復(fù)溶后的膽固醇和TG酶試劑在2～8℃應(yīng)至少穩(wěn)定兩天。在此期間出現(xiàn)肉眼可辨的粉紅色建議不要使用。液體試劑未開封的試劑盒在2～8℃應(yīng)至少穩(wěn)定6個(gè)月，開封后應(yīng)至少可保存1個(gè)月。

2.6反應(yīng)速度 酶法測定血清TC反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)37℃不應(yīng)超過5min。酶法測定TG37℃不應(yīng)超過10min.勻相測定法測定HDL-C和LDL-C反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)時(shí)間37℃不應(yīng)超過10min。免疫濁度法測定血清apoA1、apoB和Lp﹙a﹚可根據(jù)自動分析儀反應(yīng)曲線確定讀取終點(diǎn)時(shí)間，一般以8～10min為宜。

3 樣本的采集與處理

3.1受檢者的準(zhǔn)備 除TC測定不一定用空腹血外，測定TG、Lp與apoA1、apoB時(shí)受檢者﹙體檢對象或患者﹚應(yīng)在禁食﹙可少量飲水﹚至少12h后抽血。24h內(nèi)不飲酒，以免影響TG水平。對于體檢對象抽血前應(yīng)有兩周時(shí)間保持平時(shí)的飲食習(xí)慣，近期內(nèi)體重穩(wěn)定，無急性病、外傷、手術(shù)等意外情況。妊娠后期各項(xiàng)血脂指標(biāo)都會增高，應(yīng)在產(chǎn)后終止哺乳后3個(gè)月檢查才能反映其基本血脂水平。

3.2靜脈采血 除非是臥床的患者，一般在采血時(shí)取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，影響血脂水平。例如站立5min可使血脂濃度提高5%，15min提高16%，故在抽血前至少應(yīng)靜坐5min。靜脈穿刺過程止血帶使用不應(yīng)超過1min。靜止阻滯5min可使TC增高10%～15%。

3.3抗凝劑 我國生化實(shí)驗(yàn)室多用血清作血脂分析。如用血漿，多主張用EDTA.2Na抗凝劑﹙1mg/ml血﹚，EDTA抗凝血漿中的TC和TG水平比血清約低3%。EDTA濃度越高血漿中TC和TG偏低越明顯。

3.4標(biāo)本處理 血標(biāo)本應(yīng)盡快送往檢驗(yàn)科，室溫下放置30～45min后離心，放置時(shí)間不得超過3h。血清必須吸出，轉(zhuǎn)移至有蓋小試管中﹙或有封口膜防止水分揮發(fā)﹚，如不能當(dāng)天測定，可暫存4℃冰箱，至少可穩(wěn)定4d。如需長期保存，用作TC測定者-20℃已足夠，用作TG、Lp、apo測定者標(biāo)本最好保存在-70℃，不要反復(fù)冰凍與融化。編輯/劉小燕