李璇 王海曙 林憲如 王守東 吳娜

【摘 要】目的：探討基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-9、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子（TIMP）-1在診斷不穩(wěn)定性冠脈病變中的價(jià)值。方法：采用夾心酶聯(lián)免疫法測(cè)定42例急性冠脈綜合征（ACS）患者和29例穩(wěn)定性心絞痛（SAP）患者血清MMP-9、TIMP-1水平進(jìn)行對(duì)比分析，對(duì)ACS中的不穩(wěn)定性心絞痛（UAP）亞組及SAP組患者血清MMP-9及TIMP-1水平與冠脈病變Califf危險(xiǎn)積分作相關(guān)分析，計(jì)算MMP-9及TIMP-1設(shè)定值診斷急性冠脈綜合征的敏感性及特異性。結(jié)果： ACS組患者M(jìn)MP-9較SAP組明顯增高（P<0.01），而TIMP-1則較SAP組顯著降低（P<0.01）；UAP組和SAP組患者血清MMP-9與冠脈病變積分均呈明顯正相關(guān)（P<0.01），兩組患者血清TIMP-1與冠脈病變積分均呈明顯負(fù)相關(guān)（P<0.01）；若以MMP-9>500ng/ml或TIMP-1<200ng/ml作為診斷ACS的指標(biāo)，則診斷的敏感性均為85.7%，特異性均為82.8%。結(jié)論：MMP-9、TIMP-1與急性冠脈綜合征有關(guān)，可作為鑒別冠心病患者斑塊是否穩(wěn)定的診斷指標(biāo)之一。

【關(guān)鍵詞】基質(zhì)金屬蛋白酶-9；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1；急性冠脈綜合征；穩(wěn)定性心絞痛；不穩(wěn)定斑塊

【中圖分類號(hào)】R541.4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）02-0560-02

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一組鋅離子依賴性的蛋白水解酶家族，是細(xì)胞外基質(zhì)降解及重構(gòu)的重要介質(zhì)。初步研究表明，MMPs與動(dòng)脈粥樣斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)[1，2]。本文探討MMP-9及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）與急性冠脈綜合征患者冠脈病變的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象：包括急性冠脈綜合征（ACS）組和穩(wěn)定性心絞痛（SAP）組，所有病例均符合2000年AHA/ACC急性冠脈綜合征指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.1.1 ACS組：選擇收住我院心內(nèi)科的ACS患者42例，男性27例，女性15例，年齡33～78歲，平均年齡63.7±12.1歲。其中不穩(wěn)定性心絞痛（UAP）亞組患者21例，男性13例，女性8例，年齡33～75歲，平均年齡62.1±12.6歲。

1.1.2SAP組：為同期收住我科的SAP患者，計(jì)29例，男性18例，女性11例，年齡36～76歲，平均年齡61.3±13.3歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)本采集 所有患者入院后次日清晨（24小時(shí)內(nèi)）抽取外周靜脈血4ml，注入標(biāo)有基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1 （TIMP-1）的試管中，30分鐘內(nèi)送標(biāo)本至實(shí)驗(yàn)室，以1000x g離心15分鐘，抽取血漿置-20℃低溫冰箱統(tǒng)一編號(hào)保存，血標(biāo)本收集成批后同一測(cè)定MMP-9及TIMP-1的水平。

1.2.2標(biāo)本測(cè)定：MMP-9、TIMP-1測(cè)定：均采用夾心酶聯(lián)免疫法測(cè)定，測(cè)定步驟為：⑴預(yù)先分別于兩測(cè)定管內(nèi)加入MMP-9、TIMP-1測(cè)定稀釋液100μl；⑵分別于兩測(cè)定管內(nèi)加MMP-9、 TIMP-1樣品血清和標(biāo)準(zhǔn)品各100μl，在振板上室溫下孵育2小時(shí)；⑶分別用400μl緩沖液沖4遍；⑷分別加MMP-9 HRP多抗、TIMP-1抗體對(duì)照品200μl，在振板上室溫孵育1小時(shí)；⑸400μl緩沖液沖4遍；⑹分別加顯色劑200μl，在benchtop上室溫孵育30分鐘（避光）；⑺分別加終止液50μl，30分鐘內(nèi)，450nm讀數(shù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS11.0軟件，各組數(shù)據(jù)以x±s表示，用t檢驗(yàn)；相關(guān)分析采用直線相關(guān)，P<0.05為差異有顯著性，P<0.01為差異有極顯著性。

2 結(jié)果

2.1 ACS組與SAP患者吸煙率、糖尿病患病率、高血壓患病率及各項(xiàng)血脂指標(biāo)比較差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.2血清MMP-9及TIMP-1水平與冠心病類型的關(guān)系：見(jiàn)表2。由表中可見(jiàn)，ACS組MMP-9較SAP組明顯增高（P<0.01），而TIMP-1則較SAP組顯著降低（P<0.01）。

MMP-9是明膠酶中的一種，是MMPs中最常見(jiàn)的酶之一。實(shí)驗(yàn)證明，粥樣斑塊中的巨噬細(xì)胞可分泌多種MMPs，如MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-12、MMP-13等[5， 6]。不僅如此，巨噬細(xì)胞還分泌多種細(xì)胞因子，如IL-1β、TNF–α，以自分泌和旁分泌形式作用于內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞。循環(huán)中的單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附，在血管壁中遷移、吞噬脂質(zhì)衍化為巨噬泡沫細(xì)胞的過(guò)程中可分泌大量的MMPs。病理研究顯示人冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊MMP-1、MMP-2、MMP-3及MMP-9表達(dá)均有增加[5]。TIMP-1是一種糖基化蛋白，主要與MMP-1、MMP-9結(jié)合形成1：1化學(xué)復(fù)合物[7]，從而阻斷纖維帽的降解。本研究采用美國(guó)R&D Systems公司的MMP-9、TIMP-1試劑盒及夾心酶聯(lián)免疫法作為測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)ACS組與SAP組不但MMP-9、TIMP-1水平明顯不同，且兩組重疊極少、有分開(kāi)趨勢(shì)，因而認(rèn)為，確定某一MMP-9及TIMP-1界限值作為區(qū)分ACS與SAP病變是可行的。本研究中，選擇MMP-9>500ng/ml或TIMP-1<200ng/ml作為診斷冠脈病變不穩(wěn)定性的指標(biāo)，則診斷的敏感性均為85.7%，特異性均為82.8%。由于這兩項(xiàng)指標(biāo)的診斷敏感性和特異性均較高，我們認(rèn)為，可將其作為臨床診斷不穩(wěn)定性斑塊的指標(biāo)，以增加臨床對(duì)不穩(wěn)定性斑塊的檢出率。

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