李旭蘭 周軍 陳燁 石恒林

【摘 要】目的：研究肝大部切除后兔胰島素抵抗的變化，初步探討蛇床子素（Osthole， Ost）對(duì)創(chuàng)傷后胰島素抵抗的影響。方法：將32只家兔隨機(jī)分為4組（n=8）：假手術(shù)（SO）組、肝大部切除（PH）組和Ost不同劑量組（5和10 mg.kg-1）。分別于麻醉后即刻（T0）、術(shù)后6 h和24 h （T1～T2）采集靜脈血，測(cè)定血糖、血清胰島素、腫瘤壞死因子（TNF）-α和白細(xì)胞介素（IL）-6，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)（ISI）及胰島素抵抗指數(shù)（IRI）。結(jié)果：與T0時(shí)比較，PH和Ost組T1時(shí)刻TNF-α、IL-6、血糖、胰島素水平及IRI均升高，ISI下降（P <0.05）；與SO組比較，T1時(shí)PH組和Ost組TNF-α、IL-6、血糖、胰島素水平及IRI均升高，ISI下降（P < 0.05）；與PH組比較，T1～T2時(shí)Ost各組TNF-α、IL-6、血糖、胰島素水平及IRI均降低，ISI升高（P <0.05或0.01）。結(jié)論：肝大部切除后炎性因子增加，產(chǎn)生明顯的胰島素抵抗。蛇床子素對(duì)其具有改善作用，可能與抑制促炎因子釋放有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】蛇床子素；肝葉切除；促炎因子；胰島素抵抗

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）02-0426-02

胰島素抵抗（ insulin resistance， IR）是指胰島素的外周靶器官對(duì)內(nèi)源性或外源性胰島素的敏感性和反應(yīng)性降低，導(dǎo)致生理劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常的生理效應(yīng)，其顯著特點(diǎn)為高糖血癥。創(chuàng)傷早期可引起明顯的IR，其對(duì)機(jī)體的干擾已成為圍術(shù)期迫切解決的問(wèn)題[1]。促炎細(xì)胞因子在其中起了重要作用，研究發(fā)現(xiàn)[2]蛇床子素（Osthole， Ost）及其衍生物有顯著的抗炎效應(yīng)，對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)具有一定的調(diào)節(jié)作用。本研究旨在探討肝大部切除IR的變化情況及Ost的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑

蛇床子素由四川成都龍泉高科天然藥業(yè)有限公司提供（質(zhì)量分?jǐn)?shù)>96 %） ，實(shí)驗(yàn)前用N-2甲基甲酰胺溶解，聚山梨酯-80助溶后用生理鹽水稀釋至所需濃度；溶劑對(duì)照液含N-2甲基甲酰胺-聚山梨酯-80-生理鹽水（1：1：8）。腫瘤壞死因子（TNF）-α，白細(xì)胞介素（IL）-6的ELISA試劑盒購(gòu)自南京建成生物技術(shù)有限公司，其它試劑為市售分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

32只健康成年普通級(jí)家兔，體重1.8-2.5kg（平均2.1 kg），雌雄各半，由瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（合格證號(hào)： SCXK（川）-201137）。實(shí)驗(yàn)前，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。將實(shí)驗(yàn)家兔用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組（n=8）：假手術(shù)（SO）組；肝大部切除（PH）組； 蛇床子素（Ost） 5和10 mg.kg-1組。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)器材

血糖測(cè)定采用One-Touch Ⅱ型微型血糖儀；血清胰島素測(cè)定采用ARIMZYMEⅡ型內(nèi)分泌定量測(cè)定儀；光學(xué)酶標(biāo)儀 ；紫外分光光度計(jì)；超速低溫離心機(jī)。

1.4 方法

1.4.1 肝大部切除模型的制備

PH手術(shù)均在上午8～10時(shí)進(jìn)行，術(shù)前動(dòng)物禁食12 h，自由飲水。左耳緣靜脈置管，25 g/L戊巴比妥鈉（1 ml/kg）經(jīng)左耳緣靜脈注射麻醉，無(wú)菌手術(shù)操作。PH手術(shù)依據(jù)既往研究[3]方法，腹部正中7-8cm切口，行肝左葉1/2切除術(shù)（以葉間切跡為標(biāo)準(zhǔn)），關(guān)閉腹腔。SO組翻動(dòng)肝左葉，不作肝葉切除，其余同PH組，然后關(guān)閉腹腔。術(shù)后保溫并自由進(jìn)食、水。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)給藥及標(biāo)本采集

Ost組在PH 1 h前給予耳緣靜脈注射Ost 5或10 mg.kg-1，共2 ml；SO組、PH組給予耳緣靜脈注射等體積的溶劑。每組麻醉后即刻（T0），術(shù)后6（T1）和24 h（T2）共3個(gè)動(dòng)態(tài)觀察時(shí)間點(diǎn)采集靜脈血。

1.4.3 TNF-α、IL-6和血糖、血清胰島素的檢測(cè)

分別在各觀察時(shí)點(diǎn)測(cè)定各組動(dòng)物TNF-α、IL-6和血糖、血清胰島素。每次取耳緣靜脈血1滴用One Touch Ⅱ型微型血糖儀測(cè)定血糖；另取血約5 ml，4℃下內(nèi)離心（ 3000r /min，時(shí)間20min），提取上層血清，凍存管密封，保存于-80℃冰箱中，備檢測(cè)。采用ELISA法測(cè)定TNF-α及IL-6，放射免疫法測(cè)定血清胰島素。胰島素敏感指數(shù)（ISI）以ISI= ln[1/（血糖×胰島素）]計(jì)算，胰島素抵抗指數(shù)（IRI）以空腹血糖×空腹胰島素/22.5計(jì)算[4，5]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ±s）表示，組間差異采用重復(fù)測(cè)量方差分析， 兩兩間比較采用q檢驗(yàn)，P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清TNF-α、IL-6含量變化

T0時(shí)各組血清TNF-α、IL-6差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）；與T0時(shí)比較，T1時(shí)點(diǎn)PH組及Ost組TNF-α、IL-6均升高（P <0.01）；與SO組比較，T1時(shí)PH組和Ost組升高，與PH組比較，T1～T2時(shí)Ost各組下降（ P <0.05或0.01），Ost 10 mg.kg-1組下降更明顯，見表1。

2.2 血糖、胰島素、ISI及IRI的變化

T0時(shí)各組血糖、胰島素水平、ISI及IRI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）；與T0時(shí)比較，PH組及Ost組T1時(shí)血糖、胰島素及IRI均升高，ISI下降（P <0.01）；與SO組比較，T1時(shí)PH組和Ost組血糖、胰島素及IRI升高，ISI下降（P <0.05或0.01）；與PH組比較，T1～T2時(shí)Ost組血糖、胰島素及IRI降低，ISI升高（P <0.05或0.01），Ost 10 mg.kg-1組尤為明顯。

3 討論

胰島素抵抗是指胰島素協(xié)助機(jī)體靶細(xì)胞攝取和利用葡萄糖的能力下降，是胰島素生理功能受損的表現(xiàn)。持續(xù)高血糖可增加術(shù)后感染的機(jī)會(huì)，還可引起機(jī)體分解代謝增加、負(fù)氮平衡、創(chuàng)口愈合不良及感染率升高等。同時(shí)高血糖和胰島素還可以使有效血容量增加，血管收縮，血壓增高，紅細(xì)胞聚集增強(qiáng)，微血栓形成，增加了心腦血管事件的發(fā)生[1，6]。

手術(shù)和麻醉刺激對(duì)機(jī)體造成強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致應(yīng)激性糖代謝障礙引發(fā)高血糖癥和應(yīng)激性胰島素抵抗。近年手術(shù)創(chuàng)傷引起的IR越來(lái)越受到學(xué)者們的重視，IR發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜， 其中目前已知的促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-6 參與了發(fā)生及發(fā)展，是胰島素抵抗發(fā)生的重要炎性介質(zhì)[1，7]。近年來(lái)研究表明[8] ： TNF-α及IL-6可通過(guò)抑制胰島素受體自身磷酸化及受體底物-1（IRS-1） 的磷酸化， 干擾胰島素信號(hào)傳導(dǎo)； 同時(shí)還使葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ GluT 4） 發(fā)生易位， 使葡萄糖轉(zhuǎn)移發(fā)生障礙。大量研究也證實(shí)TNF-α和IL-6的釋放與手術(shù)應(yīng)激有關(guān)[1，9]。

本研究結(jié)果顯示：與SO組比較，PH組及Ost組同時(shí)點(diǎn)的TNF-α和IL-6 在T1明顯升高 （P <0.05或0.01）。在炎性因子增高的同時(shí)，血糖及胰島素也顯著升高，同時(shí)伴有ISI下降， IRI 的升高（ P <0.05或0.01），表明肝大部切除術(shù)導(dǎo)致促炎因子TNF-α、IL-6 增加和胰島素抵抗發(fā)生。與PH組比較，T1～T2時(shí)Ost組TNF-α、IL-6血糖、胰島素水平及IRI均降低，ISI升高（P <0.05或0.01），提示蛇床子素可以減少炎癥因子產(chǎn)生，抑制圍手術(shù)期IR。

中藥蛇床子為傘形科植物蛇床Cnidiumm monnier（L.）Cusson的干燥成熟果實(shí)，具有開竅祛痰、醒神益智、燥濕、殺蟲、止癢等功效。研究表明[10]其主要生物活性成分為蛇床子素（Osthole，Ost），具有抗氧化、抗衰老、抗高血壓、抗心律失常、抗炎鎮(zhèn)痛和促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶等多種功效。蛇床子素的抗炎效應(yīng)可能是通過(guò)抑制細(xì)胞鈣內(nèi)流，提高環(huán)鳥苷酸的水平和抑制白介素有關(guān)[2]。本研究也證實(shí)其對(duì)細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的產(chǎn)生和釋放有抑制作用，從而對(duì)IR產(chǎn)生影響。這與既往研究報(bào)道的Ost可抑制IL-1β和IL-8產(chǎn)生，抑制局部腦組織炎癥反應(yīng)的結(jié)果較為類似。

綜上，Ost對(duì)兔肝大部切除產(chǎn)生的促炎因子TNF-α和IL-6有抑制作用，同時(shí)對(duì)創(chuàng)傷誘發(fā)的IR有緩減作用，為中醫(yī)藥預(yù)防治療IR提供了理論基礎(chǔ)。但其作用的信號(hào)通道及相應(yīng)受體等情況還不是很清楚，有待進(jìn)一步研究。

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