王婷

摘要：本文主要是對大腸菌群平板計(jì)數(shù)結(jié)果的影響因素進(jìn)行簡單分析，這對于大腸菌群平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度的評(píng)定具有積極的作用。

關(guān)鍵詞：大腸菌群 平板計(jì)數(shù)結(jié)果 不確定度的評(píng)定 探討

中圖分類號(hào)：TS207.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）06-0093-02

在食品衛(wèi)生狀況的評(píng)定過程中，大腸菌群的評(píng)定是一個(gè)非常重要的評(píng)定指標(biāo)，在日常的檢驗(yàn)工作中，保證大腸菌群檢驗(yàn)結(jié)果的可信度是非常必要的，在實(shí)際的測量應(yīng)用中，對于測量不確定度的評(píng)定主要目的是為了對相關(guān)的測量結(jié)果的可疑程度進(jìn)行一種定理性的表述，隨著各項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展，平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度評(píng)定方法逐漸在大腸菌群中具有廣泛的應(yīng)用，本文就主要對其檢驗(yàn)方法及各種不確定度分量的評(píng)定進(jìn)行簡單分析。

1 平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度的檢驗(yàn)方法

本次研究中，對平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度評(píng)定的檢驗(yàn)方法，主要是采用食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)中的第二法平板計(jì)數(shù)法來進(jìn)行檢驗(yàn)，首先對其檢驗(yàn)流程進(jìn)行簡單分析，主要表現(xiàn)為：選取25克左右的樣品，將其應(yīng)用225毫升的磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行稀釋，然后進(jìn)行結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板的制作，以上步驟完成之后，將其溫度控制在36攝氏度左右，將其培養(yǎng)18到24小時(shí)，并在其中挑選可疑菌落及具有明顯代表性的菌落，將其放置于煌綠乳糖膽鹽肉湯管中，將溫度控制在36攝氏度左右，對其培養(yǎng)24小時(shí)到48小時(shí)，對計(jì)數(shù)產(chǎn)氣情況進(jìn)行觀察，最后要報(bào)告大腸菌群檢驗(yàn)的技術(shù)結(jié)果。

2 平板計(jì)數(shù)結(jié)果中各個(gè)不確定度分量的評(píng)定

在整個(gè)平板檢驗(yàn)的過程中，其不確定度分量是比較多的，在其取樣階段，稀釋體積、溫度、稱樣量、檢測環(huán)境等都會(huì)對計(jì)數(shù)結(jié)果產(chǎn)生影響，在其培養(yǎng)的過程中，培養(yǎng)基質(zhì)量、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間等的不同，直接會(huì)導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果的不同，在樣本的保存過程中，溫度與時(shí)間的不同，都會(huì)對計(jì)數(shù)結(jié)果產(chǎn)生影響，并且在計(jì)數(shù)結(jié)果判定的過程中，人員計(jì)數(shù)、肉湯管產(chǎn)氣比例、修約等都會(huì)對計(jì)數(shù)結(jié)果造成直接的影響。下面對其各種不確定分量進(jìn)行簡單分析。

首先在樣品的稱量過程中，具有較多的不確定分量，取樣的過程中是將樣品進(jìn)行充分的混勻之后進(jìn)行隨機(jī)的取樣，在計(jì)數(shù)的過程中，認(rèn)為樣品是具有充分的代表性的、均勻的樣品，在相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)中，對于均質(zhì)袋的拍擊時(shí)間與拍擊標(biāo)準(zhǔn)予以了明確的規(guī)定，在實(shí)際的操作過程中，應(yīng)該嚴(yán)格的按照相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)來執(zhí)行，所以可以將此處的不確定度予以忽略，在樣品的質(zhì)量稱量過程中，其精確度應(yīng)該精確到0.1克，25克的樣品質(zhì)量是通過電子天平來稱量，225毫升的緩沖液是通過容量為500毫升的量筒來量取，根據(jù)相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)，普通玻璃量器的容量允許誤差值為5毫升，在實(shí)際的應(yīng)用中，由測量儀器、數(shù)字式儀表所導(dǎo)致的不確定屬于矩形分布，那么在實(shí)際的不確定計(jì)算過程中，可以對玻璃容器與天平的標(biāo)準(zhǔn)不確定度進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算得到，玻璃容器的標(biāo)準(zhǔn)不確定度的值為2.8868毫升，天平的標(biāo)準(zhǔn)不確定度容量的值為0.0577克，將225毫升與25克實(shí)際稱量數(shù)據(jù)代入，計(jì)算得到玻璃容器的實(shí)際不確定度值為0.0128，天平的實(shí)際不確定度值為0.0023，那么該步驟中總的不確定度值為：0.013。

對樣品進(jìn)行10稀釋的過程中，也會(huì)引入較多的不確定度，需要對樣品進(jìn)行10倍的梯度稀釋，在此過程中，需要應(yīng)用分度吸管進(jìn)行10毫升溶液的量取，以及移液器進(jìn)行1毫升樣品的量取，根據(jù)相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)，移液器在進(jìn)行1毫升溶液的量取時(shí)期容量的允許誤差值為±1%，用分度吸管進(jìn)行10毫升的容量量取時(shí)，其容量允許誤差值為：±0.05毫升，假定其不確定度的分布是矩形分布，能夠?qū)ζ錁?biāo)準(zhǔn)不確定度的值進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算得到：分度吸管的標(biāo)準(zhǔn)不確定度的值為0.0289毫升，移液管的標(biāo)準(zhǔn)不確定度的值為0.00577毫升。將其實(shí)際的量取值代入，計(jì)算得到：分度吸管的實(shí)際不確定度值為0.00289，移液器的實(shí)際不確定度值為：0.00577，該步驟中的總的不確定度的值為0.005808，由于本次檢驗(yàn)中，是在20攝氏度的標(biāo)準(zhǔn)溫度中開展的，因此，在不確定度的計(jì)算過程中，可以將溫度對不確定度的影響忽略，如果檢驗(yàn)工作不是在標(biāo)準(zhǔn)溫度中開展，則需要考慮溫度因素對于容器體積產(chǎn)生的影響。

在對平板菌落數(shù)的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度進(jìn)行計(jì)算時(shí)，通常采用的計(jì)算方法是依據(jù)普松分布理論來進(jìn)行計(jì)算，具體方法為：在某個(gè)稀釋度的平行檢測工作中，如果其六個(gè)計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)的均值表示為Z，那么由普松分布所引起的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度的值為，本次研究中，其菌落的平均值為119CFU，那么計(jì)算得到其相對標(biāo)準(zhǔn)的不確定度的值為0.09165。

在肉湯管產(chǎn)氣試驗(yàn)中，可疑菌落與典型菌落的挑選中會(huì)產(chǎn)生較大的不確定性，這主要是因?yàn)?，所挑選的菌落不同，會(huì)產(chǎn)生不同的不確定度，本次試驗(yàn)中，是從兩個(gè)平板上分別的挑選菌落加入到肉湯管中，計(jì)算得到其相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度的值為：0.04188。

3 討論

在實(shí)際的大腸菌群平板計(jì)數(shù)的過程中，對其計(jì)數(shù)結(jié)果具有較大影響的因素有很多，除了上文中計(jì)算的各種不確定分量之外，數(shù)值修約、人員計(jì)數(shù)、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基質(zhì)量、檢測環(huán)境、保存條件等都會(huì)對計(jì)數(shù)結(jié)果的不確定度產(chǎn)生影響，由于在本次試驗(yàn)中，檢驗(yàn)工作是由同一人員在同一檢測環(huán)境中進(jìn)行，并且整個(gè)檢驗(yàn)過程是嚴(yán)格按照相應(yīng)的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行，所以在其不確定度分析的過程中，將人為因素及環(huán)境因素對不確定度的影響進(jìn)行了忽略。計(jì)算結(jié)果表明，對平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度影響最大的因素是：煌綠乳糖膽鹽肉湯管產(chǎn)氣比例及樣品平板大腸菌群數(shù)量所產(chǎn)生的不確定度，在實(shí)際的試驗(yàn)過程中，應(yīng)該根據(jù)其不確定分量的分布特點(diǎn)，制定出合理的試驗(yàn)方案，在整個(gè)試驗(yàn)的過程中，盡可能的進(jìn)行規(guī)范化的操作，盡量的減少一些關(guān)鍵步驟中的不確定度分量的值，使計(jì)算結(jié)果的準(zhǔn)確性得到有效提升。

參考文獻(xiàn)

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