馬海玲　劉俊華

摘 要：測(cè)定褐黃水灰蘚配子體提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對(duì)受試菌的最小抑菌濃度。結(jié)果表明：褐黃水灰蘚無(wú)菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對(duì)受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強(qiáng)。質(zhì)量濃度為100g/L的乙醇提取液，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達(dá)69.98%、71.04%，乙醇提取液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關(guān)鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號(hào) S482.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國(guó)各省區(qū)[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產(chǎn)生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產(chǎn)物及一些生物活性物質(zhì)[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測(cè)定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應(yīng)與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內(nèi)鶴伴山區(qū)。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學(xué)院生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)、可調(diào)萬(wàn)用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準(zhǔn)確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無(wú)菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內(nèi)浸提24h后，過(guò)濾，重復(fù)提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應(yīng)提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質(zhì)量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時(shí)設(shè)生長(zhǎng)對(duì)照（菌懸液+培養(yǎng)基），培養(yǎng)12h后觀察，無(wú)菌生長(zhǎng)的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測(cè)定 采用分光光度計(jì)法[6]測(cè)定褐黃水灰蘚水浸提液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，放入超凈工作臺(tái)中，紫外滅菌30min。在無(wú)菌室內(nèi)，準(zhǔn)確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準(zhǔn)確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養(yǎng)基，不接任何菌作為空白對(duì)照，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中搖床培養(yǎng)24h。然后分光光度計(jì)600nm下比色測(cè)定。每一個(gè)的梯度做3次重復(fù)。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基，作為含菌對(duì)照，同樣條件下培養(yǎng)24h后，分光光度計(jì)600nm下比色測(cè)定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對(duì)照組吸光值）×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測(cè)定 由表1、表2可知，不同提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對(duì)大腸桿菌的MIC為50g/L，而對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對(duì)2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L?？傮w來(lái)看，本試驗(yàn)中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優(yōu)。

3 結(jié)論

本研究結(jié)果初步表明，作為尚無(wú)藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質(zhì)量濃度間呈正相關(guān)關(guān)系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強(qiáng)的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開(kāi)發(fā)利用，仍需圍繞其抑菌機(jī)理及主要抑菌活性成分開(kāi)展進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學(xué)活性成分研究概況[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學(xué)與生物學(xué)[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對(duì)幾種常見(jiàn)食品污染菌的體外協(xié)同抑菌作用及其作用機(jī)理[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2013，39（4）：17-21.

（責(zé)編：施婷婷）

摘 要：測(cè)定褐黃水灰蘚配子體提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對(duì)受試菌的最小抑菌濃度。結(jié)果表明：褐黃水灰蘚無(wú)菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對(duì)受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強(qiáng)。質(zhì)量濃度為100g/L的乙醇提取液，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達(dá)69.98%、71.04%，乙醇提取液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關(guān)鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號(hào) S482.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國(guó)各省區(qū)[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產(chǎn)生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產(chǎn)物及一些生物活性物質(zhì)[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測(cè)定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應(yīng)與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內(nèi)鶴伴山區(qū)。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學(xué)院生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)、可調(diào)萬(wàn)用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準(zhǔn)確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無(wú)菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內(nèi)浸提24h后，過(guò)濾，重復(fù)提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應(yīng)提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質(zhì)量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時(shí)設(shè)生長(zhǎng)對(duì)照（菌懸液+培養(yǎng)基），培養(yǎng)12h后觀察，無(wú)菌生長(zhǎng)的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測(cè)定 采用分光光度計(jì)法[6]測(cè)定褐黃水灰蘚水浸提液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，放入超凈工作臺(tái)中，紫外滅菌30min。在無(wú)菌室內(nèi)，準(zhǔn)確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準(zhǔn)確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養(yǎng)基，不接任何菌作為空白對(duì)照，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中搖床培養(yǎng)24h。然后分光光度計(jì)600nm下比色測(cè)定。每一個(gè)的梯度做3次重復(fù)。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基，作為含菌對(duì)照，同樣條件下培養(yǎng)24h后，分光光度計(jì)600nm下比色測(cè)定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對(duì)照組吸光值）×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測(cè)定 由表1、表2可知，不同提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對(duì)大腸桿菌的MIC為50g/L，而對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對(duì)2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L?？傮w來(lái)看，本試驗(yàn)中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優(yōu)。

3 結(jié)論

本研究結(jié)果初步表明，作為尚無(wú)藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質(zhì)量濃度間呈正相關(guān)關(guān)系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強(qiáng)的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開(kāi)發(fā)利用，仍需圍繞其抑菌機(jī)理及主要抑菌活性成分開(kāi)展進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學(xué)活性成分研究概況[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學(xué)與生物學(xué)[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對(duì)幾種常見(jiàn)食品污染菌的體外協(xié)同抑菌作用及其作用機(jī)理[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2013，39（4）：17-21.

（責(zé)編：施婷婷）

摘 要：測(cè)定褐黃水灰蘚配子體提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對(duì)受試菌的最小抑菌濃度。結(jié)果表明：褐黃水灰蘚無(wú)菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對(duì)受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強(qiáng)。質(zhì)量濃度為100g/L的乙醇提取液，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達(dá)69.98%、71.04%，乙醇提取液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關(guān)鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號(hào) S482.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國(guó)各省區(qū)[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產(chǎn)生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產(chǎn)物及一些生物活性物質(zhì)[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測(cè)定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應(yīng)與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內(nèi)鶴伴山區(qū)。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學(xué)院生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)、可調(diào)萬(wàn)用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準(zhǔn)確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無(wú)菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內(nèi)浸提24h后，過(guò)濾，重復(fù)提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應(yīng)提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質(zhì)量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時(shí)設(shè)生長(zhǎng)對(duì)照（菌懸液+培養(yǎng)基），培養(yǎng)12h后觀察，無(wú)菌生長(zhǎng)的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測(cè)定 采用分光光度計(jì)法[6]測(cè)定褐黃水灰蘚水浸提液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，放入超凈工作臺(tái)中，紫外滅菌30min。在無(wú)菌室內(nèi)，準(zhǔn)確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準(zhǔn)確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養(yǎng)基，不接任何菌作為空白對(duì)照，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中搖床培養(yǎng)24h。然后分光光度計(jì)600nm下比色測(cè)定。每一個(gè)的梯度做3次重復(fù)。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基，作為含菌對(duì)照，同樣條件下培養(yǎng)24h后，分光光度計(jì)600nm下比色測(cè)定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對(duì)照組吸光值）×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測(cè)定 由表1、表2可知，不同提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對(duì)大腸桿菌的MIC為50g/L，而對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對(duì)2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L?？傮w來(lái)看，本試驗(yàn)中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優(yōu)。

3 結(jié)論

本研究結(jié)果初步表明，作為尚無(wú)藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質(zhì)量濃度間呈正相關(guān)關(guān)系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強(qiáng)的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開(kāi)發(fā)利用，仍需圍繞其抑菌機(jī)理及主要抑菌活性成分開(kāi)展進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學(xué)活性成分研究概況[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學(xué)與生物學(xué)[M].北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對(duì)幾種常見(jiàn)食品污染菌的體外協(xié)同抑菌作用及其作用機(jī)理[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2013，39（4）：17-21.

（責(zé)編：施婷婷）