宋 強(qiáng)，謝 平，李政鑫

(1.西藏正源生物科技有限公司，西藏 拉薩850000；2.西藏自治區(qū)藥檢所，西藏 拉薩850000；3.西藏格創(chuàng)藥業(yè)有限公司，西藏 拉薩850000)

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筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量測定

宋 強(qiáng)1，謝 平2，李政鑫3

(1.西藏正源生物科技有限公司，西藏 拉薩850000；2.西藏自治區(qū)藥檢所，西藏 拉薩850000；3.西藏格創(chuàng)藥業(yè)有限公司，西藏 拉薩850000)

目的：對筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量進(jìn)行測定。方法：配制不同濃度梯度的苦參素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，采用紫外分光光度計(jì)法測定其吸光度值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得待測筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量。結(jié)果：經(jīng)檢測求得筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量為59.01μg/mL。結(jié)論：該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量的測定。

筋骨草皮膚抑菌液；砂生槐；苦參素；含量測定

筋骨草皮膚抑菌液是已故西藏自治區(qū)著名藏醫(yī)專家、西藏自治區(qū)藏醫(yī)藥研究院院長、西藏自治區(qū)藏醫(yī)院副院長次仁巴珠教授的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由苞葉筋骨草、砂生槐、鐵棒錘、大籽蒿等藏藥材組成，對痹癥疼痛、各種神經(jīng)性疼痛均有明顯緩解作用，對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)等紅腫炎癥皮膚具有消炎止痛顯著療效。本文為了增強(qiáng)筋骨草皮膚抑菌液的質(zhì)量控制，對其所含有的苦參素含量進(jìn)行了測定。

1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

筋骨草皮膚抑菌液是本實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的新產(chǎn)品?？鄥⑺貥?biāo)準(zhǔn)品來源于中國食品藥品檢定研究院。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)HF-2.0B 型超聲波循環(huán)提取機(jī)(上海銳元機(jī)械設(shè)備有限公司)、UV-2000 紫外-可見分光光度計(jì)(上海尤尼柯)與pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)等。

1.3 化學(xué)試劑

溴麝香草酚藍(lán)、鹽酸、三氯甲烷、氫氧化鈉與95%醫(yī)用乙醇均購于雙雙化工。蒸餾水為實(shí)驗(yàn)室自制。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 筋骨草皮膚抑菌液及標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

供試品溶液的配制：取實(shí)驗(yàn)室自制的濃度為10mg/mL的筋骨草皮膚抑菌液10mL，用蒸餾水定容至100mL待測。1mg/mL的苦參素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制：稱取苦參素標(biāo)準(zhǔn)品100mg，溶于100mL蒸餾水中即得。

2.2 苦參素含量測定

本實(shí)驗(yàn)采用紫外-分光光度法對筋骨草皮膚抑菌液中的苦參素含量進(jìn)行測定。一般情況下，紫外-分光光度法是將溶液調(diào)至某一固定酸堿度(配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)后再對所含的某物質(zhì)的含量進(jìn)行測定，然后將所得到的結(jié)果作為衡量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。 鑒于此，本實(shí)驗(yàn)在pH7.6條件下，在220nm 波長處測定苦參素標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值(A值)，然后制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出A值與苦參素含量的關(guān)系。測定筋骨草皮膚抑菌液在220nm 波長下的A值后，將其代入到標(biāo)準(zhǔn)曲線關(guān)系式中，即可得出筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量。

2.2.1 苦參素標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 采用微量進(jìn)樣器依次吸取制成的1mg/mL苦參素標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、20、40、60、80μL，分別加入到50mL的磨口錐形瓶中，將其置于80℃水浴中進(jìn)行蒸干，加入pH7.6的1.75×10-4mol/L溴麝香草酚藍(lán)緩沖溶液5.5mL，然后加入氯仿5.5mL，閉塞劇烈振搖3.5 min，分別倒入50mL的分液漏斗中，靜置1.5h，當(dāng)氯仿層與水層之間完全分層之后，打開分液漏斗開關(guān)，放掉水層，將氯仿層放入準(zhǔn)備好的磨口試管里，采用紫外-可見分光光度計(jì)于220nm 波長下測定準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收度(A值)。將測得的吸收度(A值)作為縱坐標(biāo)，苦參素標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為橫坐標(biāo)，采用Excel 2010軟件繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.2 筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量測定 空白管測定：取40μL蒸餾水置于容量為50mL的三角瓶中，加入溴麝香草酚藍(lán)緩沖液5.5mL使PH=7.6，再加入氯仿5.5mL，在220nm 波長處采用紫外-分光光度計(jì)測定樣品的吸光度值(A值)，即為A0。取配制好的筋骨草皮膚抑菌液40μL置于容量為50mL的三角瓶中，加入溴麝香草酚藍(lán)緩沖液5.5mL使PH=7.6，再加入氯仿5.5mL，在220nm 波長處采用紫外-分光光度計(jì)測定出A值，減去A0即為樣品的吸光度值(A值)，將A值代入到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中便可以求出其中所含有的苦參素含量。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

苦參素標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 苦參素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2 筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量測定結(jié)果

經(jīng)過三次平行檢測后求均值，結(jié)果顯示樣品A=0.55。代入到標(biāo)準(zhǔn)方程中求得筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量為59.01μg/mL。

4 討論

苦參素是一種生物堿，又名氧化苦參堿、注射用苦參素等，是從砂生槐子、苦豆子等藥材中提取出來的一種生物堿?？鄥⑺刈⑸湟含F(xiàn)已在臨床上廣泛使用[2]。目前，很多植物與中藥中均發(fā)現(xiàn)有苦參素的存在，因此為了中藥的全面開發(fā)與利用，有必要檢測其所含有的苦參素的含量。在藥典[3]中，苦參素含量的測定通常可以采用比色法、薄層掃描法、HPLC 法和高效毛細(xì)管電泳法等進(jìn)行測定。資料顯示，有人采用高效液相色譜法測定了苦參的根、莖、葉中所含有的苦參素含量，結(jié)果顯示苦參素在根中的含量較多，莖中含量最少。有學(xué)者于2005年采用高效液相色譜法測定苦參素注射液中所含有的苦參素含量，結(jié)果顯示該方法簡便，重現(xiàn)性好，可用于苦參素的含量測定。有學(xué)者于2004年建立了苦參素含量的高效液相色譜測定方法，結(jié)果顯示220nm為苦參素的測定波長，且采用高效液相色譜測定苦參素方法穩(wěn)定可靠[4]。另有學(xué)者于2005年也建立了采用高效液相色譜法測定苦參素膠囊中的苦參素含量的方法，結(jié)果顯示該法可靠性較強(qiáng)，可以用于苦參素的質(zhì)量控制。另有學(xué)者于2012年建立了采用HPLC法測定苦參素中氧化苦參堿含量的方法，結(jié)果顯示HPLC法可以用于測定苦

參素中氧化苦參堿的含量，且其準(zhǔn)確性較強(qiáng)，專屬性較好，靈敏度比較高，非常適用于苦參素中氧化苦參堿的含量測定[5]。縱觀這些研究發(fā)現(xiàn)，HPLC是一種檢測苦參素含量的較好方法，但是其費(fèi)用高、硬件要求高，而紫外分光光度計(jì)法費(fèi)用低，且比較穩(wěn)定，因此比較實(shí)用。

砂生槐是西藏特有高原生物資源，在藏語中稱為“吉瓦”，或稱為西藏狼牙刺，屬于豆科槐屬，為多年生灌木植物。該植物生長在海拔2 800～4 400m的雅魯藏布江中段流域中的山坡、河谷與沙灘上。西藏砂生槐資源儲(chǔ)存量大，為當(dāng)?shù)乩习傩盏囊环N薪火植物。據(jù)中國科學(xué)院考察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)估算砂生槐生長面積約在200萬畝以上，每年可生產(chǎn)出種子3～6萬噸左右。砂生槐種子屬于藏醫(yī)常用藥材，收載于《部頒標(biāo)準(zhǔn) 藏藥》(1995年版)，藏醫(yī)認(rèn)為該藥物具有一定的消炎解毒、催吐的功效，因此在藏醫(yī)中常被用于治療濕熱黃疸、白喉、痢疾、赤巴病、消化不良、蟲病等病。現(xiàn)代研究證明砂生槐含有的生物堿活性成分主要包括氧化苦參堿(Oxymatrine，C15H24N2O2)、苦參堿(Matrine，C15H24N2O)，其中氧化苦參堿又名苦參素。蘭州大學(xué)生命科學(xué)院李玉祥等人曾報(bào)道，砂生槐種子中被檢測出含有17種氨基酸，且總量均高達(dá)24.53%，分別是西藏小麥和青稞的1.57倍和2.55倍。同時(shí)，砂生槐原植物是典型的深根樹種，防沙固沙能力很強(qiáng)，對西藏生態(tài)保護(hù)具有重要生態(tài)價(jià)值。砂生槐主根穿透力極強(qiáng)，平均滲入地下3m，側(cè)根在距地表0.7～1.5m處形成了穩(wěn)定的固沙層，是很好的固沙植物。砂生槐生物堿是醫(yī)藥中間體，也是消毒劑與生物農(nóng)藥的重要原料，西藏正源生物科技有限公司已建成砂生槐生物堿生產(chǎn)線，對砂生槐產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有積極示范意義。

[1] 張勝, 趙墾田, 向瑞.西藏砂生槐研究綜述[J]. 內(nèi)蒙古林業(yè)科技， 2009，35(1): 57-59.

[2] 狄天云, 張?zhí)J燕, 王坤. HPLC法測定苦參素中氧化苦參堿含量的方法學(xué)研究[J]. 寧夏醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 35(8): 714-715.

[3] 中華人民共和國藥典委員會(huì). 中國藥典[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2010: 188-189.

[4] 陳玉華.高效液相色譜法對苦參素注射液的含量測定[J]. 中醫(yī)藥學(xué)報(bào), 2008, 36(6): 41-42.

[5] 張萍，楊璐，王耀欣.高效液相色譜法HPLC測定自采苦參根莖和根中5個(gè)生物堿的含量[J].藥物分析雜志,2012,32(3):512-513.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-03-31

宋強(qiáng)(1979-)，西藏正源生物科技有限公司質(zhì)量工程師、執(zhí)業(yè)藥師，研究方向?yàn)椴厮幮滤幒蛡鹘y(tǒng)藏藥的二次研究與開發(fā)。

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1673-2197(2014)13-0029-02