王杰 盛權 朱虹 孫峰 丁懿

（揚州大學醫(yī)學院，江蘇揚州 225001）

健脾益胃湯對慢性萎縮性胃炎模型大鼠血清胃泌素和血漿胃動素的影響

王杰 盛權 朱虹 孫峰 丁懿

（揚州大學醫(yī)學院，江蘇揚州 225001）

目的：探討健脾益胃湯對慢性萎縮性胃炎大鼠的治療機制。方法：將大鼠隨機分為正常對照組、模型組、健脾益胃湯低劑量組（JPYW-L）、健脾益胃湯中劑量組（JPYW-M）、健脾益胃湯高劑量組（JPYW-H）和陽性藥物（維酶素）對照組。除正常對照組外，其余各組大鼠均采用水楊酸鈉法制作慢性萎縮性胃炎模型。造模成功后分別灌服蒸餾水或相應藥物，連續(xù)8周。觀察大鼠胃黏膜的組織病理學改變，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清胃泌素（GAS）和血漿胃動素（MTL）。結(jié)果：健脾益胃湯高、中劑量組與模型組相比，大鼠胃黏膜損傷均有不同程度的改善；健脾益胃湯中、低劑量組與模型組相比，血清GAS含量均明顯升高，血漿MTL含量均明顯降低。結(jié)論：健脾益胃湯能改善大鼠胃黏膜的病變，其可能的作用機制為對血清GAS、血漿MTL水平的調(diào)整。

慢性萎縮性胃炎 健脾益胃湯 胃泌素 胃動素 病理學 實驗研究

慢性萎縮性胃炎（CAG）是消化系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病，是胃癌癌前狀態(tài)之一。運用中醫(yī)藥治療CAG是延緩或阻斷其向胃癌發(fā)展的有效手段。因此，探討運用中醫(yī)中藥預防和治療慢性萎縮性胃炎，對于CAG癌變的干預阻斷和胃癌的一級預防有著重要意義。健脾益胃湯是南京中醫(yī)藥大學王燦暉教授在明確CAG的發(fā)病機制和確立CAG的治療方法基礎上，自擬的治療CAG的基本方，臨證運用該方治療CAG患者，可以明顯緩解患者的臨床癥狀，收到了滿意的治療效果。本研究在建立大鼠慢性萎縮性胃炎模型的基礎上，觀察健脾益胃湯對大鼠血清胃泌素和血漿胃動素水平的影響，以探討其對CAG的治療機制。

1 實驗材料

1.1 動物健康SPF級SD大鼠55只，雌雄不拘，體重（201.75±41.11）g，上海市西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（滬）2008-0016。

1.2 藥品及試劑健脾益胃湯，藥物組成：太子參15g，淮山藥12g，焦白術10g，茯苓12g，石斛12g，川樸花8g，八月札10g，雞內(nèi)金10g，白花蛇舌草20g，莪術10g。中藥材均由江蘇省蘇北人民醫(yī)院中藥房提供，口服液由江蘇省人畜共患病學重點實驗室制劑，藥物濃度為每毫升含生藥2g，置于250mL鹽水瓶中，4℃保存?zhèn)溆?。陽性對照藥物以蒸餾水溶解維酶素片，備用。GAS試劑盒和MTL試劑盒均購自揚州科能生物技術有限公司。維酶素片由湖北綠金子藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號：130102。

1.3 儀器低速離心機：TDZ4A-WS型，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司。酶標儀：ELX808型，美國伯樂公司。

2 實驗方法

2.1 動物模型的制備55只大鼠購回后，飼養(yǎng)于室溫18～22℃環(huán)境中，自由飲水飲食1周。參考文獻[1]的方法，以水楊酸鈉法制作大鼠慢性萎縮性胃炎模型：將造模組大鼠以2%水楊酸鈉溶液3mL/（次·d）灌胃，灌胃前后2h內(nèi)禁食、禁水，連續(xù)6周。前3周自由進食、進水；后3周單日禁食，自由飲水，雙日足量喂食，自由飲水。隔日在溫水中游泳1次，約15min。6周后完成模型制作。

2.2 分組與給藥按隨機數(shù)字法將大鼠分為正常對照組、模型組、健脾益胃湯低劑量組（JPYW-L）、健脾益胃湯中劑量組（JPYW-M）、健脾益胃湯高劑量組（JPYW-H）、陽性藥物（維酶素片）對照組。各治療組均從實驗開始第8周起，每天灌胃給予相應藥物：健脾益胃湯低劑量組0.6mL/次，健脾益胃湯中劑量組1.1mL/次，健脾益胃湯高劑量組2.2m L/次，陽性藥物對照組1.1mL/次。每日1次，連續(xù)8周。正常對照組及模型組均給予等量蒸餾水灌胃，1.1mL/次，每日1次。

2.3 指標檢測

2.3.1 取材最后一次給藥后，禁食24h，麻醉狀態(tài)下，頸動脈取血5mL，平均分置于普通試管和EDTA抗凝試管中。各試管常溫靜置2h后離心，3000r/m in，15min，于-20℃保存待用。處死大鼠，剖腹取出全胃，沿大彎側(cè)切開，生理鹽水沖洗，取1.0cm×1.0cm大小組織塊，甲醛固定。

2.3.2 血清胃泌素（GAS）、血漿胃動素（MTL）檢測血清GAS、血漿MTL均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，按試劑盒中提供的操作說明進行。

2.3.3 病理形態(tài)學觀察常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察胃黏膜組織學變化情況。

2.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。所有計量資料均用（x±s）表示。多組均數(shù)之間比較采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗。

3 實驗結(jié)果

3.1 一般狀況正常對照組大鼠的一般狀況良好，納食正常，肌肉豐滿。模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡，食欲下降，體重減輕，毛發(fā)干枯、失去光澤，大便稀溏等表現(xiàn)。各治療組大鼠在實驗過程中，均出現(xiàn)不同程度的精神好轉(zhuǎn)，食欲轉(zhuǎn)佳，癥狀均較模型組輕，且體重增加，其中以健脾益胃湯中劑量組改善最為明顯。

3.2 大鼠胃黏膜病理變化

3.2.1 肉眼觀察正常對照組大鼠胃黏膜呈粉/淡紅色，表面溝回明顯、平滑光澤，胃肌層豐厚。模型組大鼠胃黏膜呈暗紅或灰白色，胃肌層可見顯露的血管，表面溝回變淺、失去光澤，偶見大鼠胃黏膜潰瘍病灶。各治療組大鼠胃黏膜表面均較模型組好轉(zhuǎn)。

3.2.2 光鏡觀察正常對照組大鼠胃黏膜腺體排列整齊緊密，未見胃黏膜壞死、腺體萎縮、腸化生及異常等病變。模型組大鼠胃黏膜腺體大小不一，結(jié)構(gòu)紊亂，腺體萎縮。陽性藥物對照組大鼠胃黏膜腺體排列欠規(guī)則，胃腺體輕度囊性擴張。健脾益胃湯高劑量組大鼠胃黏膜腺體排列欠規(guī)則，出現(xiàn)少量的胃腺體壁變薄、萎縮，胃腺體囊性擴張，偶見胃黏膜壞死。健脾益胃湯中劑量組大鼠胃黏膜腺體排列規(guī)則，未見明顯胃黏膜壞死，可見個別腺體輕度萎縮。健脾益胃湯低劑量組大鼠胃黏膜腺體排列不規(guī)則，有較多的胃腺體壁變薄、萎縮，胃腺體腔囊性擴張。見圖1。

圖1 各組大鼠光鏡下胃黏膜情況（HE，×200）

3.3 藥物對CAG模型大鼠血清GAS、血漿MTL的影響見表1。

表1 各組大鼠血清GAS、血漿MTL含量比較（±s）

表1 各組大鼠血清GAS、血漿MTL含量比較（±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與陽性藥物對照組比較，#P＜0.05；與健脾益胃湯高劑量組比較，●●P＜0.01；與健脾益胃湯中劑量組比較，○P＜0.05，○○P＜0.01。

4 討論

CAG是慢性胃炎的一種類型，是指因不同病因引起的呈局限性或廣泛性的胃黏膜固有腺體萎縮，數(shù)目減少，功能減低，胃黏膜肌層增厚，胃黏膜變薄[2]。胃黏膜中常見有腸上皮化生、假幽門腺化生及不典型增生。自1980年“WHO專家會議”對“胃癌前病變的組織學定義”規(guī)定以來，由慢性胃炎→胃黏膜萎縮腸化→異型增生→胃癌這一病變演化模式過程已為國內(nèi)外眾多學者所認同[3]。但對于CAG的治療，目前仍以對癥治療為主要手段。

GAS是由胃竇部及十二指腸近端黏膜中G細胞分泌的一種胃腸激素，可以促進胃腸道的分泌功能，促進胃竇、胃體收縮，增加胃腸道的運動。GAS還能刺激胃泌酸腺區(qū)黏膜和十二指腸黏膜的DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成，從而促進其生長。胃泌素還具有細胞營養(yǎng)作用，胃泌素水平上升可導致上消化道黏膜血流量增加，胃黏膜細胞營養(yǎng)及增殖能力增加[4]。CAG患者由于腺體萎縮，G細胞數(shù)量減少，GAS分泌下降，則胃的分泌和胃運動功能都會受到影響。由于GAS分泌減少，胃黏膜進一步萎縮，形成惡性循環(huán)。模型組大鼠，由于饑飽失常和水楊酸鈉的刺激，導致胃黏膜損傷，G細胞受損，GAS分泌減少。本實驗模型組大鼠胃黏膜出現(xiàn)廣泛的腺體壁變薄、腺體萎縮，因此血清GAS含量低于正常對照組。而健脾益胃湯組大鼠未見明顯胃黏膜壞死，胃黏膜腺體排列規(guī)則，胃泌素含量升高，保證了對胃黏膜的營養(yǎng)作用，促進胃黏膜修復，改善黏膜微循環(huán)。

MTL是興奮性胃腸激素，具有興奮胃腸平滑肌的作用，能促進胃腸運動和胃排空的功能[5]。CAG模型大鼠胃腺體萎縮，組織變薄，從而使消化功能減弱，因而對胃動素的反應減弱，反饋性地引起胃動素的增加，致使血漿胃動素水平上升。健脾益胃湯通過降低CAG模型大鼠的血漿胃動素水平，調(diào)整胃腸激素，以產(chǎn)生正常的胃腸蠕動，促進胃的排空，促進食物的消化吸收。

慢性萎縮性胃炎屬中醫(yī)學“胃脘痛”、“痞滿”、“嘈雜”等疾病范疇。王燦暉教授認為，外邪內(nèi)侵，或飲食不潔/不節(jié)，或情志不暢，或脾胃虛弱，其單一或綜合作用，終致中焦氣機不利，升降失常而發(fā)為本病。脾虛胃弱、氣機郁滯、胃絡不和是CAG發(fā)生的基本病機，養(yǎng)胃陰、補脾氣是治療CAG的根本大法[6]。健脾益胃湯方中太子參味甘質(zhì)潤，長于益氣補脾、生津養(yǎng)胃。山藥、白術、茯苓益脾氣，養(yǎng)胃陰，助運化；石斛養(yǎng)胃生津，能促進唾液、胃液分泌，助消化，加強腸蠕動。上述藥物與太子參合用，其益氣養(yǎng)陰、健脾助運之效更佳。川樸花、八月札行氣寬中以止痛，厚樸煎液能刺激消化道黏膜引起反射性興奮；雞內(nèi)金消食化積以助運；白花蛇舌草寒涼苦降以泄郁熱，具有增強機體免疫功能和促進巨噬細胞活性的作用，能促進黏膜充血、水腫、糜爛的消退、愈合。白花蛇舌草對腫瘤細胞有較強的抑制作用，本方用此旨在預防CAG發(fā)生癌變。久?。ㄍ矗┤虢j，故配莪術活血去瘀以通絡，且具行氣消積之功。諸藥相伍，甘潤平和，補而不滯，潤而不膩，理氣而不香燥，活血而不破散，可使脾運健而胃氣和，郁熱清而氣陰復，氣血暢而胃痛止[7]。

實驗結(jié)果顯示，模型組大鼠血清GAS含量低于正常對照組，血漿MTL含量高于正常對照組。而與模型組比較，健脾益胃湯中、低劑量組血清GAS含量均明顯升高，血漿MTL含量均明顯降低；健脾益胃湯低劑量組血清GAS含量低于中劑量組，血漿MTL含量高于中劑量組。說明血清GAS和血漿MTL的分泌在CAG的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，經(jīng)健脾益胃湯干預后，GAS含量較模型組顯著升高，MTL含量較模型組顯著降低，且以健脾益胃湯中劑量治療效果為最佳。說明健脾益胃湯通過提高大鼠血清GAS含量，降低大鼠血漿MTL水平，達到促進G細胞分泌GAS，改善胃的分泌和運動，營養(yǎng)胃黏膜，促進黏膜修復，促進食物消化吸收的效果。這也可能是健脾益胃湯治療萎縮性胃炎的作用機制之一，而其更深入的作用機制則有待進一步探討。

[1]張淑芹，趙林山，鄭繼奎，等.慢性萎縮性胃炎動物模型的復制.哈爾濱師范大學自然科學學報，2001，17（6）：81

[2]陳灝珠.實用內(nèi)科學（下冊）.11版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：1737

[3]蕭樹東.江紹基胃腸病學.上海：上?？茖W技術出版社，2001：617

[4]朱方石，王良靜，姒健敏，等.云母單體顆粒對萎縮性胃炎大鼠胃泌素、生長抑素及胃竇黏膜G，D細胞的影響.中國中藥雜志，2004，29（6）：554

[5]高文強，王益瓊，譚桂蘭，等．平胃散對濕滯脾胃證大鼠血清胃動素胃泌素分泌的影響．中華中醫(yī)藥學刊，2010，28（7）：1470

[6]朱虹.王燦暉診治慢性萎縮性胃炎學術思想探討.江蘇中醫(yī)藥，2012，44（7）：12

[7]南淑玲.王燦暉教授治療慢性萎縮性胃炎思路探析.中國中醫(yī)藥信息雜志，2003，10（4）：74

編輯：吳寧

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王杰（1992-），男，本科生，中西醫(yī)臨床醫(yī)學專業(yè)。

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2013-10-08

江蘇省科技廳科技基礎設施建設計劃專項（BM2009903）