郭文玲，薛　原，曾曉虹

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕血液科，福州 350005)

ChinJAllergyClinImmunol，2014，8(3)：211- 215

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus， SLE)是一種自身免疫介導(dǎo)的彌漫性結(jié)締組織病，可出現(xiàn)動(dòng)靜脈血栓形成等癥狀。抗磷脂抗體綜合征(antiphospholipid antibody syndrome， APS)亦為自身免疫性疾病，臨床上主要表現(xiàn)為反復(fù)動(dòng)靜脈血栓形成和病態(tài)妊娠等，APS患者血清學(xué)中檢查可特征性地出現(xiàn)抗磷脂抗體。其中，抗β2糖蛋白I(anti-β2-glycoprotein I，aβ2GPI)抗體已被證實(shí)與APS相關(guān)的血栓形成密切相關(guān)。

SLE患者體內(nèi)也?？蓹z出aβ2GPⅠ抗體，且aβ2GPⅠ抗體與血栓形成的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。但是，在aβ2GPⅠ抗體陽(yáng)性的SLE患者中，僅部分患者發(fā)生血栓栓塞，經(jīng)歷APS病程。那么，aβ2GPⅠ抗體在未發(fā)生臨床血栓事件的SLE患者體內(nèi)是否具有致病作用，已經(jīng)引起臨床工作者質(zhì)疑。本研究同時(shí)檢測(cè)SLE患者aβ2GPI的IgA、IgG、IgM等3類(lèi)抗體水平，分析其與SLE患者發(fā)生臨床血栓事件之間的關(guān)系，探討aβ2GPI在SLE血栓形成中的臨床意義。

對(duì)象和方法

對(duì)象

福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕血液科的SLE患者和原發(fā)性APS患者，SLE診斷符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂標(biāo)準(zhǔn)。常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)aβ2GPⅠ抗體陽(yáng)性：IgA、IgG和IgM 3類(lèi)總aβ2GPⅠ抗體，間隔6周且2次以上為陽(yáng)性，水平呈中、高度升高。納入患者需排除傳統(tǒng)血栓栓塞易患因素(高血脂、高血壓、高血糖、骨折、長(zhǎng)期臥床、嚴(yán)重低蛋白血癥、大量使用利尿劑和心房纖顫)，以及可能引起aβ2GPⅠ抗體一過(guò)性升高的可疑因素(肝炎病毒感染和腫瘤)等。血栓栓塞由造影、多普勒超聲、影像學(xué)或組織病理學(xué)證實(shí)。

分組

aβ2GPⅠ抗體陽(yáng)性的原發(fā)性APS患者納入PAPS組。SLE患者根據(jù)臨床是否發(fā)現(xiàn)血栓事件分為SLE-非血栓組(SLE-non-APS組)和SLE-血栓組(SLE-APS組)。

將所有發(fā)生臨床血栓事件的患者(SLE-APS組+PAPS組)中發(fā)生動(dòng)脈血管栓塞事件者納入APS-A組，發(fā)生靜脈血管栓塞事件者納入APS-V組。

方法

標(biāo)本采集與儲(chǔ)存：清晨空腹抽取所有受試者靜脈血3～5 ml，室溫放置約1 h。普通離心機(jī)3 500 rmin離心約20 min，留取血清并保存于-20℃冰箱。

檢測(cè)指標(biāo)與方法：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)aβ2GPI的IgA、IgG、IgM 3類(lèi)抗體水平。試劑盒由上海聯(lián)碩生物科技有限公司提供。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)　　果

一般情況

共納入82例患者，SLE患者64例，原發(fā)性APS患者18例(PAPS組)。PAPS組患者年齡32～76歲，平均(49±10)歲。64例SLE患者中，SLE-non-APS組52例，年齡18～71歲，平均(38±14)歲；SLE-APS組12例(12/64，18.75%)，年齡32～58歲，平均(42±9)歲。SLE-non-APS組與SLE-APS組比較，以及SLE-APS組與PAPS組比較年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

所有發(fā)生臨床血栓事件患者(SLE-APS組+PAPS組)共30例，其中APS-A組23例，年齡32～76歲，平均(46±10)歲；APS-V組7例，年齡32～59歲，平均(46±11)歲。APS-A組與APS-V組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。

aβ2GPⅠ抗體表達(dá)

SLE-APS組aβ2GPI-IgA、aβ2GPI-IgM血漿水平明顯低于SLE-non-APS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，aβ2GPI-IgG血漿水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。SLE-APS組和PAPS組aβ2GPI-IgA、aβ2GPI-IgG、aβ2GPI-IgM血漿水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)(表1)。

血栓事件與aβ2GPⅠ抗體表達(dá)

SLE-APS+PAPS組aβ2GPI-IgA、aβ2GPI-IgM血漿水平明顯低于SLE-non-APS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組aβ2GPI-IgG水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1　各組aβ2GPⅠ抗體表達(dá)比較

Table 1　Comparison of expression of anti-β2-glycoprotein I antibody in each group　(×10-8 molL)

表1　各組aβ2GPⅠ抗體表達(dá)比較

分組nIgAIgGIgMSLE?APS組1213±04a15±0310±02bSLE?non?APS組5218±0916±0615±07PAPS組1810±0415±0411±06SLE?APS+PAPS組3011±04b15±0311±05cAPS?A組2311±0414±03d12±05eAPS?V組711±0317±0307±01

SLE-APS：系統(tǒng)性紅斑狼瘡-血栓；SLE-non-APS：系統(tǒng)性紅斑狼瘡-非血栓；PAPS：原發(fā)性抗磷脂抗體綜合征；APS-A：SLE-APS組和PAPS組中發(fā)生動(dòng)脈血管栓塞事件者；APS-V：SLE-APS組和PAPS組中發(fā)生靜脈血管栓塞事件者；與SLE-non-APS組比較，aP=0.002，bP=0.000，cP=0.001；與APS-V組比較，dP=0.043，eP=0.000

動(dòng)、靜脈血栓形成與aβ2GPⅠ抗體

APS-A組aβ2GPI-IgM血漿水平高于而aβ2GPI-IgG血漿水平APS-V組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；兩組aβ2GPI-IgA血漿水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

討　　論

SLE是繼發(fā)性APS的典型代表，aβ2GPⅠ抗體是SLE患者體內(nèi)常見(jiàn)的自身抗體。aβ2GPⅠ抗體陽(yáng)性的SLE患者中僅部分發(fā)生血栓/栓塞。為準(zhǔn)確評(píng)估aβ2GPI的IgG，IgM，IgA 3類(lèi)抗體在未發(fā)生臨床血栓事件和并發(fā)臨床血栓事件的SLE患者，以及發(fā)生臨床血栓事件的非SLE患者中的不同表達(dá)情況及意義，本研究對(duì)象篩選時(shí)盡可能排除傳統(tǒng)易患因素和可能引起aβ2GPⅠ抗體一過(guò)性升高的可疑因素。

抗磷脂抗體是一種針對(duì)各種負(fù)電荷磷脂-蛋白復(fù)合物的自身抗體或同種抗體，主要包括抗心磷脂抗體、狼瘡抗凝物和aβ2GPⅠ抗體。曾經(jīng)認(rèn)為，上述自身抗體結(jié)合于帶負(fù)電荷的磷脂。但是研究表明，這些抗體不是結(jié)合于帶負(fù)電荷的磷脂，而是磷脂結(jié)合蛋白?，F(xiàn)在普遍認(rèn)為，APS中最重要的靶抗原是β2糖蛋白I(β2-glycoprotein I，β2GPI)或β2GPI-磷脂結(jié)合復(fù)合物，β2GPI才是導(dǎo)致血栓病態(tài)和致死的主要介質(zhì)，而aβ2GPⅠ抗體比抗心磷脂抗體和狼瘡抗凝物在血栓形成患者中更具有特異性。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，研究人員從APS患者中分離出aβ2GPⅠ抗體，注入小鼠體內(nèi)，結(jié)果示小鼠血栓形成的發(fā)病率明顯增加[1-3]。Arad等[4]發(fā)現(xiàn)，純化的自身抗體以劑量依賴(lài)的方式增加血栓大小。然而，aβ2GPⅠ抗體陽(yáng)性的SLE患者中僅部分發(fā)生血栓/栓塞。本研究64例aβ2GPⅠ抗體陽(yáng)性的SLE患者中，只有12例患者發(fā)生臨床血栓事件，陽(yáng)性率為18.75%。根據(jù)aβ2GPⅠ抗體重鏈免疫原性不同，其可分為IgA、IgG、IgM 3類(lèi)，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)這3類(lèi)抗體的研究尚不多見(jiàn)。有研究認(rèn)為，aβ2GPI-IgA在SLE患者中出現(xiàn)頻率很高[5-7]。研究人員檢測(cè)了SLE患者和健康對(duì)照組的抗心磷脂抗體和aβ2GPⅠ抗體發(fā)現(xiàn)，SLE患者aβ2GPI-IgA和抗心磷脂抗體陽(yáng)性率明顯高于健康對(duì)照組[5]。Lakos等[8]評(píng)估了33例APS患者，發(fā)現(xiàn)59.3%的患者aβ2GPI-IgA。Lee等[9]分析了270例SLE患者aβ2GPI的特異性，IgG、IgM和IgA類(lèi)aβ2GPⅠ抗體的陽(yáng)性率分別為38.1%、13.7%和34.8%。Mehrani和Petri[10]的研究顯示，IgG、IgM和IgA類(lèi)的aβ2GPⅠ抗體陽(yáng)性率依次為5.4%、15.8%和20.2%；且另外分析發(fā)現(xiàn)，IgM類(lèi)(28.9%)和IgA類(lèi)(22.2%)aβ2GPⅠ抗體常見(jiàn)。關(guān)于這3類(lèi)抗體與血栓關(guān)聯(lián)性的研究較少，且研究結(jié)果和理解尚未取得一致，甚至存在結(jié)論相反的情況。有學(xué)者認(rèn)為，aβ2GPI-IgA與血栓病史明顯相關(guān)[5-6]。但是，有的研究卻支持與血栓/栓塞發(fā)生相關(guān)的主要是aβ2GPI-IgG[11]。這或許是由于多數(shù)調(diào)查研究是回顧性的，且實(shí)驗(yàn)方法和條件往往不同，研究個(gè)體間存在其他血栓性疾病危險(xiǎn)因素。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，SLE患者中未發(fā)生臨床血栓事件患者aβ2GPI-IgA、aβ2GPI-IgM血漿表達(dá)水平顯著高于發(fā)生血栓事件的患者，aβ2GPI-IgG血漿水平與后者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；未發(fā)生臨床血栓事件的患者aβ2GPI-IgA、aβ2GPI-IgM 濃度亦高于發(fā)生臨床血栓的患者，兩組患者的aβ2GPI-IgG濃度無(wú)明顯差異。這提示，aβ2GPⅠ抗體的存在或濃度水平并不是SLE血栓形成的必然相關(guān)因素，且本研究也不支持IgA、IgM和IgG類(lèi)aβ2GPⅠ抗體在誘發(fā)SLE并發(fā)臨床血栓事件中有明確差異性。

研究人員對(duì)IgA、IgG和IgM 3類(lèi)aβ2GPⅠ抗體與血栓事件發(fā)生的關(guān)聯(lián)性尚未得到一致結(jié)論。但也有人提出，3類(lèi)aβ2GPⅠ抗體與動(dòng)脈血栓事件和靜脈血栓事件的關(guān)聯(lián)性不同。部分專(zhuān)家認(rèn)為，IgM類(lèi)抗體和動(dòng)脈血栓形成有關(guān)，而IgG類(lèi)抗體則和靜脈血栓形成相關(guān)[12]。Mehrani和Petri[10]的研究顯示，IgA和IgG類(lèi)抗體和靜脈血栓形成有明顯相關(guān)性，且IgG類(lèi)抗體和靜脈血栓的關(guān)聯(lián)性更強(qiáng)，但I(xiàn)gM類(lèi)抗體與動(dòng)、靜脈血栓形成均無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。本研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論有無(wú)SLE基礎(chǔ)免疫性疾病，在發(fā)生臨床血栓事件的患者中，發(fā)生靜脈血栓事件的患者aβ2GPI-IgG水平顯著高于發(fā)生動(dòng)脈血栓事件的患者，而aβ2GPI-IgM濃度明顯低于后者，兩組患者aβ2GPI-IgA水平無(wú)明顯差異。本研究結(jié)果更支持aβ2GPI-IgG和靜脈血栓關(guān)聯(lián)，aβ2GPI-IgM和動(dòng)脈血栓形成有關(guān)的結(jié)論。

[1]Romay-Penabad Z， Montiel-Manzano MG， Shilagard T，et al. Annexin A2 is involved in antiphospholipid antibody-mediated pathogenic effects in vitro and in vivo[J]. Blood,2009,114：3074-3083.

[2]Ramesh S， Morrell CN， Tarango C，et al. Antiphospholipid antibodies promote leukocyte-endothelial cell adhesion and thrombos is in mice by antagonizi ng eNOS via b2GPI and apoER2[J]. J Clin Invest,2011,121：120-131.

[3]Romay-Penabad Z， Aguilar-Valenzuela R， Urbanus RT，et al. Apolipoprotein E receptor 2 is involved in the thrombotic complications in a murine model of the antiphospholipid syndrome[J]. Blood,2011,117：1408-1414.

[4]Arad A， Proulle V， Furie RA， et al. b2-glycoprotein-1 autoantibodies from patients with antiphospholipid syndrome are sufficient to potentiate arterial thrombus formation in a mouse model[J]. Blood,2011,117：3453-3459.

[5]Andreoli L， Fredi M， Nalli C，et al. Clinical significance of IgA anti-cardiolipin and IgA anti-β2glycoprotein I antibodies[J]. Curr Rheumatol Rep, 2013,15：343.

[6]Kumar S， Papalardo E， Sunkureddi P，et al. Isolated elevation of IgA anti-beta2glycoprotein I antibodies with manifestations of antiphospholipid syndrome：a case series of five patients[J]. Lupus, 2009,18：1011- 1014.

[7]Danowski A， Kickler T， Petri M. Anti-β2-glycoprotein I：prevalence， clinical correlations， and importance of persistent positivity in patients with antiphospholipid syndrome and systemic lupus erythematosus[J]. J Rheumatol,2006,33：1775-1779.

[8]Lakos G， Kiss E， Regeczy P， et al. Isotype distribution and clinical relevance of anti-β2-glycoprotein I antibodies：importance of IgA isotype[J]. Clin Exp Immunol,1999,117：574-579.

[9]Lee S， Cho M， Joo Y， et al. Isotypes of anti-β2-glycoprotein I antibodies：association with thrombosis in patients with systemic lupus erythematosus[J]. J Rheumatol,2001,28：520- 524.

[10] Mehrani T, Petri M.Association of IgA Anti-beta2 glycoprotein I with clinical and laboratory manifestations of systemic lupus erythematosus[J].Rheumatol, 2011,38：64-68.

[11] Lee SS， Cho ML， Joo YS， et al. Isotypes of anti-beta2-glycoprotein-I antibodies：association with thrombosis in patients with systemic lupus erythematosus[J]. J Rheumtol， 2001，28：520-524.

[12] Carlos JB，Wenche JY,Lawrence L.Factor VlI/VIIa：a new antigen in the anti-phospholipid antibody syndrome[J].British J Haematol，2003，120：618-626.