楊文平， 張家琦， 曹果清， 周忠孝

(1.河北聯合大學生命科學學院，河北 唐山 063000； 2.山西農業(yè)大學動物科技學院， 山西 太谷 030801)

主要組織相容性復合體(Major histocompatibility-complex，MHC)作為動物抗病力的遺傳標記，在輔助抗病性選擇上發(fā)揮著重要的作用[1].豬的MHC稱為SLA(Swine leukocyte antigen)復合體，按其結構、分布和功能主要有I類、Ⅱ類和Ⅲ類等3大類基因，Ⅱ類基因控制著機體的免疫應答與免疫調節(jié)，主要包括DRA，DRB，DQA，DQB，DPB，DPA，DZA和DOB等.研究發(fā)現SLA基因與生長、胴體品質、肉質以及繁殖性狀均存在一定的關聯性[2,3].SLA-DQB基因外顯子2的高度多態(tài)性成為近年來的研究熱點[4～9].山西白豬是用馬身豬、長白豬和太湖豬培育的新品系.有關山西白豬的相關研究未見報道.本研究采用PCR-RFLP法對山西白豬的SLA-DQB基因多態(tài)性與生產性狀進行關聯分析，為評價、選育山西白豬提供依據.

1 材料與方法

1.1試驗材料

從大同種豬場選擇山西白豬培育過程中年齡、體重相近的不同世代后備豬個體174頭檢測SLA-DQB基因多態(tài)性，再選擇其中的87頭世代、年齡和性別相同的個體用于生產性狀研究.

1.2基因組DNA提取

按常規(guī)的酚/氯仿抽提法提取基因組DNA.

1.3SLA-DQB基因的PCR-RFLP

引物參照文獻[10]進行設計，由大連寶生物工程有限公司合成，擴增片段為273 bp.引物序列為：Forward：5′-cggaattccccgcagaggatttcgtgtacc-3′；Reverse：5′-ccgtcgtgccttcctctat-3′.PCR反應體系為20 μL,其中10×buffer(Mg2+)2.0 μL，250 μmol·L-1的dNTPs，10 pmol的引物，基因組DNA約50 ng，1.0 U Taq酶.PCR擴增條件： 94 ℃變性5 min；94 ℃，30 s；57 ℃，30 s；72 ℃，30 s；30個循環(huán)；72 ℃延伸7 min.擴增產物用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測.

選用HaeⅢ限制性內切酶酶切PCR擴增產物，酶切反應體系為10 μL，其中擴增產物6 μL，限制性內切酶(10 U·μL-1)0.3 μL，10×buffer 1.0 μL，ddH2O 2.7 μL，37 ℃反應過夜.酶切產物采用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，并判定SLA-DQB基因的基因型.

1.4生產性能測定和統(tǒng)計分析

測定山西白豬培育過程中后備豬的生長發(fā)育和體尺性狀，包括初生重、28日齡斷奶重、6月齡體重、體長、體高、胸圍和背膘厚等.利用SAS軟件進行性狀關聯分析.

2 結果與分析

2.1PCR擴增

引物擴增所得PCR產物用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測.結果表明，174個樣本的電泳檢測結果與圖1中顯示的4個樣本的電泳檢測結果完全相同，所有樣本的擴增片段與目的片段大小一致且特異性好，相對分子質量是273 bp，可進行RFLP分析.

M．DL 1 000 Marker ; 1～4. PCR擴增產物.

2.2SLA-DQB基因的PCR-RFLP

采用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳對HaeⅢ酶切產物進行分析，結果表明，山西白豬SLA-DQB外顯子2在HaeⅢ酶切位點上有多態(tài)性，共檢測到5種基因，分別是A：167 bp/23 bp/29 bp/54 bp；B：84 bp/83 bp/23 bp/29 bp/54 bp；C：167 bp/102 bp/4 bp；D：167 bp/106 bp，E：167 bp/23 bp/83 bp，呈現6種不同基因型(圖2)，分別是AA：167 bp/23 bp/29 bp/54 bp；BB：84 bp/83 bp/23 bp/29 bp/54 bp；CC：167 bp/102 bp/4 bp；EE：167 bp/23 bp/83 bp；AC：167 bp/23 bp/29 bp/54 bp/4 bp/102 bp；CD：167 bp/106 bp/4 bp/102 bp.

1. Marker(50 bp)；2. AA；3. CC；4. EE；5. AC；6. CD；7. BB.

2.3SLA-DQB外顯子2多態(tài)性與生產性狀的關聯分析

對山西白豬SLA-DQB基因外顯子2多態(tài)性與其生產性狀進行了關聯分析(表1和表2).最小二乘分析結果表明，EE型個體的初生重顯著高于AA型和CC型個體(P<0.05)，3 種基因型在初生重的大小排列順序為CC0.05).

表1 山西白豬不同基因型個體的體重性狀

表2 山西白豬不同基因型個體的體尺性狀

3 討論

周波等[8]對五指山豬、二花臉豬和皮特蘭豬的研究，包文斌等[9]對蘇太豬的研究，孫瑞萍等[11]對海南五指山豬、臨高豬及屯昌豬的研究，均發(fā)現SLA-DQB基因外顯子2具有不同程度的多態(tài)性.本研究中，山西白豬SLA-DQB基因外顯子2經HaeⅢ酶切后，檢測到A，B，C，D和E等5種等位基因，得到AA，BB，CC，EE，AC和CD等6種不同基因型，與SLA-DQB已被證明存在豐富的多態(tài)性相一致.但陳江偉等[12]對廣西巴馬小型豬的研究發(fā)現，SLA-DQB基因外顯子2無多態(tài)性位點，可能與長期封閉選育導致基因座純合及采集的樣本數量較少有關.

研究表明，SLA的遺傳多態(tài)性與豬生產性能和繁殖性能有關[5,9,13,14].采用血清學或細胞學方法進行研究，王林云等[13]認為，不同SLA單倍型對中國豬種二花臉的產活仔數的影響有明顯的差異，季海峰等[14]對中國經產瘦肉豬新品系母豬SLA的研究表明，D型母豬的產仔性能顯著高于其他類型.采用分子遺傳學方法進行研究，吳圣龍等[5]和包文斌等[9]表明蘇太豬SLA-DQB基因與繁殖性能具有一定的相關性.本研究采用分子遺傳學方法將HaeⅢ限制性內切酶酶切SLA-DQB基因所得的AA，EE和CC基因型對生產性狀進行關聯分析，發(fā)現EE型個體的初生重顯著高于AA型和CC型個體(P<0.05)，3 種基因型在初生重的大小排列順序為CC

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