李小軍，閆文朝，錢偉鋒，王天奇，韓利方，袁 林，黃騰飛

肉孢子蟲病(Sarcocystosis)是一種食源性人獸共患寄生蟲病，能感染人和豬、牛等多種動(dòng)物，呈世界性分布[1-2]。目前能感染豬的至少有2種肉孢子蟲，為米氏肉孢子蟲(Sarcocystismiescheriana)和豬人肉孢子蟲(S.suihominis)，其中米氏肉孢子蟲對(duì)豬具有明顯的致病性[3-7]，豬人肉孢子蟲對(duì)人表現(xiàn)一定的致病性[4]。有文獻(xiàn)報(bào)道[1,8]，志愿者食入生豬肉后，除了表現(xiàn)嘔吐、腹瀉等腸型肉孢子蟲感染癥狀外，還出現(xiàn)肌肉疼痛和心肌炎等肌肉型肉孢子蟲感染癥狀。豬肉中是否含有能感染人肌肉的肉孢子蟲呢？需要進(jìn)一步證實(shí)。因此，弄清豬源肉孢子蟲病原種類、感染性和致病性等病原學(xué)特性，具有重要的獸醫(yī)公共衛(wèi)生意義。

豬肉是國人最主要的肉食品之一。據(jù)河南省畜牧局統(tǒng)計(jì)，截至2011年全省生豬存欄量已達(dá)3 500萬頭左右,生豬已成為我省畜牧業(yè)的支柱畜種[9]。為了摸清近年來豬肉孢子蟲病的流行情況，評(píng)估豬源肉孢子蟲的公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)，課題組從2011年1-12月，對(duì)豫北某大型屠宰場屠宰生豬肉孢子蟲感染情況進(jìn)行了調(diào)查和分析。

1 材料與方法

1.1采樣 豫北某大型屠宰場屠宰的生豬，宰前2 h，嚴(yán)格按照生豬屠宰檢疫規(guī)程的要求，對(duì)生豬實(shí)施臨床檢查，經(jīng)臨床檢查健康的，準(zhǔn)予屠宰。宰后在屠宰生產(chǎn)線上，每頭豬胴體劈半前，采取兩橫膈肌腳的新鮮肉樣，每塊不少于30 g，與胴體編號(hào)對(duì)應(yīng)放于帶編號(hào)的托盤內(nèi)，每盤10頭豬的肉樣，及時(shí)送寄生蟲檢疫室進(jìn)行檢查。

1.2肉眼篩查 先剝離每份新鮮肉樣上附著的脂肪組織、結(jié)締組織，撕去肌膜，在日光燈下肉眼仔細(xì)觀察，是否有肉孢子蟲包囊存在，然后用顯微鏡觀察給予確認(rèn)[10]，注意與囊蟲、旋毛蟲包囊相區(qū)別。成熟的豬囊蟲：大小約為(6～10) mm×5 mm，肉眼可見如黃豆粒大小的包囊，位于肌纖維之間，呈橢圓形半透明，囊內(nèi)充滿液體，壁上有一個(gè)圓形米粒大的乳白色內(nèi)翻頭節(jié)；旋毛蟲包囊：肉眼下，在肌肉表面可看到稍凸出的針尖大小、黃白色或灰白色小點(diǎn)。顯微鏡下，旋毛蟲包囊位于肌纖維之間的棱形腔內(nèi)，包囊內(nèi)的幼蟲呈螺旋狀卷曲；肉孢子蟲包囊：肉眼可見在肉樣中呈白色毛根狀，壓片鏡檢呈灰白色柳葉形，有時(shí)呈橢圓形、梭形、半月形或不規(guī)則形[10-13]。

1.3肉樣壓片鏡檢 在每塊膈肌腳上，順肌纖維方向隨機(jī)剪米粒大小的肉樣12粒，每頭豬24粒，置于載玻片上，滴加適量20%甘油水溶液透明，蓋上一張載玻片壓片，將兩片玻片用力擠壓，至肉樣半透明狀，以透過肉樣可見報(bào)紙上的字為準(zhǔn)，用自制橡皮圈固定。在4×10倍光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行檢查。

在任何一塊被檢肉樣上發(fā)現(xiàn)肉孢子蟲包囊，即判為陽性；對(duì)未發(fā)現(xiàn)蟲體包囊的則判為陰性。 觀察標(biāo)本上的肉孢子蟲包囊形態(tài)、顯微測量其大小，并統(tǒng)計(jì)檢出率和感染強(qiáng)度。參考豬肉旋毛蟲檢疫標(biāo)準(zhǔn)[12]，以24粒肉樣為單位，計(jì)算肉孢子蟲感染強(qiáng)度。檢出包囊3個(gè)以下的，定為輕度感染；4個(gè)到7個(gè)的定為中度感染；8個(gè)以上的定為重度感染。

1.4病理組織學(xué)觀察 為了進(jìn)一步確定豬源肉孢子蟲包囊的結(jié)構(gòu)、寄生部位及其引起肌肉的病理變化，對(duì)壓片鏡檢肉孢子蟲陽性的豬，采集其腰肌、肋間肌、頸背側(cè)肌、股內(nèi)側(cè)肌和膈肌等肌肉樣品，固定于10%的福爾馬林溶液內(nèi)。然后通過水洗、逐級(jí)脫水、透明、浸蠟、組織包埋、切片和HE染色等組織切片技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行處理，最后在顯微鏡下觀察包囊在豬肉中寄生情況和引起的病理組織學(xué)變化[7]。

2 結(jié) 果

2.1屠宰生豬肉孢子蟲感染情況 本次共調(diào)查屠宰生豬1 016 220頭，生豬主要來源于豫北地區(qū)，少量來自豫西、與河南交界的山西部分縣區(qū)。通過對(duì)膈肌的肉眼檢查和壓片鏡檢，肉孢子蟲平均陽性檢出率為2.38 ‰，其中3-7月份肉孢子蟲檢出率為3.07‰～5.29‰,明顯高于2011年其它月份；9-12月份檢出率為0.17‰～0.46‰，遠(yuǎn)低于其他月份(表1)。

24粒肉樣壓片鏡檢發(fā)現(xiàn)，69.61%的陽性豬屬于輕度感染，28.16%的陽性豬屬于中度感染，僅有2.23%陽性豬為重度感染。說明來自豫北、豫西地區(qū)及與河南交界的山西部分地區(qū)的生豬肉孢子蟲輕度和中度感染非常普遍。

表1不同月份屠宰生豬肉孢子蟲感染情況統(tǒng)計(jì)表

Tab.1PositiverateofSarcocystiscystsintheslaughteredpigsduringJanuaryandDecemberof2011

MonthNo. slaughtered pigsNo. positivepigs Positive rate /‰186 6661411.62266 9501131.693103 4995485.294103 0833163.07597 7743163.23686 0653794.40779 9123684.60871 0741291.81984 259320.381089 084410.461165 008250.381282 846140.17Total1 016 2202 4222.38

2.2豬源肉孢子蟲包囊的形態(tài)學(xué)觀察 肉眼可以觀察到新鮮肉樣中肉孢子蟲包囊呈白色毛根狀，與肌纖維平行分布，但是于4 ℃或-20 ℃保存后就不易辨認(rèn)。有包囊寄生的部位，肌肉組織色澤、硬度、氣味一般無明顯變化；嚴(yán)重感染蟲體密集部位，肌肉色澤變淡。

壓片鏡檢結(jié)果顯示，在膈肌、頸背側(cè)肌、腰肌、肋間肌和股內(nèi)側(cè)肌中均發(fā)現(xiàn)肉孢子蟲包囊，與肌纖維平行，其中膈肌和頸背側(cè)肌包囊寄生密度較大。包囊形態(tài)主要有梭形、柳葉狀和棒狀(如圖1-A和1-B)。

組織切片結(jié)果顯示，肉孢子蟲包囊寄生于肌纖維內(nèi)，與肌纖維縱軸平行。在豬肌肉中存在有厚壁型和薄壁型包囊，其中前者的囊壁呈柵欄狀(如圖2-A)，后者為一薄層光滑的壁(如圖2-B)，包囊內(nèi)含有大量呈香蕉狀的慢殖子(如圖2-A和2-B)。參考相關(guān)文獻(xiàn)，在包囊形態(tài)上，來自豫北、豫西地區(qū)以及與河南交界的山西部分地區(qū)的生豬肌肉中的部分包囊與米氏肉孢子蟲相似[3,14]，另外一部分包囊即薄壁型包囊是否是其他蟲種需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

圖1肌肉壓片鏡檢下的豬源肉孢子蟲包囊，呈柳葉狀(A和B)。

Fig.1Willowleaf-likecystsofSracocystis(AandB)frompigsdetectedusingmusclesquashingmicroscopicobservation

圖2豬肉中肉孢子蟲包囊病理組織學(xué)觀察

A：寄生于膈肌纖維內(nèi)的包囊，其內(nèi)部含有大量慢殖子，包囊壁較??；B：頸背側(cè)肌纖維內(nèi)的包囊，其壁呈柵欄狀厚壁型；C和D：寄生于膈肌纖維內(nèi)的包囊引起肌纖維變性、萎縮和橫紋消失等病理損傷。

Fig.2HistopathologicalobservationofSarcocystiscystsinpork

Two types of cysts, smoothly thin wall of cysts (A) in diaphragmatic muscles of pigs and palisade-like thick wall of cysts (B), in nape of neck side muscle and numerous bradyzoites were present in both cysts (×640). Obvious atrophy of muscles, and disappearance of striation of myofibril is the result of degeneration and necrosis of muscle cells caused by cysts (×400).

2.3包囊引起的組織病變 病理組織觀察結(jié)果顯示，肉孢子蟲包囊引起豬膈肌、頸背側(cè)肌等不同部位肌纖維紅染變性、壞死、橫紋消失，大量寄生有包囊的肌纖維和肌膜之間間隙變寬，引起肌纖維萎縮等病理損傷(如圖2-C和D)。說明豬源肉孢子蟲包囊對(duì)豬也表現(xiàn)明顯致病性。

3 討 論

3.1豫北地區(qū)屠宰生豬肉孢子蟲感染情況與分析 豬肉孢子蟲病于1865年首次在豬的舌肌和心肌中發(fā)現(xiàn)，隨后世界各地均有報(bào)道。國外豬的感染率為0.2%～96%，國內(nèi)豬感染率為7.76%～80%，不同地區(qū)豬感染率差異較大[3-5]。本次調(diào)查豫北地區(qū)屠宰生豬肉孢子蟲包囊檢出率為2.38‰,相對(duì)國內(nèi)其他省區(qū)的報(bào)道[15-16]，結(jié)果偏低；與1992年報(bào)道[17]豫南地區(qū)豬群感染結(jié)果相比也較低。其原因可能有以下4點(diǎn)：一是近幾年河南省加快標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖建設(shè)，形成一大批標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)模豬場和養(yǎng)殖小區(qū)，優(yōu)化了養(yǎng)殖環(huán)境，豬場和養(yǎng)殖戶的防疫意識(shí)增強(qiáng)，有效的切斷了中間宿主與終末宿主(犬、貓和人等)的接觸。相對(duì)于傳統(tǒng)落后的散養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖飼養(yǎng)周期短，減少了感染機(jī)會(huì)；二是本屠宰場為大型屠宰場，嚴(yán)格按生豬屠宰檢疫規(guī)程的要求實(shí)施宰前檢疫，宰前檢查剔除了部分亞健康生豬，減少了亞健康生豬進(jìn)入屠宰線,其中可能有部分陽性豬，降低了宰后陽性檢出率；三是本次調(diào)查是在屠宰流水線上操作，對(duì)每頭豬的判定有嚴(yán)格的時(shí)間限制，可能導(dǎo)致漏檢現(xiàn)象；四是豬源肉孢子蟲包囊長度僅有0.5～3 mm，形狀纖細(xì)[7,11,14]，在肉樣中容易與肌間脂肪和結(jié)締組織混淆，再加上感染強(qiáng)度較低時(shí)，更容易導(dǎo)致漏檢問題。因此作者推測豫北地區(qū)實(shí)際豬肉孢子蟲感染率應(yīng)該高于本實(shí)驗(yàn)壓片鏡檢結(jié)果。要想弄清豬群中肉孢子蟲的真實(shí)感染情況，需要建立敏感、特異和快速的免疫學(xué)方法如ELISA、免疫檢測試紙條，實(shí)施宰前的檢測和流行病學(xué)調(diào)查[18-19]。

本實(shí)驗(yàn)參考旋毛蟲檢疫標(biāo)準(zhǔn)[12]，結(jié)合豬源肉孢子蟲的自身特點(diǎn)，建立了豬肉中肉孢子蟲包囊感染強(qiáng)度的統(tǒng)計(jì)方法，該方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較低，結(jié)果可靠，利用該方法不僅可以檢測新鮮肉樣中的包囊，而且還可以檢測4 ℃或-20 ℃保存后的樣品，但其缺點(diǎn)是敏感性低，操縱繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。本次研究發(fā)現(xiàn)，豫北地區(qū)絕大多數(shù)陽性豬為輕度至中度感染，這可能與宰前嚴(yán)格剔除亞健康生豬有關(guān)。

3.2肉孢子蟲包囊的致病性分析 本次研究發(fā)現(xiàn)，豬源肉孢子蟲包囊能引起豬肌纖維變性、壞死和萎縮等病理變化，進(jìn)而影響豬機(jī)體運(yùn)動(dòng)、呼吸和心臟等功能。這與文獻(xiàn)報(bào)道的豬源肉孢子蟲感染能引起豬出現(xiàn)跛行、運(yùn)動(dòng)困難和肌炎等癥狀相一致[3,5]。說明豬源肉孢子蟲不僅在肝臟血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的裂殖生殖階段對(duì)豬有較強(qiáng)致病性，而且在橫紋肌和心肌內(nèi)的包囊對(duì)豬也有明顯的致病性。因此，在養(yǎng)豬生產(chǎn)和屠宰檢疫中應(yīng)充分認(rèn)識(shí)到豬肉孢子蟲病的危害性，并予以重視。

3.3豬源肉孢子蟲的公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)性分析 豬肉孢子蟲病其病原目前報(bào)道的有3種：米氏肉孢子蟲、豬人肉孢子蟲和豬貓肉孢子蟲，前2種有效性得到公認(rèn)，而豬貓肉孢子蟲其作為獨(dú)立種的有效性尚有爭議。目前已知豬人肉孢子蟲的能感染人[1,3,20]。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，豫北地區(qū)屠宰生豬感染的肉孢子蟲包囊分為兩類：厚壁型和薄壁型，其中厚壁型包囊的大小和囊壁特征與米氏肉孢子蟲相似，該結(jié)果也得到分子鑒定結(jié)果的證實(shí)[7]；另外一種薄壁型包囊是前一種的未成熟包囊還是其他蟲種，有待通過分子標(biāo)記技術(shù)等手段進(jìn)一步驗(yàn)證。

據(jù)文獻(xiàn)記載[1,21]，近100例病人表現(xiàn)肌肉型肉孢子蟲感染，說明人可以作為某些未知肉孢子蟲的中間宿主。有文獻(xiàn)報(bào)道，志愿者食入生豬肉后，除了表現(xiàn)腸型肉孢子蟲感染癥狀外，還出現(xiàn)肌肉疼痛和心肌炎等肌肉型肉孢子蟲感染癥狀[4,21]。推測豬肉中可能含有能感染人肌肉的未知肉孢子蟲。本次調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，豫北地區(qū)屠宰生豬肉孢子蟲陽性檢出率遠(yuǎn)高于豬囊尾蚴和旋毛蟲。據(jù)悉，河南省豬囊尾蚴和旋毛蟲目前檢出率低于萬分之一，這與標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖和嚴(yán)格的檢疫制度有密切關(guān)系[11]。說明目前豬肉孢子蟲感染率較高與獸醫(yī)界和屠宰檢疫過程中重視不夠有關(guān)。豬肉是人們最主要的肉食品之一，而且豬群數(shù)量龐大，與人類接觸機(jī)會(huì)較多，豬群中肉孢子蟲高陽性率對(duì)人類健康構(gòu)成潛在的威脅。因此，通過分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)豬源肉孢子蟲進(jìn)行分子流行病學(xué)規(guī)律研究[22-24]，尤其是揭示對(duì)人類具有感染性和致病性的豬源肉孢子蟲，具有重要的公共衛(wèi)生意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]Fayer R.Sarcocystisspp. in human infections[J]. Clin Microbiol Rev, 2004, 17(4): 894-902. DOI:10.1128/CMR.17.4.894-902.2004

[2]Dorny P, Praet N, Deckers N, et al. Emerging food-borne parasites[J]. Vet Parasitol, 2009, 163(3): 196-206. DOI:10.1016/j.vetpar.2009.05.026

[3]Li XJ, Han LF, Yan WC, et al. A review of sarcocystosis in pigs[J]. Chin J Zoonoses, 2012, 28(7): 90-93. DOI:10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.06.001 (in Chinese)

李小軍,韓利方,閆文朝,等.豬住肉孢子蟲病的研究進(jìn)展[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào), 2012, 28(7): 57-61. DOI:10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.06.001

[4]Taylor MA, Coop RL, Wall RL. Veterinary parasitology[M]. 3rded. Oxford: Blackwell Publishing Company, 2007: 345-347.

[5]Caspari K, Grimm F, Kuhn N, et al. First report of naturally acquired clinical sarcocystosis in a pig breeding stock[J]. Vet Parasitol, 2011, 177(1-2): 175-178. DOI:10.1016/j.vetpar.2010.11.019

[6]Avapal RS, Sharma JK, Juyal PD. Pathological changes inSarcocystisinfection in domestic pigs (Susscrofa)[J]. Vet J, 2004, 168(3): 358-361. DOI:10.1016/j.tvjl.2003.11.006

[7]Yan W, Qian W, Li X, et al. Morphological and molecular characterization ofSarcocystismiescherianafrom pigs in the central region of China[J]. Parasitol Res, 2013, 112: 975-980. DOI:10.1007/s00436-012-3219-9

[8]Li JH, Lin Z, Dou JF, et al. Infective test ofSarcocystissuihominisisolated from Guangxi province[J]. Chin J Parasitol Parasit Dis, 2007, 25(6): 466-468. (in Chinese)

李錦輝，林珍，杜進(jìn)發(fā)，等. 廣西豬人肉孢子蟲實(shí)驗(yàn)感染研究[J]. 中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志,2007,25(6):466-468.

[9]Beijing Oriental Iger Agricultural Consulting Co., Ltd. Analysis on the prospect of Chinese pork industry[J]. Chin J Food Industry, 2008, 3: 10-11. (in Chinese)

北京東方艾格農(nóng)業(yè)咨詢有限公司.中國豬肉工業(yè)前景分析[J]. 中國食品工業(yè),2008, 3:10-11.

[10]Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China. Quarantine standard of the slaughtered pigs (NY/T909-2004)[S]. Beijing: China Agriculture Press, 2005: 4. (in Chinese)

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.生豬屠宰檢疫規(guī)范(NY/T909-2004)[S]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005:4.

[11]Su J, Li WF, Li SH. Identification ofCysticercuscellulosae,TrichinellaspiralisandSarcocystisin slaughtering pigs[J]. J Breeding Feed, 2011, (60): 75. (in Chinese)

蘇炯, 李維芬, 李四華.生豬屠宰檢疫中囊蟲、旋毛蟲和住肉孢子蟲的鑒別[J].養(yǎng)殖與飼料, 2011, (60) : 75.

[12]General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of P.R.C. Diagnostic techiques for trichinella spiralis in swine (GB/T18642-2002[S]). 2002.2. (in Chinese)

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. 豬旋毛蟲病診斷技術(shù)(GB/T18642-2002)[S]. 2002.2.

[13]General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of P.R.C. Diagnostic techniques for cysticercosis cellulosae in swine (GB/T18644-2002[S]). 2002.2.

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. 豬囊尾蚴病診斷技術(shù)(GB/T18644-2002)[S]. 2002.2.

[14]Lin QW, Liu HH, Wang M, et al. Light and electron microscopic observation ofSarcocystismiescherianain pigs[J]. J South China Agr Univ, 1992, (Suppl): 15-18. (in Chinese)

林慶文，劉海虹，汪明，等. 豬米氏住肉孢子蟲包囊的光鏡與電鏡研究[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，(增刊)：15-18.

[15]Chen LY, Zhou BJ, Li CY, et al. A review of epidemiology of Sarcocystis species[J]. Chin J Zoonoses, 2008, 24(7): 675-677. (in Chinese)

陳連勇, 周本江, 李翠英,等. 肉孢子蟲流行病學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國人獸共患病學(xué)報(bào)2008，24(7)，675-677.

[16]Wang RJ, Ji SH, Ji SJ. Prevalence of Sarcocystis infection in slaughtering pigs[J]. Chin J Vet Med, 2006, 42(8): 53-54. (in Chinese)

王榮菊，吉生宏，姬生儉. 屠宰場豬住肉孢子蟲感染情況調(diào)查[J]. 中國獸醫(yī)雜志,2006,42 (8):53-54.

[17]Chen HZ, Chen WJ, Yang WM, et al. Investigation of sarcocystosis in Huai’nan pigs[J]. J Henan Agr Sci, 1992, (8): 36-37. (in Chinese)

陳宏智, 陳偉基, 楊文明,等. 淮南豬住肉孢子蟲病的調(diào)查研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué), 1992, (8) ：36-37.

[18]Michelle RY, Daniel KH. Improved detection of equine antibodies againstSarcocystisneuronausing polyvalent ELISAs based on the parasite SnSAG surface antigens[J]. Vet Parasitol , 2011, 176(1): 16-22. DOI:10.1016/j.vetpar.2010.10.034

[19]Ma BS, Su SX, Yang ZQ. Research progress on immunology of sarcocystosis[J]. J Yan’an Univ (Med Sci), 2011, 9(1): 15-18. (in Chinese)

馬碧書, 蘇紹祥, 楊照青. 肉孢子蟲免疫學(xué)及相關(guān)研究進(jìn)展[J]. 延安大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版), 2011,9(1):15-18.

[20]Hu JJ, Meng Y, Chen XW, et al. Research progress on human sarcocystosis[J]. Chin J Parasitol Parasit Dis, 2012, 28(6): 460-465. (in Chinese)

胡俊杰, 孟余，陳新文，等. 人肉孢子蟲病的研究進(jìn)展[J]. 中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志, 2012,28(6): 460-465.

[21]Velasquez JN, Risio CD, Etchart CB, et al. Systemic sarcocystosis in a patient with acquired immune deficiency syndrome[J]. Hum Pathol, 2008, 39: 1263-1267. DOI:10.1016/j.hum path. 2008.01.016

[22]Kia EB, Mirhendi H, Rezaeian M, et al. First molecular identification ofSarcocystismiescheriana(Protozoa, Apicomplexa) from wild boar (Susscrofa) in Iran[J]. Exp Parasitol, 2011, 127(3): 724-726. DOI:10.1016/j.exppara.2010.11.007

[23]Yang ZQ, Li QQ, Zuo YX, et al. Characterization ofSarcocystisspecies in domestic animals using a PCR-RFLP analysis of variation in the 18S rRNAgene: a cost-effective and simple technique for routine species identification[J]. Exp Parasitol, 2002, 102: 212-217. DOI:10.10 16/S0014-4894(03)00033-X

[24]Elsheikha HM, Mansfield LS. Molecular typing ofSarcocystisneurona: current status and future trends[J]. Vet Parasitol, 2007, 149(1/2): 43-55. DOI:10.1016/j.vetpar.2007.06.039