羅 丹(綜述)，楊亞明(審校)

(1.大理學(xué)院病原與媒介生物研究所普洱分部，云南 普洱 665000； 2.云南省寄生蟲(chóng)病防治所，云南 普洱 665000 )

鉤蟲(chóng)是三種主要的土源性線蟲(chóng)之一。在寄生人體消化道的線蟲(chóng)中，鉤蟲(chóng)的危害性最嚴(yán)重，可引起鉤蚴性皮炎、胃腸功能紊亂、營(yíng)養(yǎng)不良以及長(zhǎng)期慢性失血而導(dǎo)致的缺鐵性貧血及與貧血相關(guān)的癥狀。寄生人體的鉤蟲(chóng)主要為十二指腸鉤口線蟲(chóng)(Ancylostoma duodenale Dubini，1843)，簡(jiǎn)稱十二指腸鉤蟲(chóng)；美洲板口線蟲(chóng)(Necatoramericanus Stiles，1902)，簡(jiǎn)稱美洲鉤蟲(chóng)。據(jù)衛(wèi)生部2001～2004年全國(guó)人體寄生蟲(chóng)現(xiàn)狀調(diào)查顯示全國(guó)31個(gè)省鉤蟲(chóng)的感染率約為6.12%，推算感染人數(shù)約為3930萬(wàn)[1]，2006年全球約有7億人為鉤蟲(chóng)患者[2]，每年由此而損失的傷殘調(diào)整壽命年高達(dá)2210萬(wàn)人[3]。美洲鉤蟲(chóng)和十二指腸鉤蟲(chóng)在分布、致病力以及對(duì)驅(qū)蟲(chóng)藥的敏感性方面均有差異，例如美洲鉤蟲(chóng)和十二指腸鉤蟲(chóng)具有不同的地理分布，美洲鉤蟲(chóng)在熱帶環(huán)境中占主導(dǎo)地位，而十二指腸鉤蟲(chóng)適應(yīng)干燥寒冷的環(huán)境[4-5]；十二指腸鉤蟲(chóng)可造成感染者更多的失血[4]；其感染途徑除了可經(jīng)皮膚外，還可經(jīng)口腔黏膜感染[6]。我國(guó)使用阿苯達(dá)唑?qū)ν猎葱跃€蟲(chóng)流行的區(qū)域進(jìn)行大規(guī)模驅(qū)蟲(chóng)治療的結(jié)果顯示，對(duì)十二指腸鉤蟲(chóng)療效(92%)顯著優(yōu)于美洲鉤蟲(chóng)(69%～75%)[7-8]。因此，鑒別兩種鉤蟲(chóng)對(duì)流行病學(xué)、生態(tài)學(xué)和防治具有重要意義。

1 運(yùn)用形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行分類鑒定

1.2幼蟲(chóng) 通稱鉤蚴，常用試管濾紙培養(yǎng)法[10]將患者糞便中含有的鉤蟲(chóng)蟲(chóng)卵經(jīng)過(guò)3～5 d培養(yǎng)，孵育出幼蟲(chóng)經(jīng)鏡檢依據(jù)美洲鉤蟲(chóng)外形：長(zhǎng)紡錘形，蟲(chóng)體較短粗，頭端略圓，尾端較尖；鞘橫紋：顯著；口矛：黑色桿狀，前端稍分叉，兩矛粗細(xì)相等，兩矛間距窄；腸管：管腔較寬，為體寬的3/5，腸細(xì)胞顆粒少。十二指腸鉤蟲(chóng)外形：圓柱形，蟲(chóng)體細(xì)長(zhǎng)，頭端略扁平，尾端較鈍；鞘橫紋：不顯著；口矛：透明絲狀，背矛較粗，兩矛間距寬；腸管：管腔較窄，為體寬的1/2，腸細(xì)胞顆粒豐富[10]等形態(tài)特征進(jìn)行蟲(chóng)種的分類鑒別。

1.3蟲(chóng)卵 診斷鉤蟲(chóng)感染通常依據(jù)人類糞便樣本中檢出蟲(chóng)卵[11]，然而美洲鉤蟲(chóng)卵與十二指腸鉤蟲(chóng)卵極為相似，僅從形態(tài)學(xué)角度觀察難以區(qū)別[9]。

1.4內(nèi)鏡檢查

1.4.1胃鏡 常規(guī)進(jìn)鏡至十二指腸球部和降部,鏡下可見(jiàn)蟲(chóng)體長(zhǎng)0.5～1.5 cm的鉤蟲(chóng),活體呈半透明,灰白色、淡紅色或暗紅色,吸附于腸壁黏膜,呈蛇樣盤曲或蚯蚓樣蠕動(dòng),用活檢鉗鉗夾蟲(chóng)體,蟲(chóng)體來(lái)回?cái)[動(dòng),蟲(chóng)體吸附處黏膜局部充血水腫可見(jiàn)針尖大小新鮮出血灶呈散在點(diǎn)片狀出血，局部少許滲血[12-17]。

1.4.2結(jié)腸鏡 王聲旺等[18]對(duì)行胃鏡檢查，已排除上消化道疾病引起出血的可能，并且十二指腸未發(fā)現(xiàn)鉤蟲(chóng)的12例患者進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查。其中9例患者首次檢查發(fā)現(xiàn)鉤蟲(chóng)；3例患者在作結(jié)腸息肉治療時(shí)在盲腸、升結(jié)腸部位發(fā)現(xiàn)鉤蟲(chóng)蟲(chóng)體。張鳴青等[19]對(duì)10例不明原因腹痛、貧血、黑便的患者進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查，此前均進(jìn)行過(guò)胃鏡檢查，排除上消化道疾病引起出血的可能，4例進(jìn)行全消化道X線鋇餐造影，排除小腸疾病，鏡下可見(jiàn)在盲腸處有新鮮出血斑、蟲(chóng)體形態(tài)以及活動(dòng)情況。

1.4.3雙氣囊小腸鏡 Kshaunish等[20]報(bào)道了3例表現(xiàn)為黑便患者，經(jīng)胃鏡、結(jié)腸鏡檢查未見(jiàn)出血病灶，經(jīng)雙氣囊小腸鏡檢查，其病因是鉤蟲(chóng)感染。付唆林等[21]對(duì)反復(fù)臍周隱痛伴黑便的患者進(jìn)行雙氣囊小腸鏡檢查，進(jìn)鏡至空腸中下段時(shí)可見(jiàn)蟲(chóng)體形態(tài)、活動(dòng)情況以及黏膜損傷情況。

1.4.4膠囊內(nèi)鏡 陳佳敏等[22]報(bào)道，使用膠囊內(nèi)鏡檢查小腸鉤蟲(chóng)病，發(fā)現(xiàn)膠囊內(nèi)鏡可以清晰顯示蟲(chóng)體的形態(tài)、寄生小腸內(nèi)的分布、活動(dòng)和進(jìn)食情況以及腸壁被吸咬后的糜爛創(chuàng)面。常江等[23]報(bào)道,膠囊內(nèi)鏡診斷十二指腸鉤蟲(chóng)致消化道大出血1例，可見(jiàn)空腸上段附著數(shù)條約1 cm長(zhǎng)、肉色、半透明的鉤蟲(chóng)，呈蛇樣盤曲或蚯蚓狀蠕動(dòng)，局部黏膜明顯充血，伴散在損傷灶并有滲血。Christodoulou等[24]報(bào)道了1例原因不明的消化道出血患者，經(jīng)膠囊內(nèi)鏡檢查診斷為小腸鉤蟲(chóng)病，膠囊內(nèi)鏡能顯示小腸鉤蟲(chóng)感染和吸血情況，是診斷腸道寄生蟲(chóng)病的重要的工具。

2 運(yùn)用免疫學(xué)方法進(jìn)行分類鑒定

2.1免疫沉淀法 Carr等[25]對(duì)體外培養(yǎng)的美洲鉤蟲(chóng)成蟲(chóng)的排泄-分泌物，應(yīng)用免疫沉淀法進(jìn)行分析鑒定。結(jié)果顯示，感染該蟲(chóng)的受染人體血清均可沉淀15×103,13×103,33×103,44×103,46×103和69×103的抗原組分。在免疫印跡實(shí)驗(yàn)中，受感染動(dòng)物血清至少可識(shí)別15個(gè)蟲(chóng)體蛋白質(zhì)組分，其中包括上述的6個(gè)主要組分，而33×103的含量不如排泄-分泌物中的豐富;多個(gè)受感染者的血清也能識(shí)別33×103抗原組分。這些33×103抗原組分不能為感染蛔蟲(chóng)、鞭蟲(chóng)的個(gè)體血清所識(shí)別，十二指腸鉤蟲(chóng)也無(wú)此抗原，表明其具蟲(chóng)種特異性。

2.2SDS-PAGE法 Pritchard等[26]通過(guò)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylam idegelelectrophoresis,SDS-PAGE)發(fā)現(xiàn)所有的鉤蟲(chóng)抗原均含有(14～20)×103的多肽組分，而17×103的抗原組分是美洲鉤蟲(chóng)所獨(dú)有的，具有種特異性。(28～33)×103抗原組分，也能被感染了美洲鉤蟲(chóng)的患者血清所特異性識(shí)別。

2.3ELISA法 在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)中(28～33)×103抗原組分對(duì)于鑒別美洲鉤蟲(chóng)與其他蠕蟲(chóng)具有極高的敏感性[26]。

2.4SDS-PAGE法和ELIB法 聞禮永等[27]運(yùn)用SDS-PAGE和酶聯(lián)免疫印漬技術(shù)(enzyme-linked immunoblotting,ELIB)對(duì)采集自動(dòng)物模型的十二指腸鉤蟲(chóng)第三期幼蟲(chóng)可溶性抗原蛋白組分(Ad-L3-Ag)和成蟲(chóng)可溶性抗原蛋白組分(Ad-A-Ag)及免疫反應(yīng)性進(jìn)行了研究。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,十二指腸鉤蟲(chóng)幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)蛋白區(qū)帶數(shù)分別為21條和19條。將分帶后的Ad-L3-Ag和Ad-A-Ag進(jìn)行ELIB反應(yīng)表明,十二指腸鉤蟲(chóng)幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)特異性抗原組分分別為(40～41)×103和(54～56)×103。

3 運(yùn)用分子生物學(xué)方法

3.1DNA序列測(cè)定 李鐵華等[28]根據(jù)后生無(wú)脊椎動(dòng)物CO1基因保守區(qū)域序列,合成上、下游引物，聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)擴(kuò)增采集自四川省合江縣的鉤蟲(chóng)成蟲(chóng)的CO1基因，并對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，結(jié)果顯示十二指腸鉤蟲(chóng)與美洲鉤蟲(chóng)CO1基因序列同源性達(dá)89.7%，存在10.3%的特定核苷酸差異，并證明該核苷酸序列的差異是穩(wěn)定的，可作為兩種鉤蟲(chóng)鑒定的標(biāo)志。

3.2分子標(biāo)記 鄭琪等[29]根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中美洲鉤蟲(chóng)CO1基因和十二指腸鉤蟲(chóng)CO1基因的序列分別設(shè)計(jì)出美洲鉤蟲(chóng)種鑒別正反兩條PCR擴(kuò)增引物NaF-NaR，十二指腸鉤蟲(chóng)種鑒別正反兩條PCR擴(kuò)增引物AdF-AdR，對(duì)采集自福建、貴州、四川、海南和廣西五省鉤蟲(chóng)成蟲(chóng)的CO1基因進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果顯示以五省的美洲鉤蟲(chóng)DNA為模板的PCR擴(kuò)增均可獲得一條長(zhǎng)約500 bp的條帶，以五省的十二指腸鉤蟲(chóng)DNA為模板的PCR擴(kuò)增均可獲得一條長(zhǎng)約700 bp的條帶，特異性檢驗(yàn)顯示兩對(duì)引物具有較好的特異性，構(gòu)建特定的引物作為分類鑒定兩種鉤蟲(chóng)的分子標(biāo)志物是可行的。

3.3實(shí)時(shí)熒光PCR 汪家旭等[30]和Wang等[31]將采集自福建省廈門市海滄區(qū)農(nóng)村的人糞便標(biāo)本在27 ℃恒溫條件下孵化，收集鉤蚴，在根據(jù)GenBank中美洲鉤蟲(chóng)的ITS-2序列設(shè)計(jì)特異性引物,提取幼蟲(chóng)蟲(chóng)體基因組DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增ITS-2序列、克隆、測(cè)序和比對(duì)，實(shí)驗(yàn)獲得的美洲鉤蟲(chóng)rDNA ITS序列經(jīng)對(duì)比與數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列完全一致；利用常規(guī)PCR依次以美洲鉤蟲(chóng)、糞類圓線蟲(chóng)(Strongyloides stercoralis)、犬鉤蟲(chóng)(Ancylostoma caninum) DNA和水為模板檢驗(yàn)引物的特異性，結(jié)果顯示無(wú)PCR產(chǎn)物產(chǎn)生證明引物的特異性良好；將ITS-2序列擴(kuò)增產(chǎn)物回收、純化后經(jīng)T克隆轉(zhuǎn)入大腸埃希菌DH5a,提取重組質(zhì)粒,鑒定后作為標(biāo)準(zhǔn)模板建立熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,并做靈敏度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示各溶解曲線為單一吸收峰,產(chǎn)物專一；實(shí)時(shí)熒光PCR特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果美洲鉤蟲(chóng)檢出了明顯的擴(kuò)增曲線,而其余模版未檢出熒光曲線,表明所設(shè)計(jì)的美洲鉤蟲(chóng)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)引物能特異性檢測(cè)出美洲鉤蟲(chóng)DNA；實(shí)時(shí)熒光PCR可以檢測(cè)200 mg糞便中僅含有1個(gè)蟲(chóng)卵，靈敏度比常規(guī)PCR至少可高100倍；變異系數(shù)<3%,表明熒光PCR檢測(cè)方法具有較高的可重復(fù)性；為美洲鉤蟲(chóng)的鑒別以及快速、靈敏、定量檢測(cè)提供了技術(shù)支撐。

4 三種分類方法的優(yōu)缺點(diǎn)評(píng)述

以上綜述的方法中運(yùn)用形態(tài)學(xué)方法對(duì)兩種鉤蟲(chóng)進(jìn)行分類，所需儀器設(shè)備及操作方法相對(duì)比較簡(jiǎn)單，但這種方法可靠性不強(qiáng)，而且要求檢查者具有豐富的經(jīng)驗(yàn)并且熟練掌握兩種鉤蟲(chóng)成蟲(chóng)及幼蟲(chóng)的體態(tài)特征[32]，對(duì)待檢樣本也有較高要求，對(duì)于輕度感染患者，驅(qū)蟲(chóng)后獲取的蟲(chóng)體較少或蟲(chóng)體破損等均會(huì)影響檢查者的判斷；培養(yǎng)幼蟲(chóng)則需要耗費(fèi)時(shí)間；而對(duì)于蟲(chóng)卵僅從形態(tài)學(xué)不能進(jìn)行蟲(chóng)種鑒定。而運(yùn)用免疫學(xué)方法，由于其抗原特異性欠佳,作為蟲(chóng)種鑒定的可行性沒(méi)有確切的文獻(xiàn)證實(shí)，沒(méi)有得到廣泛應(yīng)用。現(xiàn)階段分子生物學(xué)技術(shù)被廣泛應(yīng)用到寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病研究領(lǐng)域，其中PCR技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便、敏感性高、特異性強(qiáng)和信息量豐富等優(yōu)點(diǎn)[33]，彌補(bǔ)了形態(tài)學(xué)分類上的不足和難以鑒別而得到了廣泛應(yīng)用。運(yùn)用分子生物學(xué)方法可以用于鑒別從形態(tài)學(xué)無(wú)法確定的殘損蟲(chóng)體及不典型的鉤蟲(chóng)成蟲(chóng)，同時(shí)也避免了免疫學(xué)方法易發(fā)生交叉反應(yīng)的情況，僅用小部分成蟲(chóng)蟲(chóng)體即可成功制備DNA并擴(kuò)增出目的條帶用于鑒定美洲鉤蟲(chóng)和十二指腸鉤蟲(chóng)且準(zhǔn)確性較高；但此方法對(duì)儀器設(shè)備有一定的要求，并且現(xiàn)有文獻(xiàn)僅證實(shí)用此方法可對(duì)兩種鉤蟲(chóng)的成蟲(chóng)和鉤蚴進(jìn)行分類鑒定，而對(duì)于蟲(chóng)卵是否有效還有待于進(jìn)一步探討證明。

5 結(jié) 語(yǔ)

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展許多傳統(tǒng)方法由于自身缺陷無(wú)法滿足現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的需要，促使人們尋找新的、快速準(zhǔn)確的工具進(jìn)行診斷和防治，而鑒定蟲(chóng)種可以評(píng)估驅(qū)蟲(chóng)藥物對(duì)兩種鉤蟲(chóng)相應(yīng)的療效，可以了解不同地區(qū)的優(yōu)勢(shì)鉤蟲(chóng)蟲(chóng)種，再選擇合適的驅(qū)蟲(chóng)藥物從而取得更好的藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)效益[34]。此外，鉤蟲(chóng)蟲(chóng)種的鑒定可以對(duì)監(jiān)控鉤蟲(chóng)的流行狀況也非常重要，能夠提供疾控部門兩種鉤蟲(chóng)在干預(yù)措施下的流行病學(xué)資料，評(píng)估疾病干預(yù)的效果等，對(duì)于鉤蟲(chóng)病的研究具有重大意義。

[1] 全國(guó)人體重要寄生蟲(chóng)病現(xiàn)狀調(diào)查辦公室.全國(guó)人體重要寄生蟲(chóng)病現(xiàn)狀調(diào)查報(bào)告[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2005，23(5增刊)：332-339.

[2] Hotez PJ,Bethony JM,Diemert DJ,etal.Devwloping vaccines to combat hookworm infection and intestinal schistosomiasis[J].Nat Rev Microbiol，2010，8(11)：814-826.

[3] Chan MS.The global burden of intestinal nematode infections fifty year on[J].Parasitol Today,1997，13(11)：438-443.

[4] Albonico M,Stoltzfus RJ,Savioli L,etal.Epidemiological evidence for a differential effect of hookworm species,Ancylostoma duodenale or Necator americanus,on iron status of children[J].Int J Epidemiol，1998，27(3)：530-537.

[5] Pawlowski ZS,Schad GA,Stott GJ.Hookworm infection and anaemia:approaches to prevention and control[M].Geneva:World Health Organization,1991.

[6] Haas W,Haberl B,Syafruddin,etal.Behacioural strategies used by the hookworms Necator americanus and Ancylostoma duodenale to find,recognize and invade the human host[J].Parasitol Res，2005，95(1)：30-39.

[7] Horton J.Albendazole:a review of anthelmintic efficacy and safety in humans[J].Parasitology，2000，121 Suppl：S113-S132.

[8] Bethony J,Brooker S,Albonico M,etal.Soil-transmitted helminth infections:ascariasis,trichuriasis,and hookworm[J].Lancet,2006,367(9521):1521-1532.

[9] 李雍龍.人體寄生蟲(chóng)學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2008：168-169.

[10] 陳佩惠.人體寄生蟲(chóng)學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1995：167.

[11] Glinz D,Silue KD,Knopp S,etal.Comparing diagnostic accuracy of Kato-Katz,Koga agar plate,ether-concentration,and FLOTAC for Schistosoma mansoni and soil-transmitted helminthes[J].PLoS Negl Trop Dis,2010，4：e754.

[12] 鄧大才.電子胃鏡診斷十二指腸鉤蟲(chóng)病30例分析[J].臨床消化病雜志，2009，21(6)：372-373.

[13] 劉紹田.十二指腸鉤蟲(chóng)病16例診治體會(huì)[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2011，8(4)：162.

[14] 陸海英.十二指腸鉤蟲(chóng)病72例內(nèi)鏡診斷及分析[J].內(nèi)科，2009，4(5)：744.

[15] 崔麗華.胃鏡對(duì)蟲(chóng)卵陰性鉤蟲(chóng)病的診斷價(jià)值[J].山西醫(yī)藥雜志，2011，40(4)：377.

[16] 丁云美.胃鏡下診斷治療十二指腸鉤蟲(chóng)病54例報(bào)道[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10(1)：148-149.

[17] 湯毅，孔紅梅.胃鏡診斷上消化道鉤蟲(chóng)94例臨床分析[J].華夏醫(yī)學(xué)，2011，24(4)：462-464.

[18] 王聲旺，葛昊平.結(jié)腸鏡診斷鉤蟲(chóng)病12例分析[J].罕少疾病雜志，2012，19(4)：56-57.

[19] 張鳴青，王愛(ài)民，張荔群，等.結(jié)腸鏡檢查盲腸鉤蟲(chóng)病10例[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2005，23(3)：158.

[20] Kshaunish D,Kausik D,Dasgupta J,etal.Hookworm infection presenting as overt gastrointestinal bleeding:lessons from double-balloon enteroscopy in the tropics[J].Am J Gastroenterol，2008，103(5)：1310.

[21] 付唆林，楊鐵一，姚彩芳，等.雙氣囊小腸鏡檢見(jiàn)小腸鉤蟲(chóng)病1例[J].江西醫(yī)藥，2005，40(10)：F0003.

[22] 陳佳敏，陳慶宇，陳焰，等.膠囊內(nèi)鏡檢查小腸鉤蟲(chóng)病9例[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2011，29(4)：301.

[23] 常江，和海玉，柳利明，等.膠囊內(nèi)鏡診斷十二指腸鉤蟲(chóng)致消化道大出血1例[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26(10)：1792.

[24] Christodoulou DK,Sigounas DE,Katsanos KH,etal.Small bowel parasitosis as cause of obscure gastrointestinal bleeding diagnosed by capsule endoscopy[J].World J Gastrointest Endosc,2010，2(11)：369-371.

[25] Carr A,Pritchard DI.Identification of hookworm(Necator americanus) antigens and their translation in vitro[J].Mol Biochem Parasitol,1986，19(2)：251-254.

[26] Prichard DI,Mckean PG,Rogan MT,etal.The identification of a species-specific antigen from Necator americanus[J].Parasite Immunol,1990,12(3):259-267.

[27] 聞禮永,鄧珊珊,任蘇平，等.鉤蟲(chóng)抗原組份分析及其免疫反應(yīng)性的研究[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)病防治雜志，2000，13(3)：187-189.

[28] 李鐵華，詹斌，John MH，等.美洲鉤蟲(chóng)及十二指腸鉤蟲(chóng)細(xì)胞色素C 氧化酶1基因測(cè)序[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，1999(2)：81-83.

[29] 鄭琪，沈海默，陳家旭，等.中國(guó)兩種鉤蟲(chóng)成蟲(chóng)的PCR蟲(chóng)種鑒定研究[J].國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)病雜志，2012，39(2)：94-97.

[30] 汪家旭，黃建煒，葉曦，等.SYBR Green熒光PCR檢測(cè)美洲鉤蟲(chóng)方法的建立[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2010，26(12)：1110-1113.

[31] Wang JX，Pan CS，Cui LW.Application of a real-time PCR method for detecting and monitoring hookworm Necator americanus infections in Southern China[J].Asian Pac J Trop Biomed，2012，2(12)：925-929.

[32] Gasser RB,Cantacessi C,Loukas A.DNA technological progress toward advanced diagnostic tools to support human hookworm control[J].Biotechnol Adv,2008，26(1)：35-45.

[33] 顏超,趙光輝,朱興全.PCR技術(shù)在寄生蟲(chóng)學(xué)研究中的應(yīng)用[J].國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)病雜志，2008，35(5)：231.

[34] Evans DB,Guyatt HL.The cost effectiveness of mass drug therapy for intestinal helminthes[J].Pharmacoeconomics，1995，8(1)：14-22.