孔令雷，李 樺

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所藥物代謝實驗室抗毒藥和毒理學國家重點實驗室，北京 100850)

RNA干擾技術(shù)在藥物轉(zhuǎn)運體研究中的應(yīng)用

孔令雷，李 樺

(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所藥物代謝實驗室抗毒藥和毒理學國家重點實驗室，北京 100850)

RNA干擾是一種利用雙鏈RNA分子特異的沉默靶基因表達的技術(shù),目前已廣泛用于基礎(chǔ)生物醫(yī)學研究。作為一種高選擇性和有效的基因調(diào)控手段,這一技術(shù)也已用于臨床疾病的治療研究和藥物轉(zhuǎn)運體的研究。藥物轉(zhuǎn)運體是一類細胞膜蛋白,在藥物的吸收、分布和排泄中發(fā)揮重要作用。轉(zhuǎn)運體功能的抑制或缺失將改變藥物的清除和藥代動力學,導致藥效降低或毒性增加。因此,在新藥研發(fā)以及藥物臨床應(yīng)用中,研究藥物轉(zhuǎn)運體在藥物跨膜轉(zhuǎn)運、組織分布、排泄清除和藥-藥相互作用中的作用,對于藥物的有效安全使用,具有重要意義。RNA干擾技術(shù)在藥物轉(zhuǎn)運體介導的藥物轉(zhuǎn)運和藥-藥相互作用研究方面,具有明顯的優(yōu)勢。本文對近年來RNA干擾技術(shù)在藥物轉(zhuǎn)運體研究中的應(yīng)用進行綜述,重點闡述這一技術(shù)在藥物轉(zhuǎn)運體介導的腫瘤耐藥、藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運、清除和相互作用研究中的應(yīng)用,為藥物轉(zhuǎn)運體的功能和調(diào)節(jié)研究提供參考。

RNA干擾；藥物轉(zhuǎn)運體；抗藥性,腫瘤；藥物相互作用；受體,胞質(zhì)和核

藥物轉(zhuǎn)運體是一類位于細胞膜、能將藥物攝取或排出細胞的蛋白或多肽，廣泛分布于體內(nèi)多種器官和組織，如肝、腸、腎和腦等，通過影響藥物的吸收、分布和排泄進而影響藥物的效應(yīng)或安全性，并導致藥物相互作用[1]。轉(zhuǎn)運體通過調(diào)控藥物在腸上皮細胞、肝細胞或腎小管上皮細胞的進出而影響藥物在小腸的吸收以及在肝和腎的消除。此外，轉(zhuǎn)運體也能限制或促進藥物在腦、胎盤、腫瘤等生理屏障或細胞的通透。轉(zhuǎn)運體功能的抑制或缺失將改變藥物在組織中的暴露，導致藥效降低或毒性增加。為此，在新藥物研發(fā)以及藥物的臨床應(yīng)用中，研究藥物轉(zhuǎn)運體在候選藥物或臨床藥物跨膜轉(zhuǎn)運、組織分布、排泄清除和藥物相互作用中的作用，對于藥物有效安全使用，具有重要的意義[2]。

RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)是21世紀初發(fā)現(xiàn)的一種有效的基因調(diào)節(jié)方法，并在基礎(chǔ)生物醫(yī)學研究領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用和快速發(fā)展。例如，研究基因功能，用于基因治療以及腫瘤治療等[3]。目前，多數(shù)藥物轉(zhuǎn)運體的基因已經(jīng)被鑒別和克隆，而 RNAi技術(shù)也已用于轉(zhuǎn)運體的研究中[2，4]。與傳統(tǒng)的基因敲除方法相比，RNAi是可逆的，使得其能通過可逆性抑制作用研究轉(zhuǎn)運體的體內(nèi)功能，或者用于促進有利于藥物臨床應(yīng)用的體內(nèi)處置；再者，RNAi能特異性地抑制靶基因的表達，避免化學抑制劑因轉(zhuǎn)運蛋白基因之間具有高度的同源性而導致的非特異性，在藥物體內(nèi)處置和藥物相互作用研究中，具有良好的應(yīng)用前景。本文將對近年來RNAi技術(shù)在藥物轉(zhuǎn)運體研究中的應(yīng)用進行綜述，重點總結(jié)這一技術(shù)在藥物轉(zhuǎn)運體介導的腫瘤耐藥、藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運、清除和相互作用研究中的應(yīng)用，為藥物轉(zhuǎn)運體的功能和調(diào)節(jié)研究提供參考。

1 藥物轉(zhuǎn)運體

已知的藥物轉(zhuǎn)運體分為兩類:ATP-結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體(ATP-binding cassette，ABC)和溶質(zhì)載體(solute carrier，SLC)[5]。ABC類轉(zhuǎn)運體主要通過ATP供能介導細胞對藥物的外排，與藥物外排轉(zhuǎn)運相關(guān)的轉(zhuǎn)運體主要有 P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)，多藥耐藥相關(guān)蛋白(multi-drug resistanceassociated protein，MRP)和乳腺癌耐藥蛋白(breast cancer resistance protein，BCRP)等。SLC類轉(zhuǎn)運體主要介導細胞對藥物的攝取，包括有機陰離子轉(zhuǎn)運體(organic anion transporter，OAT)、有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽(organic anion transport polypeptides，OATP)、有機陽離子轉(zhuǎn)運體(organic cation transporter，OCT)等[6]。攝取和外排轉(zhuǎn)運體通過動態(tài)的相互作用共同調(diào)節(jié)細胞內(nèi)藥物或內(nèi)源性物質(zhì)的蓄積和轉(zhuǎn)運。

藥物轉(zhuǎn)運體具有多樣性和復雜性，藥物轉(zhuǎn)運體家族存在多個亞家族和亞型，如ABCC亞家族包括12種亞型(ABCC1～ABCC12)，這些轉(zhuǎn)運體亞型之間有大量重疊的底物，而有些重疊的底物也是藥物代謝酶的誘導劑或抑制劑。因此，在缺少藥物基因組學信息的情況下，很難確定不同轉(zhuǎn)運體在藥物轉(zhuǎn)運分布及藥物相互作用中的作用。

2 RNA干擾技術(shù)

RNAi是由雙鏈RNA介導的序列特異的基因沉默現(xiàn)象，它在轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平上阻斷基因的表達，具有高效性和高特異性的特點[7]。RNAi不僅已廣泛用于基因功能研究，作為一種高選擇性和有效性的治療方法也已經(jīng)用于臨床研究[3]。RNAi通過內(nèi)源性微小RNA(miRNA)或外源性的小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA (shRNA)發(fā)揮作用。化學合成的siRNA應(yīng)用簡單方便，但由于缺少細胞內(nèi)的放大機制，只能對靶基因產(chǎn)生暫時的抑制作用，其有效性取決于靶序列，轉(zhuǎn)染方式和靶蛋白的半衰期。載體或病毒介導的shRNA主要由生物化學和基因的方法合成，通過質(zhì)?；虿《据d體進入細胞后能夠?qū)Π谢虍a(chǎn)生長效穩(wěn)定的抑制作用，其有效性取決于shRNA的優(yōu)化、載體的選擇以及有效的傳遞方式[8]。miRNA是一種高度保守的小的非編碼RNA，由接近20～25 nt的單鏈RNA分子組成，能夠在轉(zhuǎn)錄后水平對靶基因進行調(diào)節(jié)，對細胞生理和病理功能發(fā)揮重要作用。目前，siRNA，shRNA和miRNA均已在藥物轉(zhuǎn)運體研究得到應(yīng)用。

3 RNA干擾技術(shù)逆轉(zhuǎn)藥物轉(zhuǎn)運體相關(guān)的腫瘤耐藥

耐藥性是導致腫瘤和其他疾病治療失敗的主要原因之一。耐藥性產(chǎn)生的主要機制包括細胞內(nèi)可溶性藥物吸收的減少、細胞內(nèi)遺傳和表型的改變以及疏水性藥物通過細胞表面轉(zhuǎn)運體外排的增加[9]。其中，外排轉(zhuǎn)運體介導的藥物外排所致的耐藥性發(fā)生，是目前研究的熱點。外排轉(zhuǎn)運體P-gp，MRP和BCRP的表達上調(diào)是耐藥性產(chǎn)生的主要機制，已成為腫瘤化學治療的主要障礙[10－11]。通過抑制藥物轉(zhuǎn)運體的表達和功能，可增加耐藥細胞的藥物暴露，是目前逆轉(zhuǎn)藥物耐受的主要手段之一。但是，臨床上應(yīng)用化學抑制劑克服腫瘤耐藥的療效有限，且會引起嚴重的毒性反應(yīng)[12]。而RNAi技術(shù)能特異性地抑制轉(zhuǎn)運體基因的表達和功能，提高化學治療效果，降低因化學抑制劑帶來的風險，為逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥提供了新的思路和方法。

近期的研究表明，針對外排轉(zhuǎn)運體的siRNA實驗研究，展示了該技術(shù)能顯著抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)運體表達和功能，成功逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥，提高化學治療的效果。表1匯總了RNAi技術(shù)在藥物耐藥性研究中的應(yīng)用文獻。多柔比星和表柔比星均屬阿霉素類藥物，能夠有效地治療多種惡性腫瘤。研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用MDR1的siRNA能夠抑制耐多柔比星的MCF-7乳腺癌細胞中MDR1的蛋白表達，恢復多柔比星在細胞內(nèi)的累積和分布，提高耐藥細胞對多柔比星的化學敏感性[13－14]。在多種人腫瘤細胞系中，MRP1的siRNA能夠明顯抑制MRP1 mRNA和蛋白的表達，提高表柔比星對腫瘤細胞的有效性[15]。Pichler等[16]用生物素發(fā)光的方法發(fā)現(xiàn)，RNAi技術(shù)能夠分別有效抑制MDR1在腫瘤細胞、小鼠腫瘤組織以及肝的表達和功能，說明 RNAi技術(shù)在體內(nèi)逆轉(zhuǎn)MDR1的可行性。Patutina和Matsui[17－18]兩課題組分別通過特異的mdr1a/1b siRNA，同時抑制mdr1a/1b在小鼠體內(nèi)的表達，提高了化學治療的敏感性。此外，Honjo等[19]報道應(yīng)用siRNA能夠有效抑制成纖維樣滑膜細胞和大鼠滑膜中的P-gp表達，提高地塞米松的抗炎作用，改善類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療。RNAi作為一種高效的序列特異性的基因敲除技術(shù)，在多基因調(diào)控的耐藥治療領(lǐng)域取得了迅速發(fā)展，展現(xiàn)了很好的應(yīng)用前景。

表1 RNA干擾技術(shù)在逆轉(zhuǎn)耐藥性研究中的應(yīng)用

4 RNA干擾技術(shù)在藥物處置研究中的應(yīng)用

轉(zhuǎn)運體通過調(diào)控藥物在腸上皮細胞、肝細胞和腎小管上皮細胞的攝取和外排，影響藥物在小腸的吸收以及在肝和腎的消除；轉(zhuǎn)運體也能調(diào)控藥物在腦、胎盤、腫瘤和T細胞等的通透性，影響藥物在這些組織器官或細胞的分布，從而改變藥物在體內(nèi)的處置行為。鑒別藥物是否是轉(zhuǎn)運體的底物、抑制劑或誘導劑，以及評價不同轉(zhuǎn)運體在某個藥物處置中的作用，是轉(zhuǎn)運體介導的藥物處置研究中首先要解決的問題。轉(zhuǎn)運體底物的鑒別多用化學抑制劑或重組的表達系統(tǒng)來進行。由于化學抑制劑多存在非特異性和底物交叉性，并不能真實反映轉(zhuǎn)運體在底物轉(zhuǎn)運中的作用。另外，重組表達系統(tǒng)如轉(zhuǎn)染Madin-Darby犬腎細胞(MDCK)-MDR1等雖然能夠特異性地鑒別某種轉(zhuǎn)運體的底物，但由于轉(zhuǎn)運體數(shù)量眾多，且構(gòu)建重組系統(tǒng)需要較長時間，限制了重組系統(tǒng)的應(yīng)用[29]?；蚯贸齽游锬Ｐ驮隗w內(nèi)基因功能的研究中發(fā)揮了重要的作用。經(jīng)典的敲除方法主要通過破壞靶基因結(jié)構(gòu)如內(nèi)源性序列的缺失，外源性序列的插入來完成的?；赗NAi的特異性及其不改變基因組結(jié)構(gòu)的特點，RNAi技術(shù)已成為建立功能缺失細胞和動物模型的一種新方法，對于轉(zhuǎn)運體功能研究和底物鑒別也是一種非常有效的技術(shù)，表2匯總的文獻研究表明，該技術(shù)已經(jīng)廣泛用于這一目的。

Caco-2單層細胞表達有多種外排轉(zhuǎn)運體，主要用于藥物的雙向轉(zhuǎn)運研究。Darnell等[30]將慢病毒介導的P-gp和MRP2的shRNA導入Caco-2細胞中，研究了P-gp和MRP2在抗凝血藥希美加群(ximelagatran)排泄中的作用。他們發(fā)現(xiàn)，是P-gp而不是MRP2參與了希美加群、羥基美拉加群和美拉加群的轉(zhuǎn)運。Li等[31]采用慢病毒介導的P-gp，MRP2和BCRP的shRNA，在Caco-2細胞上研究了他汀類藥物的外排作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀、氟伐他汀和羅舒伐他汀由P-gp、BCRP和MRP2介導外排轉(zhuǎn)運，而洛伐他汀和辛伐他汀的轉(zhuǎn)運則不通過P-gp，BCRP和MRP2的介導。上述研究表明，將RNAi技術(shù)與Caco-2細胞模型相結(jié)合，為藥物和轉(zhuǎn)運體相互作用的研究提供了一個有效工具，在RNAi的Caco-2細胞上，可以評價特定轉(zhuǎn)運體在藥物跨膜轉(zhuǎn)運中的作用，并預(yù)測潛在的藥物相互作用。

表2 RNA干擾技術(shù)在轉(zhuǎn)運體功能和底物鑒別中的應(yīng)用

原代培養(yǎng)肝細胞表達Ⅰ相和Ⅱ相代謝酶以及多種轉(zhuǎn)運體，與生理環(huán)境接近，已廣泛用于轉(zhuǎn)運體介導的藥物肝攝取、代謝和膽汁排泄研究，并可準確地預(yù)測肝膽藥物分布[32]。Liao等[33]將 OATP1B1，1B3和2B1的siRNA導入三明治培養(yǎng)的人肝細胞中，顯著降低肝OATP的表達，西立伐他汀的肝攝取由此降低了20%～30%，其代謝產(chǎn)物的肝攝取也降低50%。siRNA干擾肝細胞的結(jié)果提示，同時服用OATP抑制劑能顯著地改變西立伐他汀的藥代動力學，引起藥物相互作用。

由于人肝細胞的供體較少且價格昂貴，限制了其在藥物轉(zhuǎn)運體研究中的應(yīng)用。三明治培養(yǎng)的大鼠肝細胞由于分離培養(yǎng)相對簡單方便，可廣泛用于藥物肝攝取和膽汁外排的研究[34]。Yue等[35]應(yīng)用腺病毒介導的BCRP shRNA，成功敲除大鼠肝細胞的BCRP，而不影響P-gp，MRP2，BSEP，MRP4和OATP1A1的表達。應(yīng)用這一BCRP敲除模型評價呋喃妥因的肝處置發(fā)現(xiàn)，呋喃妥因的肝細胞內(nèi)濃度顯著增加，而呋喃妥因的膽管外排指數(shù)和體外膽汁清除率分別降至對照組的11%和14%，表明呋喃妥因的膽汁排泄主要由BCRP介導，與BCRP抑制劑或誘導劑同時服用，可能引起藥物相互作用。

現(xiàn)有文獻報道已經(jīng)證實，siRNA在體外細胞模型上的特異性和有效性，應(yīng)用siRNA評價體內(nèi)轉(zhuǎn)運體對藥物處置的作用及調(diào)節(jié)成為下一個研究熱點，但目前的文獻報道較少。van de Water等[36]通過靜脈注射放射性標記的siRNA觀察其生物學分布發(fā)現(xiàn)，siRNA主要聚集在腎并經(jīng)尿排泄。注射1 h后，腎中的siRNA含量比其他組織高40倍。除此之外，該研究還通過注射MRP2 siRNA，觀察了腎近曲小管中MRP2的功能。注射MRP2 siRNA 4 d后，尿中的鈣黃綠素排泄率顯著下降。而MRP4 siRNA不能改變鈣黃綠素的排泄。因此，siRNA為研究腎轉(zhuǎn)運體的功能提供了新的方法。

5 RNA干擾技術(shù)在核受體調(diào)節(jié)藥物轉(zhuǎn)運體研究中的應(yīng)用

鑒于藥物轉(zhuǎn)運體在藥物的吸收、分布和排泄中發(fā)揮的重要作用，其表達和功能的調(diào)節(jié)對于藥物的有效和安全應(yīng)用具有重要意義。轉(zhuǎn)運體的表達和功能主要受到核受體調(diào)控[43－44]，后者通過調(diào)節(jié)藥物轉(zhuǎn)運體基因的表達進而對內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的轉(zhuǎn)運產(chǎn)生重大影響，導致不可預(yù)知的藥物相互作用的發(fā)生。核受體家族主要包括孕烷X受體(pregnane X receptor，PXR)、組成型雄烷受體(constitutive androstane receptor，CAR)和芳香烴受體(aryl hydrocarbon receptor，AHR)等，廣泛參與藥物轉(zhuǎn)運體的調(diào)節(jié)[45－46]。表3總結(jié)了RNAi技術(shù)在核受體調(diào)控藥物轉(zhuǎn)運體研究中的部分應(yīng)用。

PXR和CAR是調(diào)節(jié)藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運體的主要核受體，在多種癌細胞中的表達增高，如前列腺癌、乳腺癌、腸癌、結(jié)腸癌和子宮內(nèi)膜癌等，對Ⅰ相及Ⅱ相代謝酶和外排轉(zhuǎn)運體的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)發(fā)揮重要作用。因此，PXR和CAR與腫瘤的耐藥性密切相關(guān)，RNAi通過抑制核受體的激活使轉(zhuǎn)運體的表達下調(diào)，從而逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性[47]。PXR是調(diào)節(jié)藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運體基因的最重要的核受體，在許多組織和細胞中表達，包括肝細胞、腸細胞、淋巴細胞、內(nèi)皮細胞和血腦屏障等。PXR的激活能調(diào)節(jié)多種轉(zhuǎn)運體，包括P-gp，MRP2，BCRP和OATP等。Rigalli等[48]研究了抗南美錐蟲藥芐硝唑?qū)BC轉(zhuǎn)運體和代謝酶的調(diào)節(jié)作用發(fā)現(xiàn)，芐硝唑能增加P-gp和MRP2的蛋白表達，而給予PXR siRNA后則完全逆轉(zhuǎn)P-gp和MRP2的上調(diào)；隨后他們用報告基因法發(fā)現(xiàn)，芐硝唑能激活PXR，應(yīng)用P-gp siRNA證實了P-gp參與了芐硝唑的轉(zhuǎn)運。這些結(jié)果表明，芐硝唑通過激活PXR使P-gp的表達上調(diào)，進而增加了其自身的外排。利尿藥螺內(nèi)酯同樣可以誘導P-gp的表達，給予PXR的siRNA可使PXR的蛋白水平降低74%，并完全逆轉(zhuǎn)螺內(nèi)酯對P-gp的誘導作用[49]。這些研究結(jié)果提示，PXR的配體藥物通過激活PXR誘導P-gp的表達，使P-gp底物的自身轉(zhuǎn)運和代謝等藥代動力學行為發(fā)生改變，從而影響其有效性和安全性。

表3 RNA干擾技術(shù)在核受體調(diào)節(jié)藥物轉(zhuǎn)運體研究中的應(yīng)用

CAR功能與PXR相似，能識別許多結(jié)構(gòu)不同的化合物，如雄甾烷代謝產(chǎn)物、膽酸等。最近的研究表明，CAR調(diào)節(jié)的基因與PXR存在很大重疊性，如CYP酶、Ⅱ相酶、膽酸和藥物轉(zhuǎn)運體等[50－51]。CAR主要分布在肝、腎、小腸、腦和睪丸等組織。CAR激動劑CITCO能夠上調(diào)卵巢癌細胞中MDR1和UGT1A1的表達，CAR的siRNA能下調(diào)MDR1和UGT1A1的表達，同時促進抗癌藥物引起的細胞生長抑制和凋亡，提高卵巢癌的化學治療[52]。

肝X受體(liver X receptor，LXR)屬于核激素受體超家族，分為LXRα和LXRβ。LXRβ在全身分布廣泛，LXRα則主要分布于肝、腎、小腸和脂肪組織。LXR激動劑TO901317能誘導肝MRP2的表達，但對MDR1和BCRP沒有影響，給予LXRα的siRNA能阻斷 MRP2的表達，表明 LXR參與了MRP2的調(diào)控，可能會影響藥物的膽汁排泄[53]。因此，應(yīng)用RNAi技術(shù)不僅有助于了解核受體對靶基因調(diào)控的作用，還可以對藥物轉(zhuǎn)運的潛在作用有更深的理解。

6 展望

目前，已發(fā)現(xiàn)的藥物轉(zhuǎn)運體超過400種，多數(shù)轉(zhuǎn)運體已經(jīng)被克隆和鑒別。面對如此眾多的轉(zhuǎn)運體，鑒別其在藥物轉(zhuǎn)運中的功能并用于疾病的治療，成為研究的熱點。RNAi技術(shù)將大大促進對這些轉(zhuǎn)運體基因功能的研究，與傳統(tǒng)的基敲除技術(shù)相比，RNAi技術(shù)具有投入少，周期短，操作簡單等優(yōu)勢。隨著對RNAi機制研究的不斷深入，RNAi技術(shù)將成為研究藥物轉(zhuǎn)運體基因功能不可或缺的工具。此外，隨著藥物轉(zhuǎn)運體基因功能的闡明，在臨床上應(yīng)用特異干擾RNA與化學藥物聯(lián)合治療可以提高藥物的療效，避免藥物不良反應(yīng)。

雖然RNAi技術(shù)以其特異性和高效性在生物學領(lǐng)域中迅速發(fā)展，取得許多令人振奮的研究成果，但仍有下列問題需要解決。① siRNA的有效性。siRNA的有效性受多種因素的影響，包括靶序列，有效的傳遞系統(tǒng)以及靶蛋白的半衰期。目前，siRNA的設(shè)計方法已經(jīng)取得很大進展，但有效siRNA序列的選擇仍然是一個技術(shù)難題，siRNA的有效性需要反復進行實驗篩選。哺乳動物細胞內(nèi)缺少RNAi擴增機制，siRNA分子或表達載體能否進入每一個靶細胞是基因敲除成功的關(guān)鍵。但是由于轉(zhuǎn)染細胞的類型不同以及轉(zhuǎn)染試劑的毒性使轉(zhuǎn)染過程的優(yōu)化比較困難。藥物轉(zhuǎn)運體通常具有較長的半衰期，轉(zhuǎn)染后觀察到蛋白敲除和功能改變需要較長的時間。此外，影響siRNA有效性的另一個主要問題是脫靶效應(yīng)即非靶基因的抑制，導致siRNA非特異性的發(fā)生[58]。②siRNA的傳遞系統(tǒng)。siRNA的大小及其所帶的負電荷使其很難穿過細胞膜，因此應(yīng)用中最重要的步驟是將siRNA有效傳遞進入靶細胞。目前，脂質(zhì)體、納米材料等已經(jīng)成功的用于siRNA的傳遞，但是尚未從根本上解決問題[59]。③毒性反應(yīng)。siRNA或shRNA的導入可能激活體內(nèi)干擾素反應(yīng)基因，非特異性地全面抑制內(nèi)源性mRNA的翻譯，并導致細胞凋亡。另外，雙鏈RNA通過與RNA結(jié)合蛋白相互作用也能夠引起自身免疫反應(yīng)[60]。雖然RNAi技術(shù)還存在以上問題，但隨著RNAi機制的逐漸闡明，這些問題將有望得到解決。

總之，RNAi技術(shù)被認為是基因治療，轉(zhuǎn)運體功能研究和藥物研發(fā)中的一項革命性方法。目前，RNAi已經(jīng)成功用于逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)運體介導的腫瘤耐藥性、轉(zhuǎn)運體功能和底物鑒別研究和藥物基于轉(zhuǎn)運體的相互作用研究。RNAi技術(shù)的特異性和有效性使之成為研究藥物轉(zhuǎn)運體的有效工具，將有望在藥物代謝、腫瘤治療等方面發(fā)揮重要作用。

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RNA interference technique and its appIication to drug transporter research

KONG Ling-lei，LI Hua
(State Key Laboratory of Toxicology and Medical Countermeasures，Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics，Institute of Pharmacology and Toxicology，Academy of Military Medical Sciences，Beijing 100850，China)

RNA interference(RNAi)is a powerful technique that utilizes double-stranded RNA molecules to specifically knock down the expression of the targeted gene.The RNAi technique has a broad application to basic biomedical research.Thanks to its high selectivity and effectivity，this technique is also used clinically as a disease intervention and therapeutic method as well as in the research of drug transporters.Drug transporters are membrane proteins that play important roles in the absorption，distribution and elimination of a wide range of drugs.Inhibition or deletion of transporters may affect clearance and pharmacokinetics of drugs and lead to altered toxicity or therapeutic efficacy.Therefore，in drug development and clinical application，it has become critically important to characterize the roles of transporters in transmembrane transport，tissue distribution，clearance of drugs and drug-drug interactions. However，the diversity and complexity of transporters make it difficult to identify and confirm the role of transporters in drug transportation and drug-drug interactions using chemical inhibitors of transporters. RNAi is an excellent method in delineating their specific roles in drug distribution，elimination and drugdrug interactions.This article reviews recent studies using RNAi to silence gene expression of specific transporters and the application to the research of transporters mediated cancer resistance，drug disposition，clearance and drug-drug interactions.

RNA interference；drug transporter；drug resistance，neoplasm；drug interaction；receptors，cytoplasmic and nucler

LI Hua，Tel:(010)66930664，E-mail:amms＿hli＠126.com

R965.2

:A

:1000-3002(2014)06-0939-08

10.3867/j.issn.1000-3002.2014.06.018

Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China(81302760)；The Chinese Postdoctoral Science Foundation Project(2013M542510)；National Science and Technology Major Project of China (2008ZXJ09006001)；and National Science and Technology Major Project of China(2012ZX09301003-001)

2014-08-18 接受日期:2014-11-18)

(本文編輯:喬 虹)

國家自然科學基金(81302760)；中國博士后基金(2013M542510)；國家科技重大專項(2008ZXJ09006001)；國家科技重大專項(2012ZX09301003-001)

孔令雷(1982－)，男，博士后，主要從事神經(jīng)藥理及藥物代謝研究。

李 樺，Tel:(010)66930664，E-mail: amms＿hli＠126.com